【摘要】：目的:惡性腦膠質(zhì)瘤是以血管異常增生為特征的中樞神經(jīng)系統(tǒng)惡性腫瘤。研究人員試圖通過抗血管生成治療來遏制膠質(zhì)瘤的進(jìn)展,但是血管生成擬態(tài)對于膠質(zhì)瘤抗血管生成治療并不敏感。因此,抑制血管生成擬態(tài)形成作為腫瘤內(nèi)皮依賴性血管生成治療的有效補(bǔ)充方法,將可能成為未來膠質(zhì)瘤綜合治療的發(fā)展方向。長鏈非編碼RNA(Long non-coding RNAs,LncRNAs)是一類不具編碼能力且長度超過200個(gè)核苷酸的RNA。有研究表明lncRNAs在膠質(zhì)瘤發(fā)生發(fā)展過程中發(fā)揮重要的調(diào)控作用。LINC00662廣泛表達(dá)于腦、卵巢等全身各種組織內(nèi),但具體生理功能不明。同時(shí),尚無研究報(bào)道LINC00662在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)水平以及是否參與調(diào)控膠質(zhì)瘤血管生成擬態(tài)。MicroRNAs(miRNAs)是一類在調(diào)節(jié)基因表達(dá)中起重要作用的短鏈非編碼RNA,它能夠結(jié)合靶基因mRNA 3'-非翻譯區(qū)(3'-UTR)并負(fù)向調(diào)控靶基因的表達(dá)。已有研究表明miR-874-3p在多種惡性腫瘤中表達(dá)水平下調(diào)并且發(fā)揮抑癌因子作用。但是,目前有關(guān)miR-874-3p在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)以及是否參與調(diào)控膠質(zhì)瘤血管生成擬態(tài)尚未見報(bào)道。本研究旨在研究LINC00662在膠質(zhì)瘤組織和細(xì)胞中的表達(dá)水平并探討LINC00662參與調(diào)控膠質(zhì)瘤血管生成擬態(tài)形成及相關(guān)惡性生物學(xué)行為的具體作用機(jī)制,進(jìn)一步為膠質(zhì)瘤的綜合治療尋找到新的治療靶點(diǎn)。研究方法:1、應(yīng)用CD34-PAS染色檢測膠質(zhì)瘤病理切片中的血管生成擬態(tài);2、應(yīng)用Real-time PCR檢測人膠質(zhì)瘤組織和U87、U251細(xì)胞系中LINC00662、miR-874-3p的表達(dá)水平;3、轉(zhuǎn)染沉默質(zhì)粒降低U87、U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中LINC00662的表達(dá)水平以制備LINC00662表達(dá)沉默的細(xì)胞系;4、構(gòu)建SDC1表達(dá)沉默的膠質(zhì)瘤細(xì)胞系;5、構(gòu)建miR-874-3p過表達(dá)和表達(dá)沉默的膠質(zhì)瘤細(xì)胞系;6、應(yīng)用CCK-8細(xì)胞增殖實(shí)驗(yàn)檢測上述基因表達(dá)變化對U87、U251細(xì)胞活力的影響;7、應(yīng)用Transwell遷移、侵襲實(shí)驗(yàn)檢測上述基因表達(dá)變化對U87、U251細(xì)胞遷移和侵襲的影響;8、應(yīng)用Matrigel管腔形成實(shí)驗(yàn)檢測膠質(zhì)瘤細(xì)胞血管生成擬態(tài)形成能力;9、應(yīng)用Western blot檢測膠質(zhì)瘤細(xì)胞中的SDC1、ROCK1、ROCK2、RhoA以及基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-2、MMP-9的內(nèi)源性表達(dá)水平;10、采用雙熒光素酶報(bào)告基因分析檢測LINC00662與miR-874-3p以及miR-874-3p與SDC1之間是否存在靶向作用關(guān)系;11、應(yīng)用RNA結(jié)合蛋白免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)研究LINC00662、miR-874-3p與Ago2之間的靶向作用關(guān)系。結(jié)果:1、LINC00662在膠質(zhì)瘤組織及細(xì)胞系中高表達(dá),且與膠質(zhì)瘤血管生成擬態(tài)正相關(guān);2、在膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中,沉默LINC00662的表達(dá)能夠顯著抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、遷移、侵襲、血管生成擬態(tài)形成能力并下調(diào)MMP-2及MMP-9的表達(dá)水平;3、膠質(zhì)瘤組織及細(xì)胞系中miR-874-3p的內(nèi)源性表達(dá)水平顯著高于正常腦組織及細(xì)胞系;4、過表達(dá)miR-874-3p能夠顯著抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、遷移、侵襲、血管生成擬態(tài)形成能力并下調(diào)MMP-2及MMP-9的表達(dá);5、在膠質(zhì)瘤細(xì)胞中,沉默LINC00662表達(dá)后能夠顯著上調(diào)膠質(zhì)瘤細(xì)胞中miR-874-3p的表達(dá);6、LINC00662與miR-874-3p之間存在靶向結(jié)合作用。同時(shí),二者能夠共同富集于Ago2復(fù)合體中;7、沉默LINC00662通過上調(diào)miR-874-3p的表達(dá)水平,能夠顯著抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、遷移、侵襲、血管生成擬態(tài)形成能力并下調(diào)MMP-2及MMP-9的表達(dá);7、miR-874-3p能夠靶向結(jié)合SDC1。同時(shí),LINC00662作為miR-874-3p的ceRNA,能夠正性調(diào)控SDC1的表達(dá);8、沉默SDC1通過抑制RhoA/ROCK信號通路,顯著下調(diào)MMP-2及MMP-9的表達(dá)。結(jié)論:1.LINC00662在膠質(zhì)瘤組織和細(xì)胞中表達(dá)增高,且與膠質(zhì)瘤血管生成擬態(tài)正性相關(guān)。沉默LINC00662通過上調(diào)miR-874-3p的表達(dá),抑制膠質(zhì)瘤血管生成擬態(tài)的形成。2.過表達(dá)miR-874-3p能夠靶向結(jié)合并下調(diào)SDC1的表達(dá),抑制膠質(zhì)瘤血管生成擬態(tài)的形成。3.沉默SDC1通過抑制RhoA/ROCK通路,以及下調(diào)血管生成擬態(tài)相關(guān)因子MMP-2和MMP-9的表達(dá),進(jìn)而抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞血管生成擬態(tài)的形成。
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R739.4

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本文編號：2632771