【摘要】：目的:腦膠質(zhì)瘤是臨床最常見的神經(jīng)系統(tǒng)惡性腫瘤之一,占整個(gè)神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的40%-45%,嚴(yán)重影響人類健康。腦膠質(zhì)瘤起源尚無定論,很多學(xué)者認(rèn)為起源于神經(jīng)外胚層的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞或者其始祖細(xì)胞,生物學(xué)上膠質(zhì)瘤以星形細(xì)胞瘤和膠質(zhì)母細(xì)胞瘤最為多見。由于腦膠質(zhì)瘤惡性程度較高,容易復(fù)發(fā),所以預(yù)后相對較差。其中高級別膠質(zhì)瘤患者雖經(jīng)手術(shù)、放療及化療等多種治療手段的干預(yù),但死亡率仍高達(dá)98%以上,2年生存率僅為20%,因此提高療效,延長患者的生存期成為亟待解決的一大難題�；熓悄X膠質(zhì)瘤術(shù)后治療的主要手段,但是由于血腫瘤屏障(blood-tumor barrier,BTB)極大的限制了抗腫瘤藥物進(jìn)入中樞神經(jīng)系統(tǒng),從而嚴(yán)重影響了化療效果。因此,選擇性地增加BTB的通透性是一個(gè)理想的策略。藥物通過BTB進(jìn)入腦組織的主要方式包括開放緊密連接的細(xì)胞旁途徑和增加吞飲小泡數(shù)量的跨細(xì)胞途徑。內(nèi)皮-單核細(xì)胞激活多肽酶Ⅱ(endothelialmonocyte activating polypeptide-Ⅱ,EMAP-Ⅱ)是在甲基膽蒽誘導(dǎo)形成的纖維肉瘤上清中發(fā)現(xiàn)提取,具有許多生物活性。具有促進(jìn)腫瘤凋亡,抑制腫瘤新生血管,使TNF-α和NO表達(dá)上調(diào),介導(dǎo)炎癥反應(yīng),以及提高血腫瘤屏障通透性等作用,這能夠?yàn)樘岣吣X膠質(zhì)瘤化療療效提供幫助。研究結(jié)果證實(shí),EMAP-II能夠通過細(xì)胞旁途徑和跨細(xì)胞途徑選擇性增加BTB通透性,但具體分子機(jī)制需進(jìn)一步深入研究。蛋白、多肽等親水性化療藥物主要通過開放緊密連接的細(xì)胞旁途徑進(jìn)入腫瘤組織,本研究主要探討EMAP-II開放緊密連接的可能分子機(jī)制。MicroRNA(miRNA)是一類長度約22~24個(gè)核苷酸的內(nèi)源性單鏈非編碼小分子RNA。Mi RNA與靶基因mRNA的3′非翻譯區(qū)(3′untranslated region,3′UTR)完全或不完全互補(bǔ)配對發(fā)揮負(fù)性調(diào)節(jié)作用,參與轉(zhuǎn)錄后基因表達(dá)調(diào)控。近些年來,miRNA因在動(dòng)植物及人類各種疾病中發(fā)揮重要的生物學(xué)功能而備受關(guān)注。MiRNA是具有調(diào)控功能的一類非編碼小RNA,參與調(diào)控個(gè)體發(fā)育、細(xì)胞凋亡、增殖及分化等生理及病理過程。大多數(shù)miRNA基因以單拷貝、多拷貝或基因簇(cluster)的形式存在于基因組中。MiR-429是miR-200家族(miR-200b/c/429,miR-200a/141)的成員,通過對細(xì)胞周期、細(xì)胞分化、衰老和凋亡等的調(diào)控,參與多種腫瘤的發(fā)生發(fā)展。在大多數(shù)腫瘤中,miR-429作為腫瘤抑制性miRNA發(fā)揮作用,能夠抑制腫瘤的發(fā)生,在神經(jīng)膠質(zhì)瘤中也是潛在的抑癌基因。探討mi R-429對腫瘤的影響及機(jī)制,可能為神經(jīng)膠質(zhì)瘤的治療及相關(guān)研究提供新的策略。但miR-429是否能夠調(diào)控BTB通透性未見報(bào)道。Pecot CV等報(bào)道m(xù)iR-429通過調(diào)控interleukin-8和CXCL1,能夠抑制卵巢癌、腎癌、肺癌和基底細(xì)胞樣乳腺癌的腫瘤血管新生,根據(jù)miR-429對血管的影響,推測miR-429能夠調(diào)控BTB通透性。p70S6K是核糖體40S小亞基S6的蛋白激酶,為mTOR下游調(diào)節(jié)因子,是調(diào)控蛋白質(zhì)合成的關(guān)鍵信號分子,可以提高含有5’-TOP結(jié)構(gòu)mRNA的蛋白翻譯效率。據(jù)報(bào)道,和多種腫瘤的增殖、分化和凋亡等過程中起到作用。