【摘要】：目的惡性周圍神經(jīng)鞘瘤(malignant peripheral nerve sheath tumor,MPNST)作為一種高度惡性神經(jīng)源性軟組織肉瘤其實(shí)并不常見(jiàn),約占所有肉瘤的4%;其中50%的MPNST繼發(fā)于1型神經(jīng)纖維瘤(NF1),約10%的病例與患者先前的放射治療相關(guān);截止到目前為止,其余40%的病例中并沒(méi)有發(fā)現(xiàn)明確的易感因素。MPNST具有惡性程度高,復(fù)發(fā)率高,轉(zhuǎn)移能力強(qiáng)的特點(diǎn),5年生存率僅為50%左右,而5年無(wú)病生存期僅為27%。MPNST的診斷仍然是一項(xiàng)具有挑戰(zhàn)性的工作,由于其非特異性的形態(tài)學(xué)特征并且缺乏特異性的IHC分子診斷標(biāo)記,使得其診斷標(biāo)記并不成系統(tǒng)。組蛋白H3在體內(nèi)存在單甲基化(me1)、二甲基化(me2)及三甲基化(me3)三種形式,其N-末端賴氨酸殘基K27是主要的甲基化修飾位點(diǎn)之一,甲基化的程度可通過(guò)抑制其對(duì)應(yīng)區(qū)域的DNA轉(zhuǎn)錄活性,達(dá)到抑制轉(zhuǎn)錄的效果。組蛋白3賴氨酸27位點(diǎn)的三甲基化(H3K27me3)在非NF1相關(guān)的MPNST中頻繁發(fā)生表達(dá)缺失,很有希望作為診斷MPNST的重要生物標(biāo)志物。本研究通過(guò)應(yīng)用組織芯片技術(shù)制備中國(guó)人群MPNST組織芯片,通過(guò)免疫組化的方法及細(xì)胞學(xué)驗(yàn)證來(lái)研究探討H3K27me3在MPNST中的表達(dá)及對(duì)預(yù)后的影響。方法本研究收集天津醫(yī)科大學(xué)腫瘤醫(yī)院病理科自1991年1月-2011年11月惡性周圍神經(jīng)鞘瘤病理組織標(biāo)本43例,樣本通過(guò)福爾馬林固定,石蠟包埋后,利用組織芯片技術(shù)(TMA)將其制備成芯片,然后運(yùn)用免疫組織化學(xué)的方法檢測(cè)芯片中各樣本的H3K27me3等蛋白的表達(dá)情況,收集病例樣本的臨床數(shù)據(jù)以及隨訪信息,根據(jù)病例樣本臨床特點(diǎn)將其分成兩組,即NF1相關(guān)組與非NF1相關(guān)組,再根據(jù)芯片中各臨床樣本的H3K27me3的免疫組化著色程度將其分為三組,即染色完全缺失組、染色部分缺失組以及保留染色組。采用蛋白印跡法對(duì)惡性周圍神經(jīng)鞘瘤的細(xì)胞內(nèi)H3K27me3的表達(dá)水平進(jìn)行驗(yàn)證。運(yùn)用SPSS 19.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析,H3K27me3的表達(dá)與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系用χ~2檢驗(yàn)或Fisher精確概率法檢驗(yàn)。以P0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)果1.MPNST組織芯片位點(diǎn)完整,H3K27me3表達(dá)缺失組約占65.11%,其中完全缺失組占39.53%,部分缺失組約占25.58%,即以H3K27me3表達(dá)缺失為診斷依據(jù)則MPNST的檢出率可達(dá)65.11%,且與原診斷一致。2.在39例非NF1相關(guān)的散發(fā)病例樣本中的有43.58%的H3K27me3完全缺失,28.20%的病例樣本H3K27me3的表達(dá)部分缺失,在4例NF1相關(guān)樣本中H3K27me3的染色100%保留,即在非NF1相關(guān)的MPNST中檢出率可達(dá)71.78%。3本研究共納入43例患者的MPNST樣本。其中大多數(shù)樣本(84%)起源于原發(fā)性或復(fù)發(fā)性病變,而16%的可用樣本來(lái)自轉(zhuǎn)移性病變。原發(fā)腫瘤位于雙側(cè)肢體部位的16例(37%),軀干部位的20例(47%),頭頸部位的7例(16%)。其中6例樣本(14%)是放化療前的狀態(tài)。此外,包括4個(gè)NF1相關(guān)樣本。H3K27me3的表達(dá)水平與性別、年齡、腫瘤大小、AJCC分級(jí)、放化療及復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移并無(wú)關(guān)聯(lián),而與MPNST是否為NF1型密切相關(guān)(P=0.014)。4在惡性周圍神經(jīng)鞘瘤細(xì)胞系ST88-14與STS26T中,提取細(xì)胞內(nèi)蛋白進(jìn)行蛋白印跡法實(shí)驗(yàn),結(jié)果發(fā)現(xiàn)與對(duì)照組相比,惡性周圍神經(jīng)鞘瘤細(xì)胞內(nèi)H3K27me3的表達(dá)水平明顯降低,說(shuō)明其大部分細(xì)胞H3K27me3表達(dá)缺失。結(jié)論本研究驗(yàn)證了組蛋白3賴氨酸27位點(diǎn)的三甲基化(H3K27me3)在MPNST中的表達(dá)變化,H3K27me3在大部分的惡性周圍神經(jīng)鞘膜瘤中是表達(dá)缺失的(其中包含表達(dá)完全缺失和表達(dá)部分缺失),并且若以H3K27me3的表達(dá)缺失作為MPNST的輔助診斷指標(biāo)具有良好的靈敏性和特異性。H3K27me3的蛋白表達(dá)水平與惡性周圍神經(jīng)鞘膜瘤的發(fā)病性別、年齡、腫瘤大小、AJCC分級(jí)、放化療以及復(fù)發(fā)和轉(zhuǎn)移并無(wú)關(guān)聯(lián),而與惡性周圍神經(jīng)鞘瘤是否為NF1相關(guān)的類型具有密切的關(guān)系,即在除外NF1相關(guān)臨床背景下的惡性周圍神經(jīng)鞘瘤的前期診斷中具有更為重要的意義,有望成為早期輔助診斷非NF1相關(guān)類型的惡性周圍神經(jīng)鞘瘤的生物學(xué)標(biāo)記物。
【圖文】：

