【摘要】：背景:腦卒中是目前威脅人類健康的重要腦血管疾病之一,尤其以缺血性腦卒中最為多見,在全世界范圍內(nèi)有著較高的致殘率和死亡率。到目前為止,早期靜脈溶栓治療和血管內(nèi)治療是臨床實踐中較為有效的治療方式,但缺血再灌注引起的繼發(fā)性神經(jīng)損傷明顯影響著患者預(yù)后的恢復(fù),對溶栓或機(jī)械取栓的推廣應(yīng)用在理論和實踐上具有不同意見。目前研究表明腦缺血再灌注后繼發(fā)性神經(jīng)損傷與內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激、炎癥反應(yīng)、能量代謝、興奮性氨基酸等有著密切關(guān)系。因此,針對缺血后再灌注損傷過程中神經(jīng)保護(hù)的研究,有可能為治療缺血性腦卒中提供新的有效途徑。食欲素B作為G蛋白偶聯(lián)受體的內(nèi)源性配體,是主要由下丘腦分泌的一種神經(jīng)肽。已有研究表明食欲素B能夠抑制多巴胺神經(jīng)元自發(fā)程序性死亡,從而起到神經(jīng)保護(hù)作用,但是食欲素B是否參與腦缺血再灌注后的神經(jīng)損傷的病理生理過程,其可能的作用機(jī)制值得進(jìn)一步研究。目的:建立大鼠腦缺血再灌注損傷模型,觀察食欲素B(Orexin-B,OXB)對腦缺血再灌注損傷后的神經(jīng)保護(hù)作用,并初步探討其神經(jīng)保護(hù)的可能機(jī)制。方法:選用Wistar健康雄性大鼠,體重200g～230g。采用改良線栓法制備大鼠大腦中動脈栓塞(Middle cerebral artery occulusion,MCAO)模型,于腦缺血2h后緩慢拔出線栓進(jìn)行再灌注24h。首先采用ELISA技術(shù)檢測不同時間點模型大鼠血清中內(nèi)源性O(shè)rexin-B變化。將大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(Control)、缺血再灌注組(I/R)、缺血再灌注+PBS組(I/R+PBS)和缺血再灌注+Orexin-B組(I/R+OXB),對模型組大鼠采用改良的Zea-Longa5級神經(jīng)行為學(xué)評分法評分,實驗過程中,對于手術(shù)中出血過多、出現(xiàn)呼吸困難、造模不成功、死亡的動物均應(yīng)排除,并采取隨機(jī)抽樣原則補(bǔ)齊,并重新造模納入。I/R+PBS組造模成功的大鼠在再灌注早期(20min)向側(cè)腦室內(nèi)注射10μl PBS緩沖鹽溶液,I/R+OXB組造模成功的大鼠在再灌注早期注射10μl的Orexin-B,Orexin-B的濃度根據(jù)預(yù)實驗結(jié)果確定為1μg/μl。采用TTC染色法測定大鼠腦梗死體積;采用免疫組化檢測大鼠皮層梗死區(qū)域及OX2R陽性細(xì)胞區(qū)域變化情況;通過免疫蛋白印跡法檢測大鼠海馬區(qū)食欲素2型受體(OX2R)、p-AKT和p-GSK-3β蛋白表達(dá)情況;采取不同時間點對各組大鼠進(jìn)行Zea-Longa法評分,觀察不同時間點大鼠神經(jīng)功能缺損癥狀的改變;采取跳臺實驗檢測各組大鼠學(xué)習(xí)與記憶的改變。結(jié)果:內(nèi)源性食欲素B在缺血2h內(nèi)增加,恢復(fù)再灌注隨后內(nèi)源性食欲素維持相對穩(wěn)定;食欲素B治療組能明顯減輕大鼠梗死體積,OX2R染色陽性細(xì)胞區(qū)域較損傷組增大;I/R組、I/R+PBS海馬中OX2R及p-AKT、p-GSK-3β蛋白表達(dá)較假手術(shù)組減少(p0.05),而I/R+OXB組上述變化明顯減輕(p0.05);I/R+OXB組腦梗死體積明顯減少;I/R組潛伏期時間減少,錯誤次數(shù)增多(p0.05),而I/R+OXB組上述變化顯著減小(p0.05)。結(jié)論:食欲素B在腦缺血再灌注損傷中具有明顯的神經(jīng)保護(hù)作用,其作用機(jī)制可能與促進(jìn)OX2R表達(dá),增強(qiáng)p-AKT活性,使磷酸化GSK-3β增多,發(fā)揮促進(jìn)神經(jīng)元生存,抑制神經(jīng)元凋亡有關(guān)。本研究對食欲素B神經(jīng)保護(hù)作用的理論研究提供詳細(xì)的數(shù)據(jù)支持。同時,對于缺血性腦中風(fēng)的治療和相關(guān)臨床藥物開發(fā)提供新的思路,具有潛在的應(yīng)用推廣價值。
【圖文】：

術(shù)后２ｈ后拔出線栓，評估大鼠麻醉狀態(tài)，用止血鉗鉗夾大鼠后肢或尾部無應(yīng)激逡逑反應(yīng)，若大鼠有蘇醒反應(yīng)，補(bǔ)充少量麻醉劑，整個實驗過程均需遵循無菌原則。將逡逑麻醉好的大鼠常規(guī)碘伏消毒、備皮后固定于三維腦立體定位儀（圖２－２），，取大鼠逡逑兩耳中點沿矢狀線切開約１．２？１．５ｃｍ長的切口，用手術(shù)刀柄鈍性分離并盡量清理切逡逑口周圍的皮下組織用直徑約為３？４ｍｍ的小棉球蘸�。常サ模龋玻埃蚕锌谥車募″义先�、結(jié)締組織等并用醫(yī)用眼科剪剪除消化后的組織，直至顱骨前囟充分暴露。參考逡逑大鼠腦立體定位圖譜（Ｆａｎｋｌｉｎ邋ａｎｄＰａｘｉｎｏｓ）和本研宄所既往的研究，定位時先以大鼠逡逑前囟的十字交叉點為參照點并標(biāo)記，然后在該點后即前囟后（ＡＰ）邋０．８ｍｍ、左側(cè)旁逡逑開（Ｌ）邋１．６＿處進(jìn)行標(biāo)記并用顱骨鉆在大鼠顱骨表面鉆取直徑約１．０ｍｍ的小孔（有逡逑１３逡逑

山東大學(xué)碩士學(xué)位論文逡逑度，否則易致較大量出血，此時用醫(yī)用棉球壓迫滲血，再用微量注射器分別吸取食欲素Ｂ或ＰＢＳ室中緩慢注射（１０／ｍｉｎ），注射完畢后再留針５？ｌ膠海綿覆蓋針孔，以防止注射物和腦脊液流出。合線縫合皮膚，再次消毒創(chuàng)口處。側(cè)腦室注射過，直至大鼠蘇醒。逡逑
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R743.3

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 韓巨;;急性缺血性腦卒中的治療[J];中華老年心腦血管病雜志;2014年05期

2 翁盼;陸穎理;;食欲素與血糖和能量代謝的調(diào)節(jié)[J];醫(yī)學(xué)綜述;2014年03期

本文編號：2651092