Zhang C等報(bào)道降低p70S6K磷酸化水平能夠抑制腦膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞系的增值能力,但是,p70S6K是否參與miR-429對膠質(zhì)瘤BTB通透性的調(diào)節(jié)還未見報(bào)道。本研究的首先研究EMAP-Ⅱ是否通過miR-429直接調(diào)控BTB的通透性及可能機(jī)制,進(jìn)一步探討miR-429通過p70S6K間接調(diào)控BTB通透性的可能機(jī)制,為神經(jīng)膠質(zhì)瘤等中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病的治療提供新途徑。方法:1.培養(yǎng)人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞系(hCMEC/D3)細(xì)胞、人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞系U87細(xì)胞和人胚腎細(xì)胞系HEK293T細(xì)胞。2.體外血腫瘤屏障(BTB)模型和體外血腦屏障(BBB)模型的建立。3.不同劑量的EMAPⅡ作用于BTB模型不同時(shí)間,應(yīng)用跨內(nèi)皮電阻實(shí)驗(yàn)(transendothelial electric resistance,TEER)和辣根過氧化物酶滲出量實(shí)驗(yàn)(horseradish peroxidase,HRP),評估BTB模型通透性的變化。應(yīng)用Western blot方法檢測緊密連接相關(guān)蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5的蛋白表達(dá)水平變化。4.應(yīng)用實(shí)時(shí)熒光定量PCR方法檢測mi R-429在不同病理級別膠質(zhì)瘤組織中的內(nèi)源性表達(dá)水平。5.應(yīng)用RT-PCR方法檢測BTB模型和BBB模型的內(nèi)皮細(xì)胞中miR-429表達(dá)含量的差異。6.應(yīng)用RT-PCR方法檢測不同劑量EMAPⅡ作用后BTB的內(nèi)皮細(xì)胞細(xì)胞中miR-429表達(dá)含量的差異。7.MiR-429過表達(dá)或表達(dá)沉默的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染內(nèi)皮細(xì)胞系的建立。8.應(yīng)用TEER和HRP實(shí)驗(yàn)檢測miR-429過表達(dá)或表達(dá)沉默穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系所建立BTB模型中通透性的變化。9.應(yīng)用Western blot和免疫熒光法檢測miR-429過表達(dá)或表達(dá)沉默穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后,BTB模型中的內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接相關(guān)蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5的蛋白表達(dá)水平變化。10.應(yīng)用雙熒光素酶報(bào)告基因分析miR-429和緊密連接相關(guān)蛋白ZO-1和Occludin的直接靶向作用和結(jié)合位點(diǎn)。11.p70S6K過表達(dá)或表達(dá)沉默穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的內(nèi)皮細(xì)胞系的建立。12.應(yīng)用TEER和HRP實(shí)驗(yàn)檢測p70S6K過表達(dá)或表達(dá)沉默穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞系所建立BTB模型中通透性的變化。13.應(yīng)用Western blot方法檢測p70S6K過表達(dá)或表達(dá)沉默穩(wěn)定轉(zhuǎn)染后,BTB模型的內(nèi)皮細(xì)胞中緊密連接相關(guān)蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5的蛋白表達(dá)水平變化。14.應(yīng)用雙熒光素酶報(bào)告基因分析miR-429和p70S6K的直接靶向作用和結(jié)合位點(diǎn)。15.分別建立miR-429和p70S6K雙過表達(dá)和表達(dá)沉默的體外BTB模型。