【摘要】：目的:探究miR-181a經(jīng)過氧糖剝奪再灌注后對(duì)N2a細(xì)胞缺血損傷中的作用。同時(shí),也進(jìn)一步研究miR-181a對(duì)靶蛋白絡(luò)絲蛋白(Reln)表達(dá)水平的調(diào)節(jié)和對(duì)N2a細(xì)胞氧糖剝奪再灌注處理后的Smac-IAPs信號(hào)通路的影響。方法:選擇小鼠N2a細(xì)胞為研究對(duì)象,用N2a細(xì)胞的OGD/R模型還原神經(jīng)細(xì)胞再灌注損傷的過程,將其隨機(jī)分為5組,依次為正常對(duì)照組、氧糖剝奪4小時(shí)再灌注各個(gè)時(shí)間組。用流式細(xì)胞儀測(cè)凋亡率,實(shí)時(shí)定量(Real-time)PCR技術(shù)測(cè)miR-181a表達(dá)水平,用免疫印跡法(WB)檢測(cè)Reln蛋白的表達(dá)變化,并用雙熒光素酶報(bào)告基因共轉(zhuǎn)染檢測(cè)miR-181a對(duì)Reln-3’UTR的直接調(diào)控作用。然后,用miR-181a-mimics使miR-181a表達(dá)上調(diào),檢測(cè)各組細(xì)胞的凋亡率、miR-181a水平及Reln蛋白水平。再用PCR檢測(cè)氧糖剝奪再灌注24小時(shí)Smac mRNA、XIAP mRNA的表達(dá)水平以及用WB檢測(cè)Reln、Smac、XIAP蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:1.細(xì)胞經(jīng)OGD/R后凋亡率的變化:凋亡率與氧糖剝奪再灌注時(shí)間的延長成正比。OGD4h/R0h組,N2a細(xì)胞的凋亡率較正常對(duì)照組稍有增加,但不明顯(P0.05)。OGD4h/R4h組細(xì)胞的凋亡率與正常對(duì)照組相比較明顯升高(P0.01)。細(xì)胞再灌注12小時(shí)組和24小時(shí)組細(xì)胞的凋亡更加嚴(yán)重,同正常對(duì)照組比較,差異尤為顯著(P0.01)。2.miR-181a的表達(dá)變化:miR-181a的水平在N2a細(xì)胞OGD4h/R后明顯降低,且與氧糖剝奪再灌注的時(shí)間呈現(xiàn)負(fù)相關(guān)。OGD4h/R0h組N2a細(xì)胞的miR-181a水平較正常對(duì)照組對(duì)比就有明顯下降(P0.01)。OGD4/R4h組miR-181a的水平較之前下降更明顯(P0.01),當(dāng)再灌注的時(shí)間進(jìn)一步延長至12小時(shí)組亦或24小時(shí)時(shí),miR-181a的水平下降更為顯著,與正常對(duì)照組比較,差異尤為顯著(P0.01)。3.miR-181a過表達(dá)組與正常對(duì)照組、試劑對(duì)照組比較,OGD4h/R24h后細(xì)胞的凋亡率明顯下降(P0.01)。4.上調(diào)miR-181a后,Reln蛋白顯著下降。運(yùn)用雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè),結(jié)果顯示miR-181a顯著抑制熒光素酶活性(熒光比值為77.3%)。5.miR-181a過表達(dá)組較正常對(duì)照組、試劑對(duì)照組的Smac水平明顯下降(P0.01),而XIAP的水平卻稍有升高。結(jié)論:1.氧糖剝奪再灌注后,miR-181a能減少神經(jīng)細(xì)胞凋亡,可能對(duì)神經(jīng)細(xì)胞起保護(hù)作用;2.miR-181a在OGD4h/R后通過介導(dǎo)Smac-IAPs凋亡通路,實(shí)現(xiàn)神經(jīng)保護(hù)作用。
【圖文】：

圖 3-1 N2a 細(xì)胞 OGD4h/R 不同時(shí)間點(diǎn)的形態(tài)（×100）A:Normal 組；B：OGD4h/R0h 組；C：OGD4h/R4h 組；D：OGD4h/R12h 組；C：OGD4h/R24h 組糖剝奪再灌注后 N2a 細(xì)胞凋亡變化

N2a細(xì)胞OGD4h/R后不同時(shí)間的凋亡率示意圖
【學(xué)位授予單位】：南華大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R743

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2640900