【摘要】：目的:探究miR-181a經(jīng)過氧糖剝奪再灌注后對N2a細胞缺血損傷中的作用。同時,也進一步研究miR-181a對靶蛋白絡(luò)絲蛋白(Reln)表達水平的調(diào)節(jié)和對N2a細胞氧糖剝奪再灌注處理后的Smac-IAPs信號通路的影響。方法:選擇小鼠N2a細胞為研究對象,用N2a細胞的OGD/R模型還原神經(jīng)細胞再灌注損傷的過程,將其隨機分為5組,依次為正常對照組、氧糖剝奪4小時再灌注各個時間組。用流式細胞儀測凋亡率,實時定量(Real-time)PCR技術(shù)測miR-181a表達水平,用免疫印跡法(WB)檢測Reln蛋白的表達變化,并用雙熒光素酶報告基因共轉(zhuǎn)染檢測miR-181a對Reln-3’UTR的直接調(diào)控作用。然后,用miR-181a-mimics使miR-181a表達上調(diào),檢測各組細胞的凋亡率、miR-181a水平及Reln蛋白水平。再用PCR檢測氧糖剝奪再灌注24小時Smac mRNA、XIAP mRNA的表達水平以及用WB檢測Reln、Smac、XIAP蛋白表達情況。結(jié)果:1.細胞經(jīng)OGD/R后凋亡率的變化:凋亡率與氧糖剝奪再灌注時間的延長成正比。OGD4h/R0h組,N2a細胞的凋亡率較正常對照組稍有增加,但不明顯(P0.05)。OGD4h/R4h組細胞的凋亡率與正常對照組相比較明顯升高(P0.01)。細胞再灌注12小時組和24小時組細胞的凋亡更加嚴重,同正常對照組比較,差異尤為顯著(P0.01)。2.miR-181a的表達變化:miR-181a的水平在N2a細胞OGD4h/R后明顯降低,且與氧糖剝奪再灌注的時間呈現(xiàn)負相關(guān)。OGD4h/R0h組N2a細胞的miR-181a水平較正常對照組對比就有明顯下降(P0.01)。OGD4/R4h組miR-181a的水平較之前下降更明顯(P0.01),當再灌注的時間進一步延長至12小時組亦或24小時時,miR-181a的水平下降更為顯著,與正常對照組比較,差異尤為顯著(P0.01)。3.miR-181a過表達組與正常對照組、試劑對照組比較,OGD4h/R24h后細胞的凋亡率明顯下降(P0.01)。4.上調(diào)miR-181a后,Reln蛋白顯著下降。運用雙熒光素酶報告基因檢測,結(jié)果顯示miR-181a顯著抑制熒光素酶活性(熒光比值為77.3%)。5.miR-181a過表達組較正常對照組、試劑對照組的Smac水平明顯下降(P0.01),而XIAP的水平卻稍有升高。結(jié)論:1.氧糖剝奪再灌注后,miR-181a能減少神經(jīng)細胞凋亡,可能對神經(jīng)細胞起保護作用;2.miR-181a在OGD4h/R后通過介導Smac-IAPs凋亡通路,實現(xiàn)神經(jīng)保護作用。
【圖文】：

圖 3-1 N2a 細胞 OGD4h/R 不同時間點的形態(tài)（×100）A:Normal 組；B：OGD4h/R0h 組；C：OGD4h/R4h 組；D：OGD4h/R12h 組；C：OGD4h/R24h 組糖剝奪再灌注后 N2a 細胞凋亡變化

N2a細胞OGD4h/R后不同時間的凋亡率示意圖
【學位授予單位】：南華大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R743

【參考文獻】

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本文編號：2640900