應(yīng)用TEER和HRP實(shí)驗(yàn)檢測BTB通透性的變化。應(yīng)用Western blot方法檢測上述內(nèi)皮細(xì)胞所建立BTB模型中內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接相關(guān)蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5的蛋白表達(dá)水平變化。應(yīng)用Western blot方法檢測上述內(nèi)皮細(xì)胞所建立BTB模型中p70S6K、P-p70S6K、S6、P-S6的蛋白表達(dá)水平的變化。16.分別應(yīng)用p70S6K激酶抑制劑AT7868和S6激酶抑制劑BI-D1870應(yīng)用于miR-429表達(dá)沉默穩(wěn)定轉(zhuǎn)染內(nèi)皮細(xì)胞系,應(yīng)用Western blot方法檢測上述內(nèi)皮細(xì)胞所建立BTB模型的內(nèi)皮細(xì)胞中緊密連接相關(guān)蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5的蛋白表達(dá)水平變化。結(jié)果:1.MiR-429在人膠質(zhì)瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞中表達(dá)顯著低于在人腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞中的表達(dá)。2.MiR-429在不同級別膠質(zhì)瘤組織中均低表達(dá),且與膠質(zhì)瘤病理級別顯著負(fù)相關(guān)。3.成功建立了體外BTB模型;分別成功構(gòu)建了miR-429和p70S6K的穩(wěn)定過表達(dá)和表達(dá)沉默的體外BTB模型;成功建立miR-429和p70S6K雙過表達(dá)和表達(dá)沉默的體外BTB模型。4.EMAPⅡ顯著增加BTB的通透性,降低腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞中緊密連接相關(guān)蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5的蛋白表達(dá),呈時(shí)間和劑量依賴。5.EMAPⅡ顯著增加體外BTB模型的腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞中miR-429的表達(dá)。6.腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞過表達(dá)miR-429使BTB模型TEER值顯著降低,HRP透過率顯著增高;腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞miR-429表達(dá)沉默使BTB模型的TEER值顯著增高,HRP透過率顯著降低。7.腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞過表達(dá)miR-429使緊密連接相關(guān)蛋白Occludin、ZO-1、Claudin-5的表達(dá)顯著降低,由連續(xù)分布變?yōu)椴贿B續(xù)分布;miR-429表達(dá)沉默使緊密連接相關(guān)蛋白Occludin、ZO-1、Claudin-5的表達(dá)顯著增高,連續(xù)性增強(qiáng)。8.緊密連接相關(guān)蛋白Occludin和ZO-1是miR-429的靶基因。9.MiR-429過表達(dá)顯著下調(diào)p70S6K的蛋白表達(dá),同時(shí)下調(diào)其磷酸化水平;miR-429表達(dá)沉默顯著上調(diào)p70S6K的表達(dá),同時(shí)上調(diào)其磷酸化水平。10.p70S6K是miR-429的靶基因。11.MiR-429能夠通過靶向結(jié)合p70S6K,下調(diào)p70S6K的表達(dá)和磷酸化水平,進(jìn)一步影響S6的磷酸化水平增加BTB通透性。12.p70S6K和S6的激酶抑制劑AT7868以及BI-D1870能夠部分阻斷miR-429表達(dá)沉默導(dǎo)致的BTB通透性降低和緊密連接相關(guān)蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5表達(dá)增高的作用。