【摘要】：目的:帕金森病(Parkinson's disease,PD)是常發(fā)于中老年人的中樞神經(jīng)系統(tǒng)變性疾病,主要臨床表現(xiàn)為震顫、強(qiáng)直、運(yùn)動弛緩、姿勢平衡障礙等運(yùn)動癥狀,此外,常伴發(fā)抑郁、焦慮、便秘、睡眠障礙、認(rèn)知功能減退等非運(yùn)動癥狀。自噬是依賴溶酶體途徑對胞質(zhì)蛋白和細(xì)胞器進(jìn)行降解的一種過程,是細(xì)胞進(jìn)行自我保護(hù)的一種重要機(jī)制,自噬發(fā)生在基礎(chǔ)生理狀態(tài)下,參與細(xì)胞的基本生理過程,但也可以由不同種類的應(yīng)激所誘發(fā),然而過度的自噬會導(dǎo)致機(jī)能紊亂。研究表明,自噬失調(diào)與帕金森病的發(fā)病機(jī)制有關(guān)。艾司西酞普蘭(escitalopram,ESC)是新型的選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑(Selective Serotonin Reuptake Inhibitors,SSRIs),在臨床用于廣泛性焦慮、抑郁癥的治療,并有一定的神經(jīng)保護(hù)作用,目前研究發(fā)現(xiàn)ESC可以在海馬初級神經(jīng)元細(xì)胞中激活泛素介導(dǎo)的自噬-溶酶體降解途。本研究旨在探討ESC對1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氫吡啶(MPTP)處理的PC12細(xì)胞的保護(hù)作用及可能的作用機(jī)制。方法:根據(jù)研究目的將ESC(終濃度5μM、10μM、20μM、40μM、60μM、80μM)或/和MPTP(終濃度500μM、750μM、1000μM、1250μM、1500μM)加入到培養(yǎng)的PC12細(xì)胞中,以及在應(yīng)用1m M的3-MA后通過MTS檢測細(xì)胞存活率,Hoechst33258染色用熒光顯微鏡觀察細(xì)胞凋亡情況,Western blot檢測自噬標(biāo)記物L(fēng)C3B-Ⅱ、LC3B-Ⅰ和凋亡蛋白Bcl-2、Bax的表達(dá)情況。結(jié)果:1 MTS檢測各組PC12細(xì)胞存活率1.1 MPTP對PC12細(xì)胞存活率的影響用500μM、750μM、1000μM、1250μM、1500μM的MPTP處理PC12細(xì)胞24h、48h、72h,PC12細(xì)胞的存活率呈現(xiàn)出劑量依賴性和時間依賴性。隨著MPTP濃度的升高及時間的延長,PC12細(xì)胞存活率顯著下降。1.2 ESC對PC12細(xì)胞存活率的影響用5μM、10μM、20μM、40μM、60μM、80μM的ESC處理PC12細(xì)胞,處理24h時,細(xì)胞存活率較CON組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),雖然沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,但可以看出細(xì)胞存活率有先上升后下降的趨勢,在10μM時上升最明顯。處理48h時,80μM的ESC對PC12細(xì)胞具有損傷作用,細(xì)胞存活率下降約14.3%,較CON組有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),其余濃度的ESC對PC12細(xì)胞存活率較CON組無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。處理72h時,5μM、10μM和20μM的ESC增加細(xì)胞存活率,以10μM時增長最明顯,增長約12%,60μM和80μM的ESC降低細(xì)胞存活率,分別下降了約18.7%和32.9%,與CON組比有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),40μM的ESC對PC12細(xì)胞存活率較CON組無顯著差異(P0.05)。所以大劑量的ESC也會引起細(xì)胞凋亡。1.3 ESC預(yù)處理對MPTP處理的PC12細(xì)胞存活率的影響用10μM、20μM的ESC預(yù)處理PC12細(xì)胞1h,再加1000μM的MPTP繼續(xù)處理24h,以及5μM、10μM的ESC預(yù)處理PC12細(xì)胞1h,再加1000μM的MPTP繼續(xù)處理72h,與MPTP組相比均能顯著增加細(xì)胞存活率(P0.05)。1.4自噬抑制劑3-MA對各組細(xì)胞存活率的影響ESC+MPTP+3-MA組細(xì)胞存活率(65.23±2.96%)較ESC+MPTP組細(xì)胞存活率(73.18±2.27%)降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。應(yīng)用3-MA能顯著抑制ESC預(yù)處理對PC12細(xì)胞的神經(jīng)保護(hù)作用。2 Hoechst33258染色檢測細(xì)胞凋亡情況Hoechst33258染色發(fā)現(xiàn)1000μM的MPTP組PC12細(xì)胞核明顯固縮,細(xì)胞核呈現(xiàn)亮藍(lán)色熒光。10μM的ECS組PC12細(xì)胞核較CON組未見明顯改變,ESC預(yù)處理組較MPTP組能顯著減少細(xì)胞核固縮的現(xiàn)象,ESC預(yù)處理可以降低細(xì)胞凋亡率,且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3 Western blot檢測LC3B-Ⅱ/Ⅰ及Bcl-2/Bax蛋白表達(dá)情況Western blot檢測研究發(fā)現(xiàn)MPTP組LC3B-Ⅱ/Ⅰ水平明顯增加,Bcl-2/Bax較CON組顯著下降,10μM的ESC預(yù)處理后LC3B-Ⅱ/Ⅰ水平較MPTP組升高,而Bcl-2/Bax顯著下降,應(yīng)用自噬抑制劑3-MA后,LC3B-Ⅱ/Ⅰ水平和Bcl-2/Bax水平均出現(xiàn)下降。說明ESC通過PI3K/Akt/Bcl-2途徑對MPTP處理的PC12細(xì)胞發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用。結(jié)論:1.一定濃度的ESC處理適宜的時間能夠促進(jìn)細(xì)胞存活。2.ESC預(yù)處理可以增加PC12細(xì)胞存活率,降低MPTP處理的PC12細(xì)胞的凋亡率,表明了ESC有一定的神經(jīng)保護(hù)作用。3.ESC通過PI3K/Akt/Bcl-2途徑對MPTP處理的PC12細(xì)胞發(fā)揮神經(jīng)保護(hù)作用,自噬抑制劑3-MA抑制PI3K/Akt/Bcl-2途徑,抑制保護(hù)作用,推測保護(hù)機(jī)制可能部分與細(xì)胞自噬有關(guān)。
【圖文】：

圖 1 不同濃度 MPTP 處理不同時間對 PC12 細(xì)胞存活率的影 Effect of different concentrations of MPTP on cell viability ratecellsell viability rate of cells treated with different concentrations ignificantly lower than that of CON group (0μM MPTP ) at 24h, mean±SD)* P＜0.05

圖 2 不同濃度 ESC 處理不同時間對 PC12 細(xì)胞存活率的影響2 Effect of different concentrations of ESC on cell viability rate ocells was no significant difference of cell viability rate between d with different concentrations of ESC and CON group (0μM 8h,except the 80μM ESC group at 48h. However,when the cells5, 10 and 20μM ESC for 72 h, the cell viability rate was signsed than the control group, while the cell viability rate of 60 ESC groups were decreased .(mean±SD) * P＜0.05
【學(xué)位授予單位】：河北醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R742.5

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2627311