【摘要】：研究目的本研究通過檢測惡性膠質(zhì)瘤組織中O6-甲基鳥嘌呤-DNA甲基轉(zhuǎn)移酶(06-methylguanine-DNA methytransferase,MGMT)基因啟動子的甲基化狀態(tài),討論其對惡性腦膠質(zhì)瘤替莫唑胺(Temozolomide,TMZ)化療療效及其預后的影響,以期為預見性、個體化化療計劃的選擇提供臨床參考。研究方法觀察對象:本研究收集安徽省立醫(yī)院自2014年5月至2016年5月收治的經(jīng)神經(jīng)外科手術(shù)治療且術(shù)后病理學檢查確診為惡性腦膠質(zhì)瘤(WHO中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤分類為Ⅲ級、Ⅳ級)的30例患者,其中女性13例,男性17例,年齡26-82歲,間變性星形細胞瘤(WHOⅢ級)7例,間變性少突膠質(zhì)細胞瘤(WHOⅢ級)4例,膠質(zhì)母細胞瘤(WHOⅣ級)19例。觀察方法:應用亞硫酸氫鹽修飾后測序PCR(Bisulfite sequencing PCR,BSP)方法對腫瘤組織進行MGMT基因啟動子甲基化狀態(tài)的檢測,依據(jù)檢測結(jié)果分為甲基化組和非甲基化組;30例惡性腦膠質(zhì)瘤患者均自愿接受神經(jīng)外科手術(shù)治療、術(shù)后行三維適形放射治療(3DCRT)或適形調(diào)強放射治療(IMRT)和替莫唑胺同步化療以及6個周期的輔助化療(5/28方案)。依據(jù)WHO實體腫瘤客觀療效評價標準(Response evaluation criteria in solid tumors,RECIST)及美國衛(wèi)生與公共服務部制定的藥物常見不良事件評價標準第四版(Common Terminology Criteria for Adverse Events Version 4.0,CTCAE-V4.0),評定30例惡性腦膠質(zhì)瘤患者的近期療效及藥物的安全性。追蹤記錄患者的無進展生存時間,并觀察MGMT基因啟動子甲基化狀態(tài)與患者的性別、年齡、KPS評分、病理分級以及手術(shù)切除程度等之間的關系。統(tǒng)計學方法:采用SPSS17.0和EXCEL統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析。應用Fisher確切概率法分析MGMT基因啟動子甲基化狀態(tài)與患者的性別、年齡、KPS評分、病理分級、手術(shù)切除程度等臨床病理特征的關系以及MGMT基因啟動子甲基化狀態(tài)與患者近期療效(客觀有效率、疾病控制率)的關系。探討MGMT基因啟動子甲基化狀態(tài)與患者的無進展生存時間的關系采用Kaplan-Meier方法,整體比較采用Log-rank檢驗并繪制生存曲線圖。當P0.05時差異具有統(tǒng)計學意義。研究結(jié)果1.在惡性腦膠質(zhì)瘤腫瘤組織中MGMT基因啟動子的甲基化率為73.3%(22/30),非甲基化率為26.7%(8/30)。2.男女兩組患者之間、年齡≥50歲和50歲兩組患者之間、KPS評分≥80分和80分兩組患者之間、WHOⅢ級和WHOⅣ兩組患者之間、腫瘤全切和次全切兩組患者之間的MGMT基因啟動子甲基化狀態(tài)差異都沒有統(tǒng)計學意義(P0.05)。3.MGMT基因啟動子甲基化組的近期客觀療效和疾病控制均顯著優(yōu)于MGMT基因啟動子非甲基化組(χ2=4.26,P=0.039;χ2=7.27,P=0.007);MGMT基因啟動子甲基化組患者的無進展生存時間顯著長于MGMT基因啟動子非甲基化組(χ2=9.386,P=0.002)。4.所有患者均未出現(xiàn)明顯的不良反應。結(jié)論1.惡性腦膠質(zhì)瘤組織MGMT基因啟動子甲基化狀態(tài)與患者的性別、年齡、KPS評分、病理分級以及手術(shù)切除程度等均無顯著相關性。惡性腦膠質(zhì)瘤MGMT基因動子甲基化狀態(tài)與患者使用替莫唑胺治療的預后密切相關,可以作為惡性腦膠質(zhì)瘤患者臨床預后的指標。2.BSP法檢測MGMT基因啟動子甲基化狀態(tài)是一種可靠的辦法。MGMT基因啟動子甲基化的檢測對于惡性腦膠質(zhì)瘤患者的個體化化療方案的制定具有重要的指導作用。
【圖文】：

邐山東大學碩士學位論文邐逡逑４）電泳：加入樣品后，，關閉電泳槽蓋，立即打開電源。控制電壓在１００Ｖ。逡逑然后樣品移動向陽極。３０分鐘后關閉電源，停止電泳。逡逑５）觀察和拍照：將瓊脂糖凝膠從有機玻璃槽中的取出，在凝膠圖像分析逡逑儀中上觀察結(jié)果，記錄保存電泳圖像。逡逑２．４邋甲基化特異的ＰＣＲ（ｍｅｔｈｙｌａｔｉｏｎ邋ｓｐｅｃｉｆｉｃ邋ＰＣＲ，ＭＳＰ）逡逑甲基化特異的ＰＣＲ邋（ＭＳＰ）由＾＾１１１１￡１１１等［１９］提出。基本原理是：ＤＮＡ中未逡逑甲基化的胞嘧啶通過亞硫酸氫鹽反應轉(zhuǎn)化為尿嘧啶，而５－甲基胞嘧啶不能被逡逑修飾，保持不變。依據(jù)修飾后的ＮＤＡ，設計兩對針對甲基化與非甲基化基因逡逑，ＭＳＰＤＮＡ。逡逑

。逡逑ｇ）將離心柱移入新的１．５邋ｍｌ邋ＥＰ管中，在離心柱膜的中央處加入３０沁水，逡逑室溫靜置１分鐘，１７９００Ｘｇ，室溫，離心１分鐘。離心管中的溶液即為逡逑回收的ＤＮＡ片段。逡逑ｈ）取回收后產(chǎn)物５４，邋２％瓊脂糖凝膠電泳鑒定產(chǎn)物，單一條帶，大小符逡逑合則送測序。依據(jù)測序結(jié)果分析目的基因啟動子的甲基化狀態(tài)。逡逑３甲基化結(jié)果分析逡逑３．１邋ＭＳＰ檢測結(jié)果分析逡逑甲基化評價和結(jié)果判定：逡逑１）邐ＭＧＭＴ基因非甲基化：非甲基化特異性引物有擴增條帶，甲基化引物無逡逑擴增條帶。逡逑２）邐ＭＧＭＴ基因甲基化：甲基化特異性引物有擴增條帶，非甲基化引物無擴逡逑增條帶；兩種特異性引物均出現(xiàn)條帶。逡逑ＮＵ邋Ｍ邋Ｕ邋Ｍ邋Ｕ邋Ｍ邋Ｕ逡逑
【學位授予單位】：山東大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2019
【分類號】：R739.41

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本文編號：2651085