討論:本研究發(fā)現(xiàn),EMAP-Ⅱ作用于BTB模型,能夠呈時(shí)間和劑量依賴增加BTB通透性和降低腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞中緊密連接相關(guān)蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5的蛋白表達(dá)。0.05nM的EMAP-Ⅱ作用于BTB模型0.5、1、2、3和6h后,發(fā)現(xiàn)在EMAP-Ⅱ作用0.5h、1h、2h后,BTB通透性明顯增高,并且緊密連接相關(guān)蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5均被明顯抑制,在1h效果最為顯著。低劑量的EMAP-Ⅱ?qū)TB通透性的增高和ZO-1、Occludin和Claudin-5蛋白表達(dá)的抑制作用隨時(shí)間逐漸減弱,在3h以及6h時(shí),沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。EMAPⅡ顯著增加體外BTB模型的腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞中miR-429的表達(dá),0.05nM的EMAP-Ⅱ作用于BTB模型0.5、1、2、3和6h后,發(fā)現(xiàn)mi R-429的表達(dá)在0.5、1、2h明顯增高,1h增高最明顯,在3和6h未見統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。人miR-429位于1p36.33,參與腫瘤的發(fā)生發(fā)展。有報(bào)道認(rèn)為miR-429能夠發(fā)揮癌基因的作用,促進(jìn)腫瘤的發(fā)生(如肝癌)。但多數(shù)研究認(rèn)為,在大多數(shù)腫瘤中miR-429作為腫瘤抑制性miRNA發(fā)揮作用,能夠抑制腫瘤的發(fā)生。如miR-429在非小細(xì)胞肺癌、結(jié)腸直腸癌、腎細(xì)胞癌和食管癌等多種腫瘤組織中表達(dá)下調(diào),miR-429表達(dá)上調(diào)后,可通過靶向調(diào)控Onecut2、bcl-2和SP-1等基因,抑制腫瘤細(xì)胞的增殖、遷移和侵襲。此外,報(bào)道發(fā)現(xiàn)miR-429在腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞中呈低表達(dá),miR-429表達(dá)增加可通過抑制腫瘤血管生成,抑制腫瘤生長。上述研究表明,miR-429能夠調(diào)控腫瘤細(xì)胞和腫瘤血管的生物學(xué)行為,發(fā)揮抑制腫瘤作用。目前關(guān)于miR-429對腦膠質(zhì)瘤微血管內(nèi)皮細(xì)胞的作用未見報(bào)道,僅有2篇報(bào)道顯示miR-200家族成員miR-200b/c在人膠質(zhì)瘤樣本中獲得的膠質(zhì)瘤細(xì)胞中呈現(xiàn)低表達(dá),能夠直接或者通過抑制轉(zhuǎn)錄因子鋅脂E-box結(jié)合同源盒1(zinc finger E-box binding homeobox 1,ZEB1)抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞的遷移和侵襲。而miR-429與miR-200b/c位于同一位點(diǎn),并且能夠直接靶向調(diào)控ZEB1。本課題組前期研究表明:miR-429能夠顯著降低人U87神經(jīng)膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖能力,并且誘導(dǎo)U87細(xì)胞凋亡。本研究結(jié)果顯示miR-429在不同膠質(zhì)瘤病理級別中和腫瘤內(nèi)皮中的表達(dá),mi R-429對BTB通透性的調(diào)控以及在EMAP-II調(diào)控BTB通透性中的作用未見報(bào)道。為探討mi R-429在EMAP-Ⅱ增加BTB通透性中的作用,我們選取小劑量EMAP-Ⅱ0.05nM濃度進(jìn)行后續(xù)試驗(yàn),驗(yàn)證其對BTB模型中血管內(nèi)皮細(xì)胞中miR-429表達(dá)量的影響。結(jié)果發(fā)現(xiàn),EMAP-Ⅱ?qū)iR-429表達(dá)量的影響趨勢與對BTB通透性影響趨勢契合。為進(jìn)一步研究miR-429對BTB通透性的影響,我們分別成功建立了miR-429過表達(dá)或表達(dá)沉默的穩(wěn)定轉(zhuǎn)染細(xì)胞,進(jìn)而成功建立了miR-429過表達(dá)或表達(dá)沉默的體外BTB模型。