【摘要】：背景:慢性偏頭痛(chronic migraine,CM)的病理生理機制目前尚不清楚,大量的研究認(rèn)為中樞致敏和神經(jīng)元活性的持續(xù)增高與之有關(guān)。我們前期的研究發(fā)現(xiàn)三叉神經(jīng)脊束核尾核(Trigeminal nucleus caudalis,TNC)N-甲基-D-天門冬氨酸受體(N-methyl-D-aspartate receptor,NMDAR)NR2B亞基的酪氨酸磷酸化有助于脊髓中樞致敏和持續(xù)性疼痛。中樞致敏通常被認(rèn)為與突觸傳遞效率的增加有關(guān),但NR2B-Tyr磷酸化是否通過調(diào)節(jié)突觸可塑性的變化參與CM的中樞致敏機制目前尚不清楚。在本研究中,我們的目的是探究NR2B-Tyr磷酸化是否通過調(diào)控突觸可塑性參與慢性偏頭痛模型大鼠的中樞致敏機制。材料與方法:1.實驗分組:成年雄性SD大鼠隨機分為7組。A、sham組,硬腦膜外連續(xù)滴注PBS,2μl,共7天。B、CM組,硬腦膜外連續(xù)滴注IS,2μl,共7天。C、CM+DMSO組,硬腦膜外連續(xù)滴注7天2μl的IS后,側(cè)腦室給予DMSO,5μl。D、CM+PP2高劑量組,硬腦膜外連續(xù)滴注7天2μl的IS后,側(cè)腦室給與5μl高濃度的PP2。E、CM+PP2低劑量組,硬腦膜外連續(xù)滴注7天2 μl的IS后,側(cè)腦室給與5 μl低濃度的PP2。F、CM+genistein高劑量組,硬腦膜外連續(xù)滴注7天2 μl的IS后,側(cè)腦室給與5 μl高濃度的genistein。G、CM+genistein低劑量組,硬腦膜外連續(xù)滴注7天2 μl的IS后,側(cè)腦室給與5 μl低濃度的genistein。2.硬腦膜外連續(xù)給予IS或PBS,共7天,反復(fù)激活硬腦膜傳入神經(jīng),模擬偏頭痛的發(fā)作,建立慢性偏頭痛大鼠模型。3.給予NR2B-Tyr磷酸化抑制劑PP2和genistein,然后使用Von Frey test法測定大鼠眶周及足底的機械痛閾值,Western blot和免疫熒光技術(shù)檢測NR2B、NR2B-pTyr、CGRP以及相關(guān)突觸可塑性蛋白指標(biāo)如PSD95、Syp、Syt-1表達(dá)水平變化,定位情況和熒光強度變化,透射電鏡觀察TNC部位Gray I突觸的超微結(jié)構(gòu),Golgi-cox染色法對神經(jīng)纖維染色,觀察TNC部位樹突棘數(shù)量的變化。結(jié)果:1.CM組相較于Sham組,大鼠眶周及足底的機械痛閾值均顯著降低,給予以高劑量NR2B-Tyr磷酸化抑制劑PP2和genistein后大鼠眶周及足底的痛覺過敏明顯緩解。2.CM組NR2B-pTyr水平與sham組相比顯著增高,CGRP及突觸可塑性相關(guān)蛋白PSD95、Syp、Syt-1的表達(dá)水平和熒光強度均顯著增高,但NR2B的總蛋白表達(dá)水平在兩組大鼠中并沒有明顯變化。透射電鏡結(jié)果顯示與sham大鼠相比,CM大鼠TNC神經(jīng)元的突觸超微結(jié)構(gòu)表現(xiàn)出突觸后致密物增厚,突觸間隙增寬,突觸界面曲率明顯增大,突觸活性區(qū)長度明顯增長的現(xiàn)象。Golgi-cox結(jié)果顯示CM大鼠TNC部位樹突棘密度明顯增加。3.給予高劑量NR2B-Tyr磷酸化抑制劑PP2和genistein后NR2B-pTyr水平在大鼠TNC部位明顯降低,CGRP及突觸可塑性相關(guān)蛋白PSD95、Syp、Syt-1蛋白表達(dá)水平和熒光強度均明顯降低。透射電鏡結(jié)果顯示PP2和genistein的施用逆轉(zhuǎn)了 TNC部位突觸后致密物的增厚,突觸間隙的增寬、突觸界面曲率和突觸活性區(qū)長度的增加。Golgi-cox結(jié)果顯示與CM+DMSO組大鼠相比,CM大鼠TNC部位樹突棘密度明顯減少。結(jié)論:1.硬腦膜外反復(fù)滴注1S后,大鼠眶周及足底的機械痛閾值均顯著降低,表明CM模型成功建立;2.NR2B-Tyr磷酸化水平增高促進CM的發(fā)生;3.NR2B-Tyr磷酸化調(diào)控突觸結(jié)構(gòu)可塑性相關(guān)蛋白PSD95、Syp和Syt-1的表達(dá),同時改變突觸的超微結(jié)構(gòu),提示NR2B-Tyr磷酸化調(diào)控突觸可塑性參與CM的病理生理過程。
【圖文】：

