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黃藤素抑制三叉神經(jīng)痛大鼠三叉神經(jīng)節(jié)CGRP表達(dá)的初步研究

發(fā)布時間:2020-04-25 09:39
【摘要】:研究背景和目的:三叉神經(jīng)痛(Trigeminal Neuralgia,TN)又叫做“痛性痙攣”,是頜面部常見的慢性疼痛之一。有報道稱三叉神經(jīng)節(jié)(trigeminal ganglia,TGs)的降鈣素基因相關(guān)肽(calcitonin gene-related peptide,CGRP)在TN的痛覺傳遞中有重要作用。本研究擬通過觀察黃藤素(palmatine)對TN大鼠TGs中的CGRP和CGRP受體表達(dá)的影響和作用機(jī)制研究,為尋找預(yù)防和治療TN的新方法提供基礎(chǔ)實驗依據(jù)。方法:將健康的成年雄性Sprague-Dawley(SD)大鼠隨機(jī)均分為4組:假手術(shù)對照組(Sham group)、假手術(shù)+黃藤素組(Sham+Palmatine group)、三叉神經(jīng)痛模型組(TN group)、三叉神經(jīng)痛+黃藤素組(TN+Palmatine group)。我們將通過結(jié)扎大鼠眶下神經(jīng)造成慢性壓迫性損傷的方法來建立大鼠TN模型,配制10mg/ml黃藤素溶液按照2mg/100g的劑量在術(shù)后分別給假手術(shù)+黃藤素組及三叉神經(jīng)痛+黃藤素組大鼠腹腔注射2周;同時使用電子機(jī)械測痛儀自術(shù)后第1,3,5,7,9,11,13,15天記錄各組大鼠機(jī)械痛敏閾值。15天后,采用實時熒光定量PCR方法和免疫組織化學(xué)染色來檢測大鼠術(shù)側(cè)TGs中CGRP及其受體的表達(dá)變化,此外采用ELISA用于檢測各組大鼠血清中的炎性細(xì)胞因子TNF-α和1L-1β的變化情況。同時采用蛋白印跡法來檢測磷酸化蛋白激酶C(phosphated protein kinase C,p-PKC)的表達(dá)變化。結(jié)果:在術(shù)后15天內(nèi),行為學(xué)測試的結(jié)果表明,與Sham組大鼠相比,TN組大鼠手術(shù)側(cè)面部感覺區(qū)域的機(jī)械痛敏閾值明顯降低了(P0.05)。而連續(xù)黃藤素給藥的TN+Palmatine組大鼠在術(shù)后第7天到第15天,與TN組大鼠相比,閾值出現(xiàn)了顯著升高(P0.05)。另外,術(shù)后15天的qPCR和免疫組織化學(xué)染色結(jié)果表明,TN組大鼠與Sham組大鼠作比較,其TGs中CGRP及其受體CRLR、RAMP1的表達(dá)明顯升高(P0.05)。而TN+Palmatine組大鼠與TN組大鼠比較,其TGs中CGRP及其受體CRLR、RAMP1的表達(dá)顯著降低(P0.05)。ELISA檢測結(jié)果表明TN組大鼠血清中TNF-α和1L-1β水平和Sham組相比顯著升高,黃藤素治療可以顯著降低TN組大鼠血清中TNF-α和1L-1β的水平(P0.05)。蛋白印跡檢測結(jié)果表明,TN組與Sham組相比,其磷酸化蛋白激酶C顯著升高(P0.05)。TN+Palmatine組與TN組相比,其磷酸化蛋白激酶C顯著降低(P0.01)。而TN+Palmatine組、Sham+Palmatine組與Sham組相比,沒有明顯差異(P0.05)。結(jié)論:TGs中的CGRP與TN的痛覺傳遞密切相關(guān),而黃藤素能夠下調(diào)CGRP的表達(dá)對TN起到一定的鎮(zhèn)痛效果,其機(jī)制可能與通過抑制PKC信號通路磷酸化,降低血清中的炎癥因子TNF-α和1L-1β的濃度有關(guān)。
【圖文】:

痛敏,閾值,大鼠


第 3 章 結(jié)果第 3 章 結(jié)果3.1 大鼠行為學(xué)實驗結(jié)果術(shù)前各組大鼠之間的面部感覺區(qū)域的機(jī)械痛敏閾值都沒有明顯差異(P >0.05)。在手術(shù)后的 15 d 中,Sham 組與 Sham+Palmatine 組相比,其機(jī)械痛敏閾值也沒有顯著差別(P>0.05),而 TN 組大鼠的機(jī)械痛敏閾值下降最明顯,且與 Sham 組比較有顯著性差異(P<0.01)。另外,TN+Palmatine 組大鼠在術(shù)后第 1天時手術(shù)側(cè)面部機(jī)械痛敏閾值降至最低值,而每天持續(xù)黃藤素給藥后,從術(shù)后第 7 天開始到第 15 天與 TN 組對比其面部機(jī)械痛敏閾值顯著增加 (P <0.05)( 圖 1)。

大鼠,受體,表達(dá)水平


第 3 章 結(jié)果果術(shù)后第 15 天,使用 qPCR 檢測各組大鼠 TGs 中 CGRP 及其受體達(dá)情況。qPCR 結(jié)果表明,Sham 組和 Sham+Palmatine 組這兩組P 及其受體CRLR、RAMP1的mRNA的表達(dá)水平?jīng)]有明顯差異 (P >與 Sham 組比較,CGRP 及其受體 CRLR、RAMP1 的 mRNA 的表升高 (P < 0.05);TN+Palmatine 組與 TN 組的相比,CGRP 及其受體 P1 的 mRNA 的表達(dá)水平有明顯的降低 (P < 0.05) ( 圖 2、3、4)。采用 qPCR 檢測 TGs 中 CGRP、CRLR、RAMP1 的 mR
【學(xué)位授予單位】:南昌大學(xué)
【學(xué)位級別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2018
【分類號】:R745.11

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號:2640094

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