首先應(yīng)用TEER試驗(yàn)和HRP試驗(yàn)檢測BTB模型通透性結(jié)果顯示miR-429過表達(dá)顯著增加了BTB的通透性;而miR-429表達(dá)沉默則顯著降低了BTB的通透性。緊密連接蛋白ZO-1、occludin和claudin-5是緊密連接的重要組成部分,其表達(dá)降低能夠顯著開放緊密連接,增加BTB通透性。在本研究中,Western blot檢測結(jié)果顯示miR-429過表達(dá)顯著下調(diào)了ZO-1、occludin和claudin-5的蛋白表達(dá);相反,mi R-429表達(dá)沉默誘導(dǎo)ZO-1、occludin和claudin-5的蛋白表達(dá)顯著上調(diào)。免疫熒光和Western blot檢測結(jié)果相一致。上述研究結(jié)果證實(shí)EMAP-II能夠通過上調(diào)miR-429的表達(dá),顯著抑制ZO-1、occludin和claudin-5的表達(dá),進(jìn)而開放緊密連接增加BTB通透性。關(guān)于miR-429如何下調(diào)緊密連接相關(guān)蛋白的表達(dá)尚不清楚。本研究應(yīng)用生物信息學(xué)軟件TargetScan Human Release 6.2預(yù)測了miR-429的潛在靶點(diǎn),結(jié)果發(fā)現(xiàn),在ZO-1 mRNA 3′UTR的71-77位置有一個(gè)潛在的結(jié)合位點(diǎn),在occludin mRNA 3′UTR的139-145位置和2151-2157位置有兩個(gè)潛在的結(jié)合位點(diǎn),上述位點(diǎn)的序列與mi R-429“種子區(qū)”完全互補(bǔ)配對,未見claudin-5mRNA3′UTR與miR-429有預(yù)測結(jié)合位點(diǎn)。miR-429過表達(dá)后ZO-1、occludin和claudin-5的表達(dá)下調(diào),而miR-429表達(dá)沉默后ZO-1、occludin和claudin-5的表達(dá)顯著上調(diào)。同時(shí),雙熒光素酶報(bào)告基因試驗(yàn)證實(shí)了miR-429分別和ZO-1、occludin緊密連接蛋白的靶向結(jié)合,并分別驗(yàn)證了其結(jié)合位點(diǎn)。本研究結(jié)果充分證實(shí)了ZO-1和occludin是miR-429的靶基因,miR-429可與靶基因ZO-1和occludin的3'UTR直接結(jié)合。我們推測,miR-429可通過負(fù)性調(diào)控ZO-1、occludin和claudin-5的表達(dá),增加BTB通透性。作為一種轉(zhuǎn)錄因子,p70S6K被認(rèn)為是一些mi RNA的可能的下游靶點(diǎn)。p70S6K通過磷酸化S6蛋白激酶促進(jìn)含5’TOP的mRNA翻譯,進(jìn)而發(fā)揮生物學(xué)作用。在多種腫瘤的增殖、凋亡等生物學(xué)行為中起作用。miR-429過表達(dá)顯著下調(diào)p70S6K的蛋白表達(dá),同時(shí)下調(diào)其磷酸化水平;mi R-429表達(dá)沉默顯著上調(diào)p70S6K的表達(dá),同時(shí)上調(diào)其磷酸化水平。我們應(yīng)用TargetScan Human Release 6.2生物信息學(xué)軟件預(yù)測到在p70S6K mRNA3′UTR的291-298位置有一個(gè)潛在的miR-429結(jié)合位點(diǎn)。雙熒光素酶報(bào)告基因系統(tǒng)分析證實(shí)miR-429能夠靶向結(jié)合p70S6K,并明確了結(jié)合位點(diǎn)。上述結(jié)果證明p70S6K是miR-429的靶基因。但p70S6K是否參與miR-429調(diào)控緊密連接蛋白的表達(dá)尚不清楚,為此,我們成功建立了p70S6K過表達(dá)或表達(dá)沉默穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的內(nèi)皮細(xì)胞,應(yīng)用TEER試驗(yàn)和HRP試驗(yàn)檢測發(fā)現(xiàn),p70S6K過表達(dá)后BTB模型通透性顯著降低;p70S6K表達(dá)沉默后BTB模型通透性顯著增高,證實(shí)了p70S6K能夠影響B(tài)TB通透性。