圖 1 43 例 MPNST 組織芯片示意圖3. 按照上圖中 42 例惡性周圍神經(jīng)鞘膜瘤的位點(diǎn)，將蠟塊委托上海芯超生物科技有限公司進(jìn)行組織芯片的制作。4. 制備對(duì)照組組織芯片蠟塊：設(shè)計(jì)對(duì)照組組織芯片模具，其大小為5cm*25cm*35cm，將融化好的石蠟倒入模具中，先將倒好石蠟的模具放在室溫下冷卻，然后放入-20℃冰箱中靜置 5min ，再?gòu)哪＞咧腥〕鱿瀴K。5. 將對(duì)照組組織芯片蠟塊打孔：按照實(shí)驗(yàn)組組織芯片的排列方式打孔，每個(gè)組織位點(diǎn)間隔 0.5cm 空間，組織位點(diǎn)孔徑為 1.5mm，，每個(gè)位點(diǎn)之間的間距為 0.2mm。6. 以 1.5mm 為孔徑大小要求，在組織芯供體蠟塊上打孔取材，并標(biāo)記打孔取材的相應(yīng)部位。7.將取好的組織芯放入對(duì)照組組織芯片蠟塊的孔中，完成 42 個(gè)孔徑的空白蠟塊注， 再用蓋玻按壓蠟塊表面，使其平整。8. 將做好的按壓平整的組織芯片蠟塊放在塑料盒內(nèi)，置于 60℃烤箱中 5

圖 2 IHC 顯示 H3K27me3 在臨床組織樣Fig 1 IHC shows the expression of H3K27me3 .2 惡性周圍神經(jīng)鞘瘤 H3K27me3 的表達(dá)缺失與MPNST 中 H3K27me3 的表達(dá)情況與臨床病例患者的 MPNST 樣本。 大多數(shù)樣本（84％）16％的可用樣本來(lái)自轉(zhuǎn)移性病變。 原發(fā)腫瘤位 20 例（47％），頭頸部 7 例（16％）。6 個(gè)。 此外，包括 4 個(gè) NF1 相關(guān)樣本。按照臨床了 H3K27me3 IHC 的統(tǒng)計(jì)分析（表 2）。研究平與性別、年齡、腫瘤大小、AJCC 分級(jí)、放化 MPNST 是否為 NF1 型密切相關(guān)（P =0.014）
【學(xué)位授予單位】：天津醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R739.4

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本文編號(hào)：2627053