發(fā)布時間：2020-05-14 16:17

【摘要】：外泌體(exosome),是一種細(xì)胞主動分泌的大小均一的囊泡樣小體,具有脂質(zhì)雙層膜結(jié)構(gòu),直徑大約40-100 nm,密度約1.10~1.18 g/ml,最早發(fā)現(xiàn)于體外培養(yǎng)的綿羊紅細(xì)胞上清液中。不同細(xì)胞分泌的外泌體具有不用的組成成分和功能,主要內(nèi)容物為蛋白質(zhì)和RNA,可作為疾病診斷的生物標(biāo)志物。外泌體在體液中天然存在,包括血液,唾液,尿液和母乳。以前的研究表明外泌體發(fā)揮蛋白質(zhì)轉(zhuǎn)運功能并交換蛋白質(zhì)和脂質(zhì)。直到2007年,外泌體也具有核酸,并且發(fā)現(xiàn)它們參與細(xì)胞內(nèi)通訊。它的蛋白質(zhì),RNA和脂肪成分是特異性的,并且具有重要的信號分子~([1]),這些信號分子在許多疾病的早期診斷中發(fā)揮重要作用。這使得外泌體發(fā)展的空間也在快速擴展,并成為熱門的研究對象。星形膠質(zhì)細(xì)胞(astrocyte)是一種大腦中的神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞,直徑約3-5μm。星形膠質(zhì)細(xì)胞是神經(jīng)系統(tǒng)的重要組成成分,在大腦發(fā)育過程中與神經(jīng)細(xì)胞互相依存,具有一定的促神經(jīng)細(xì)胞分化作用。通過持續(xù)培養(yǎng)As細(xì)胞并收集培養(yǎng)基作為實驗材料,提取As細(xì)胞外泌體。采用超速離心法提取到外泌體后,通過電鏡掃描的方法檢測外泌體的直徑形態(tài),掃描電子顯微鏡(SEM)利用能量為1至30kV的電子束進行操作,印刷在待分析的樣品表面上,并且變成通過電子與樣品表面之間的相互作用產(chǎn)生的電子圖像,檢測到exosome約在40nm至200nm的直徑,最后通過BCA法檢測exosome表面蛋白的濃度,在分子水平篩選濃度合適的exosome進行生物水平研究。在制作大鼠的腦中風(fēng)模型時,選擇線栓法制作大鼠的腦缺血再灌注模型,腹腔注射exosome后,通過術(shù)后觀察大鼠的行為,以及Zea Longa的5分制評分標(biāo)準(zhǔn)進行神經(jīng)功能缺失體征評分,綜合評價大鼠鼠后恢復(fù)情況,分析外泌體在腦中風(fēng)大鼠模型中的作用。本研究利用小鼠腦星形膠質(zhì)細(xì)胞提取并檢測出外泌體后,對腦神經(jīng)受損的大鼠進行注射,觀察外泌體對神經(jīng)受損動物的作用,初步證明As細(xì)胞分泌的外泌體能夠有助于神經(jīng)受損動物的功能性恢復(fù),初步探索外泌體在動物體內(nèi)的神經(jīng)功能恢復(fù)作用,為外泌體在臨床醫(yī)學(xué)方面的應(yīng)用奠定一定的理論基礎(chǔ)。
【圖文】：

17圖 1.1 技術(shù)路線Fig.1.1 Technology roadmap1.6 本文結(jié)構(gòu)安排本論文包括八個章節(jié)，具體結(jié)構(gòu)安排如下：在第一章緒論部分，主要介紹了外泌體的定義，形態(tài)結(jié)構(gòu)，以及直徑大小，，闡述了外泌體在現(xiàn)階段生物研究中的重要作用，以及國內(nèi)外目前已經(jīng)使用外泌體進行的科研工作，簡單概括了課題主要的研究內(nèi)容及創(chuàng)新點，并在章節(jié)最后給出文章結(jié)構(gòu)安排。第二章是小鼠原代腦星形膠質(zhì)細(xì)胞的提取。從脊椎脫臼法處死小鼠開始，介紹了從成年小鼠大腦中提取原代神經(jīng)細(xì)胞的技術(shù)方法，是后續(xù)實驗的理論基礎(chǔ)和技術(shù)保障。第三章是原代細(xì)胞的分離純化及培養(yǎng)。本章節(jié)承接上一章節(jié)提取到的原代細(xì)

圖 3.1 箭頭所示為分離后的 p0 代 As 細(xì)胞團.1 the arrows indicate the p0 generation of As cells after sepa圖 3.2 穩(wěn)定后的 As 細(xì)胞（p0）Fig3.2 stable astrocyte (p0)
【學(xué)位授予單位】：昆明理工大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R741

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 肖芳;蔣衛(wèi)東;王曉紅;秦愛瓊;韓敏;陳麗;;小鼠胰島微血管內(nèi)皮細(xì)胞外泌體的提取和鑒定方法[J];山東大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2015年01期

2 馮業(yè)童;劉朋飛;吳昊昱;劉迪;董超;吳璇;周余來;孫波;;結(jié)腸癌源性exosomes的分離及其相關(guān)免疫學(xué)性質(zhì)[J];中國生物制品學(xué)雜志;2012年12期

3 陳紹倩;杜英;王鑫;顧巧麗;黃玉敏;董子明;;多步離心法提取K526細(xì)胞外泌體[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2006年03期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 黃祺琦;耐受性樹突狀細(xì)胞來源的exosome治療小鼠免疫介導(dǎo)性再生障礙性貧血的實驗研究[D];南昌大學(xué);2010年

本文編號：2663615