Western blot檢測發(fā)現(xiàn)p70S6K過表達(dá),BTB模型的內(nèi)皮細(xì)胞中緊密連接相關(guān)蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5蛋白表達(dá)水平增高;p70S6K表達(dá)沉默則上述蛋白表達(dá)顯著降低。提示p70S6K能夠通過影響緊密連接蛋白進(jìn)一步改變通透性。分別建立miR-429和p70S6K雙過表達(dá)和表達(dá)沉默的體外BTB模型。通過TEER試驗(yàn)和HRP試驗(yàn)檢測BTB通透性變化,通過Western blot檢測上述內(nèi)皮細(xì)胞所建立BTB模型中內(nèi)皮細(xì)胞緊密連接相關(guān)蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5三種蛋白表達(dá)水平的變化,(前述結(jié)果具體描述)證實(shí)了miR-429可以通過靶向結(jié)合p70S6K,影響ZO-1、Occludin和Claudin-5蛋白表達(dá),從而影響B(tài)TB通透性。miR-429過表達(dá)顯著下調(diào)p70S6K的和表達(dá),同時(shí)下調(diào)其磷酸化水平;miR-429表達(dá)沉默顯著上調(diào)p70S6K的表達(dá),同時(shí)上調(diào)其磷酸化水平。p70S6K和S6的激酶抑制劑AT7868以及BI-D1870能夠部分阻斷miR-429的表達(dá)沉默對BTB通透性降低作用和緊密連接相關(guān)蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5表達(dá)的增高作用。miR-429增加BTB通透性是通過結(jié)合p70S6K,下調(diào)p70S6K的表達(dá)和磷酸化水平,進(jìn)一步影響S6的磷酸化水平來實(shí)現(xiàn)的。由于未預(yù)測到miR-429和claudin-5mRNA3'UTR有潛在結(jié)合位點(diǎn),考慮miR-429對claudin-5表達(dá)含量的影響可能是通過p70S6K實(shí)現(xiàn)的。本研究證明了miR-429可能是EMAP-II影響B(tài)TB通透性和膠質(zhì)瘤微血管內(nèi)皮細(xì)胞生物學(xué)行為的重要調(diào)節(jié)子。其機(jī)制分為兩方面:一、EMAPⅡ作用于BTB,腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞中miR-429的表達(dá)量顯著增高,進(jìn)而直接靶向作用于緊密連接相關(guān)蛋白ZO-1、Occludin,增高BTB的通透性;二、EMAPⅡ作用于BTB,腫瘤血管內(nèi)皮細(xì)胞中miR-429的表達(dá)量顯著增高,miR-429靶向調(diào)控p70S6K,下調(diào)p70S6K的表達(dá)和磷酸化水平,進(jìn)一步影響S6的磷酸化水平,下調(diào)緊密連接相關(guān)蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5,增加BTB通透性。以上研究結(jié)果提示,EMAPⅡ可能成為開通BTB的新方法。結(jié)論:1.EMAPⅡ能夠增加BTB的通透性,降低緊密連接相關(guān)蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5的表達(dá)水平。2.mi R-429在膠質(zhì)瘤微血管內(nèi)皮細(xì)胞中的低表達(dá);miR-429在不同級別膠質(zhì)瘤組織中均低表達(dá),且與膠質(zhì)瘤病理級別顯著負(fù)相關(guān)。3.EMAPⅡ能夠顯著增加miR-429的表達(dá);miR-429過表達(dá)后BTB通透性顯著增加,緊密連接相關(guān)蛋白ZO-1、Occludin和Claudin-5表達(dá)水平顯著降低。4.ZO-1和Occludin是miR-429的靶基因。5.mi R-429通過靶定p70S6K,二者反向共同調(diào)節(jié)BTB通透性及緊密連接相關(guān)蛋白ZO-1、occludin和claudin-5的蛋白表達(dá)水平。6.p70S6K通過磷酸化S6,調(diào)控ZO-1、occludin和claudin-5的蛋白表達(dá)水平,影響B(tài)TB通透性。
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R739.41