圖１對照組（ＰＢＳ）與ＣＭ組（ＩＳ）大鼠眶周及足底痛閾值逡逑Ｆｉｇ．ｌ邋Ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ邋ｏｆ邋ｍｅｃｈａｎｉｃａｌ邋ａｌｌｏｄｙｎｉａ邋ｉｎ邋ｒａｔｓ逡逑（Ａ）邋Ｔｈｅ邋ｐａｉｎ邋ｔｈｒｅｓｈｏｌｄｓ邋ｏｆ邋ｔｈｅ邋ｐｅｒｉｏｒｂｉｔａｌ邋ｒｅｇｉｏｎ邋ｗｅｒｅ邋ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ邋ｄｅｃｒｅａｓｅｄ邋ａｆｔｅｒ邋ｔｈｒｅｅ邋ｄａｙｓ逡逑ＩＳ邋ｉｎｆｕｓｉｏｎｓ邋ｃｏｍｐａｒｅｄ邋ｗｉｔｈ邋ｔｈｏｓｅ邋ｄｅｔｅｃｔｅｄ邋ａｆｔｅｒ邋ｔｈｒｅｅ邋ｄａｙｓ邋ｏｆ邋ＰＢＳ邋ｉｎｆｕｓｉｏｎｓ．邋（Ｂ）邋Ａ邋ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ逡逑ｒｅａｓｅ邋ｉｎ邋ｔｈｅ邋ｈｉｎｄｐａｗ邋ｔｈｒｅｓｈｏｌｄｓ邋ｗａｓ邋ｏｂｓｅｒｖｅｄ邋ａｆｔｅｒ邋ｔｈｒｅｅ邋ｄａｙｓ邋ｏｆ邋ＩＳ邋ｉｎｆｕｓｉｏｎｓ邋ｃｏｍｐａｒｅｄ邋ｗｉｔｈ逡逑ｓｅ邋ｄｅｔｅｃｔｅｄ邋ａｆｔｅｒ邋ｔｈｒｅｅ邋ｄａｙｓ邋ｏｆ邋ＰＢＳ邋ｉｎｆｕｓｉｏｎｓ邋（＊ｐ邋＜邋０．０１）．逡逑硬腦膜外反復(fù)滴注ＩＳ后，大鼠ＴＮＣ部位ＮＲ２Ｂ－ｉｙｒ磷酸化水平明顯增加逡逑為了研究ＮＲ２Ｂ及其磷酸化形式在ＣＭ大鼠ＴＮＣ部位的變化，我們觀察了逡逑２Ｂ及其相關(guān)磷酸化位點在ＣＭ大鼠中的表達(dá)水平（圖２）。我們發(fā)現(xiàn)總ＮＲ２Ｂ逡逑蛋白水平在兩組大鼠ＴＮＣ部位表達(dá)無明顯差異，而ＣＭ組ＮＲ２Ｂ受體亞基在酪逡逑１４７２和１２５２位點磷酸化水平較ｓｈａｍ組顯著升高（／？＜０．０５）。這說明ＮＲ２Ｂ逡逑氨酸磷酸化是其主要的激活方式，也與我們的設(shè)想一致。逡逑５邐ＣＭ逡逑ＰＮＲ２Ｂ－Ｙ１４７２邐＿邋ｉｉ邋１＾１＾１邋冊ｋＤａ逡逑

２．２硬腦膜外反復(fù)滴注ＩＳ后，大鼠ＴＮＣ部位ＮＲ２Ｂ－ｉｙｒ磷酸化水平明顯增加逡逑為了研究ＮＲ２Ｂ及其磷酸化形式在ＣＭ大鼠ＴＮＣ部位的變化，我們觀察了逡逑ＮＲ２Ｂ及其相關(guān)磷酸化位點在ＣＭ大鼠中的表達(dá)水平（圖２）。我們發(fā)現(xiàn)總ＮＲ２Ｂ逡逑的蛋白水平在兩組大鼠ＴＮＣ部位表達(dá)無明顯差異，，而ＣＭ組ＮＲ２Ｂ受體亞基在酪逡逑氨酸１４７２和１２５２位點磷酸化水平較ｓｈａｍ組顯著升高（／？＜０．０５）。這說明ＮＲ２Ｂ逡逑的酪氨酸磷酸化是其主要的激活方式，也與我們的設(shè)想一致。逡逑５邐ＣＭ逡逑ＰＮＲ２Ｂ－Ｙ１４７２邐＿邋ｉｉ邋１＾１＾丨邋１邋冊ｋＤａ逡逑ＰＮＲ２Ｂ－Ｙ１２５２邋？邋＾邐＾邐１６６ｋＤａ逡逑ｔＮＲ２Ｂ邋｜邐１Ｓ６ｋＤａ逡逑Ｐ－ａｃｔｉｎ邋Ｉ逡逑２．０－ｊ邐＾邋Ｓ逡逑＊邐■邋ＣＭ逡逑丨：ｎ＿逡逑ｇ：ｉｎｉ邐ｎｉ邐ｉｎ逡逑＾邐Ｗ邐，逡逑圖２對照組（ＰＢＳ）與ＣＭ組（ＩＳ邋）大鼠ＴＮＣ部位ＮＲ２Ｂ蛋白表達(dá)水平及其Ｙ１４７２與Ｙ１２５２逡逑位點路l#酸淲酸化水平逡逑Ｆｉｇ．邋２邋Ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ邋ｏｆ邋ＮＲ２Ｂ邋ａｎｄ邋ｔｙｒｏｓｉｎｅ－ｐｈｏｓｐｈｏｒｙｌａｔｅｄ邋ＮＲ２Ｂ邋ｉｎ邋ｔｈｅ邋ＴＮＣ邋ｏｆ邋ＣＭ邋ｒａｔｓ逡逑（Ａ）邋Ｒｅｐｒｅｓｅｎｔａｔｉｖｅ邋ｗｅｓｔｅｒｎ邋ｂｌｏｔｓ邋ｏｆ邋ＮＲ２Ｂ－Ｙ１４７２
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R747.2

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1 朱旭紅;張萍淑;程贊贊;孟燕;張利平;元小冬;;突觸可塑性相關(guān)蛋白及其與臨床疾病的關(guān)系[J];華北理工大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2017年03期

2 范鳴s

本文編號：2667091