【摘要】：目的:證實(shí)Lan CL2可調(diào)控膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞侵襲,闡釋Lan CL2的活化機(jī)制并鑒定出其相互作用蛋白,為發(fā)展新的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤治療方案提供預(yù)臨床實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。方法:利用si RNA干擾膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞Lan CL2的表達(dá),以及利用CRISPR/Cas9系統(tǒng)構(gòu)建Lan CL2敲除的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系,通過transwell侵襲實(shí)驗(yàn)、3D侵襲實(shí)驗(yàn)、侵襲性偽足形成實(shí)驗(yàn)、刺端形成實(shí)驗(yàn)(barbed end assay)和激光掃描共聚焦技術(shù),分析靶向Lan CL2對(duì)侵襲性偽足的形成和活性的影響。另外,通過構(gòu)建Lan CL2過表達(dá)的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系,同樣通過transwell侵襲實(shí)驗(yàn)、3D侵襲實(shí)驗(yàn)、侵襲性偽足形成實(shí)驗(yàn)、刺端形成實(shí)驗(yàn)和激光掃描共聚焦技術(shù)以及磷酸質(zhì)譜反向證明Lan CL2對(duì)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞侵襲性的調(diào)控作用。結(jié)果:Lan CL2基因在27%的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤組織中(580例中有154例為陽性結(jié)果)存在拷貝數(shù)變異和高擴(kuò)增現(xiàn)象,且檢測出高擴(kuò)增水平Lan CL2的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者有較短的總生存期;55%的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤樣本中(31例中有17例陽性結(jié)果),Lan CL2蛋白表達(dá)水平提高;其中,Lan CL2蛋白在8例復(fù)發(fā)的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤樣本中全部顯著高表達(dá),且與膠質(zhì)母細(xì)胞瘤是否復(fù)發(fā)相關(guān)(邏輯回歸分析p0.05)。另外,Marcks(Myristoylated alanine-rich C-kinase substrate)、MARCKSL1(MARCKS-like protein 1)、Cortactin、Stathmin 1、Myosin-9、Rasassociatedand pleckstrin homology domains-containing protein 1(RAPH1)和CDC42 effector protein4(CDC42EP4)等蛋白和細(xì)胞骨架及遷移侵襲相關(guān),而YAP1、STAT3、TAF12、NCOR2、NUP214、EIF4B和NIF1B等蛋白和核功能與轉(zhuǎn)錄因子活化相關(guān)。結(jié)論:LanCL2基因拷貝數(shù)變異與膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者預(yù)后相關(guān),且LanCL2蛋白表達(dá)與膠質(zhì)母細(xì)胞瘤復(fù)發(fā)和膠質(zhì)瘤級(jí)別相關(guān)。Lan CL2參與膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞侵襲的調(diào)控。
【圖文】：

我們還通過對(duì)我院的43 例膠質(zhì)母細(xì)胞瘤樣本進(jìn)行回顧性分析，發(fā)現(xiàn)與I 級(jí)膠質(zhì)瘤相比，LanCL2 基因在32 例膠質(zhì)母細(xì)胞瘤樣本（72%）中的擴(kuò)增水平較高，且有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異p<0.05)（圖2）。圖 2 我院的 43 例膠質(zhì)母細(xì)胞瘤樣本與 I 級(jí)膠質(zhì)瘤樣相比，LanCL2 基因的拷貝數(shù)變化。3.2 LanCL2 蛋白表達(dá)與膠質(zhì)母細(xì)胞瘤復(fù)發(fā)和膠質(zhì)瘤級(jí)別相關(guān)在本院的55%的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤樣本中（31 例中有17 例陽性結(jié)果），LanCL2蛋白表達(dá)水平提高；其中，LanCL2蛋白在8 例復(fù)發(fā)的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤樣本中全部顯著高表達(dá)，且與膠質(zhì)母細(xì)胞瘤是否復(fù)發(fā)相關(guān)（邏輯回歸分析p<0.05），提示LanCL2 功能與膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞的侵襲調(diào)控相關(guān)，從而導(dǎo)致腫瘤復(fù)發(fā)（圖3）。膠質(zhì)瘤組織芯片的免疫組化分析結(jié)果表明，LanCL2 的蛋白表達(dá)水平與膠質(zhì)瘤的級(jí)別有關(guān)

21圖 4 免疫組化分析膠質(zhì)瘤組織芯片中 LanCL2 的表達(dá)與定位情況。3.3 LanCL2 參與膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞侵襲的調(diào)控與正常星形細(xì)胞相比，LanCL2 蛋白在多種膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系中呈高表達(dá)。利用siRNA 干擾LanCL2 的表達(dá)后，膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞U-87 MG 的侵襲能力顯著降低（圖5）。而且，免疫熒光結(jié)果顯示，LanCL2 主要表達(dá)在U-87 MG 細(xì)胞的胞質(zhì)和胞核中，而cortactin 主要表達(dá)在細(xì)胞質(zhì)，LanCL2 和cortactin 在細(xì)胞質(zhì)中有共定位，ImagePro 軟件分析其重疊系數(shù)為0.83（值越接近1，重疊程度越高），Pearson 相關(guān)性分析也表明它們的定位相關(guān)（圖6）。
【學(xué)位授予單位】：安徽醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R739.41

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1 周修明;LanCL2調(diào)控膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞侵襲的機(jī)制研究[D];安徽醫(yī)科大學(xué);2019年

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本文編號(hào)：2645065