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1 張玲;張潔;丁瓊;魏蕾;;VASP下調(diào)對人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞通透性的影響[J];中國病理生理雜志;2010年10期

2 應(yīng)易高,華爾銓;腸通透性升高與ICU病人多臟器功能衰竭相關(guān)[J];國外醫(yī)學(xué)(內(nèi)科學(xué)分冊);2000年04期

3 顧軍;;半通透性封閉敷裹:對于致病菌的生長及表淺創(chuàng)傷上皮再生的作用[J];國外醫(yī)學(xué).皮膚病學(xué)分冊;1987年04期

4 L.G.Bagley;史肖田;;胚胎不只需要氧氣[J];國外畜牧學(xué)(豬與禽);1987年02期

5 呂集;殷蓉蓉;;生理學(xué)練習(xí)題(二)[J];中國社區(qū)醫(yī)師;1987年12期

6 聶松青,曾科,薄惠卿,林克椿;牛胰多肽(BPP)與脂質(zhì)體的相互作用——對脂質(zhì)體通透性的影響[J];生物物理學(xué)報(bào);1988年03期

7 朱天義,李光芝,任宏造;硒對缺氧培養(yǎng)心臟功能、膜系統(tǒng)通透性和早期超微結(jié)構(gòu)的影響[J];中國地方病防治雜志;1988年05期

8 唐智琴;;雞紅細(xì)胞融合的定量電鏡研究[J];電子顯微學(xué)報(bào);1988年03期

9 雷大川;;實(shí)驗(yàn)性通透性肺水腫[J];中國病理生理雜志;1988年05期

10 李肇仁;;心得安抑制膽固醇誘導(dǎo)的動(dòng)脈壁通透性增高[J];國外醫(yī)學(xué).創(chuàng)傷與外科基本問題分冊;1988年03期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 王彬;閔蘇;;磁扭力刺激對人肺微血管內(nèi)皮細(xì)胞單層通透性、F-肌動(dòng)蛋白變化的影響[A];中國中西醫(yī)結(jié)合麻醉學(xué)會(huì)[CSIA]年會(huì)暨第二屆全國中西醫(yī)結(jié)合麻醉學(xué)術(shù)研討會(huì)、江蘇省中西醫(yī)結(jié)合學(xué)會(huì)麻醉專業(yè)委員會(huì)成立大會(huì)論文匯編[C];2015年

2 黃行許;翟大勇;黃有國;楊福愉;;Ca~(2+)和ROS協(xié)同介導(dǎo)PTP開放[A];第七屆全國生物膜學(xué)術(shù)討論會(huì)論文摘要匯編[C];1999年

3 張?jiān)?;急性呼吸窘迫綜合征41例護(hù)理體會(huì)[A];第五屆全國災(zāi)害醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨常州市醫(yī)學(xué)會(huì)急診危重病及災(zāi)害醫(yī)學(xué)專業(yè)委員會(huì)首屆年會(huì)學(xué)術(shù)論文集[C];2009年

4 羅予;張燕;何占航;;中藥和蒙脫石制劑對腸道菌群和通透性影響[A];河南省預(yù)防醫(yī)學(xué)會(huì)微生態(tài)學(xué)專業(yè)委員會(huì)學(xué)術(shù)會(huì)議、河南省微生物學(xué)會(huì)微生態(tài)學(xué)專業(yè)委員會(huì)成立大會(huì)論文匯編[C];2011年

5 羅予;劉芳;何占航;;中藥和蒙脫石制劑對腸道菌群和通透性影響[A];第三屆特種醫(yī)學(xué)暨山東-河南-湖北三省聯(lián)合微生態(tài)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2011年

6 于淑霞;王惠吉;孫天燕;原慶;;肝硬化患者腸通透性及益生元對其影響的研究[A];第十三次全國中西醫(yī)結(jié)合肝病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2004年

7 范勇;林茹;;關(guān)閉線粒體通透性轉(zhuǎn)變孔對未成熟兔缺血心肌的保護(hù)作用[A];2009年浙江省胸心外科學(xué)學(xué)術(shù)年會(huì)論文匯編[C];2009年

8 李曉峗;謝瑩;董吉祥;;晚期糖基化終產(chǎn)物對血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性的影響及機(jī)制[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第十一次全國內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

9 王燕;王貴發(fā);陳鋒;;加替沙星對大鼠血胰屏障通透性的研究[A];浙江省藥劑學(xué)術(shù)會(huì)議論文集[C];2006年

10 王魯文;宋仕玲;張全榮;陳國忠;童仕倫;龔作炯;;中藥復(fù)方“金三莪”對肝硬化患者腸通透性的影響[A];第一次全國中西醫(yī)結(jié)合傳染病學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2006年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 東南大學(xué)附屬中大醫(yī)院皮膚科副主任醫(yī)師 張敬東 程守勤 崔玉艷整理;浴后別馬上化妝[N];健康報(bào);2009年

2 王玉堂;果園冬翻好處多[N];云南科技報(bào);2007年

3 華南農(nóng)業(yè)大學(xué)動(dòng)物醫(yī)學(xué)系 許家強(qiáng) 廣州牧馬人動(dòng)物保健有限公司 劉旭光;豬病的診斷與對癥下藥[N];廣東科技報(bào);2002年

4 王若愚;小房間變大有絕招[N];保健時(shí)報(bào);2007年

5 程艷利 張默;不開透光路 就沒有出路[N];山西科技報(bào);2002年

6 王玉堂;果園冬翻好處多[N];陜西科技報(bào);2008年

7 傅繪;嬰幼兒吃蛋四不宜[N];保健時(shí)報(bào);2004年

8 趙永春;三種土壤巧施肥[N];山東科技報(bào);2007年

9 劉建成;果樹這樣修剪更通透[N];湖南科技報(bào);2006年

10 黃國勤 彭劍鋒;水稻生長后期防早衰[N];江蘇農(nóng)業(yè)科技報(bào);2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 吳潔;氯化鑭暴露對大鼠血腦屏障細(xì)胞旁通透性的影響及分子機(jī)制研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2018年

2 劉嘉暉;小劑量EMAP-Ⅱ通過miR-330-3p/PKC-α途徑增加血腫瘤屏障通透性的機(jī)制[D];中國醫(yī)科大學(xué);2018年

3 陳亮宇;EMAP-Ⅱ通過miR-429調(diào)控緊密連接增加血腫瘤屏障通透性的機(jī)制研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2018年

4 張偉金;Sirt1在LPS致血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性增高中的保護(hù)作用[D];南方醫(yī)科大學(xué);2018年

5 喬人立;肺微循環(huán)液體交換屏障[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1993年

6 苑曉晨;褪黑素對IL-lβ誘導(dǎo)的人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞通透性的影響[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

7 劉楠;通透性影像評估缺血性腦卒中的神經(jīng)血管單元[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2016年

8 崔云亮;大黃單體降低血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性及信號轉(zhuǎn)導(dǎo)機(jī)制[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2016年

9 鄧小鹿;p115RhoGEF/RhoA信號通路參與調(diào)控LPS及TNF-α致腦微血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性增高的機(jī)制研究[D];中南大學(xué);2012年

10 王偉;細(xì)胞骨架重構(gòu)在VEGF與TNF-α促進(jìn)漢坦病毒感染致血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性增高中的作用及其機(jī)制[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 孫怡然;酵母細(xì)胞通透性的調(diào)控及其合成谷胱甘肽研究[D];南昌大學(xué);2018年

2 張鑫紅;硫化氫在脂多糖致PMVECs通透性增高中保護(hù)作用的研究[D];河北醫(yī)科大學(xué);2018年

3 孫盼歌;RTEF-1抗血管內(nèi)皮細(xì)胞通透性增加的機(jī)制研究[D];華中科技大學(xué);2016年

4 李志鵬;p38調(diào)控VE-Cadherin移位在熱打擊HUVECs高通透性中的作用[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2017年

5 信文啟;烏司他丁對毛細(xì)血管滲漏綜合征毛細(xì)血管通透性影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];石河子大學(xué);2011年

6 蒲晏均;羥乙基淀粉對結(jié)直腸癌術(shù)后腸壁通透性影響的臨床研究[D];瀘州醫(yī)學(xué)院;2011年

7 衛(wèi)園園;神經(jīng)酰胺對肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞的增殖及細(xì)胞單層通透性的影響[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2014年

8 高鵬;不同參數(shù)電磁輻射對血腦屏障通透性的影響[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2017年

9 周運(yùn)恒;大鼠肝臟再生時(shí)線粒體通透性轉(zhuǎn)換與蛋白釋放關(guān)系的研究[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2006年

10 劉捷;皮革高分子材料的通透性能和耐熱性能研究[D];鄭州大學(xué);2003年

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本文編號：2664640