【摘要】：研究背景神經(jīng)病理性疼痛的發(fā)生發(fā)展與神經(jīng)損傷后繼發(fā)的神經(jīng)炎癥反應(yīng)密切相關(guān),有效的解決神經(jīng)炎癥反應(yīng)是治療神經(jīng)病理性疼痛的可行方向。保護素D1(Protectin D1)是特異性促分解介質(zhì)家族的重要成員,具有很強的抗炎、抗凋亡和神經(jīng)保護作用。有研究發(fā)現(xiàn),PD1可通過阻斷神經(jīng)損傷引起的炎癥反應(yīng)緩解神經(jīng)病理性疼痛。過氧化物酶體增殖物激活受體-γ(Peroxisome proliferatoractivated receptorγ,PPAR-γ)是核激素受體超家族的成員,在多種組織中表達,是與炎癥反應(yīng)密切相關(guān)的受體。最新研究證明,PD1可通過激活PPAR-γ抑制炎癥因子的表達。然而,PD1是否通過激活PPAR-γ抑制炎癥因子的表達緩解神經(jīng)病理性疼痛依然不清楚。研究目的本研究選用大鼠坐骨神經(jīng)分支選擇性結(jié)扎切斷(spared nerve injury,SNI)模型,通過術(shù)前鞘內(nèi)注射PD1及GW9662(PPAR-γ特異性拮抗劑),觀察大鼠痛行為學(xué)變化,檢測脊髓PPAR-γ、IL-6、TNF-α蛋白表達變化,研究PD1是否通過激活PPAR-γ抑制炎癥因子的表達緩解神經(jīng)病理性疼痛。研究方法1 SNI大鼠術(shù)后脊髓PPAR-γ表達變化雄性SD大鼠,隨機數(shù)表法分為兩組(n=20):坐骨神經(jīng)分支選擇性損傷組(SNI組)和對照組(Sham組)。術(shù)前3天測定大鼠術(shù)側(cè)及對側(cè)機械撤足閾值(paw withdrawal threshold,PWT),確定行為學(xué)基礎(chǔ)值(Baseline,BL);術(shù)后1 d、3 d、5 d、7 d、10 d、14 d測定大鼠術(shù)側(cè)及對側(cè)機械撤足閾值。各組于0 d、術(shù)后3 d、5 d、7 d、14 d完成痛行為學(xué)測定后分別取3只大鼠,Western-Blot檢測術(shù)側(cè)脊髓PPAR-γ的表達變化。2鞘內(nèi)注射PD1,觀察其對SNI大鼠機械性痛覺超敏及脊髓PPAR-γ、TNF-α、IL-6表達的影響鞘內(nèi)置管成功的雄性SD大鼠,隨機數(shù)表法分為五組(n=11):Sham+Vehicle組、SNI+Vehicle組、SNI+PD1 100 ng組、SNI+PD1 300 ng組、SNI+PD1 900 ng組。術(shù)前30 min至術(shù)后7 d連續(xù)8天鞘內(nèi)注射PD1或Vehicle,每天一次。術(shù)前3天測定大鼠術(shù)側(cè)及對側(cè)機械性撤足閾值,確定行為學(xué)基礎(chǔ)值;并于術(shù)后1 d、3 d、5 d、7 d、10 d、14 d測定大鼠術(shù)側(cè)及對側(cè)機械撤足閾值。各組于術(shù)后7 d完成痛行為學(xué)測定后分別取3只大鼠,WesternBlot檢測術(shù)側(cè)脊髓PPAR-γ、TNF-α、IL-6的表達水平。Vehicle:10%DMSO。3鞘內(nèi)預(yù)注PPAR-γ特異性拮抗劑GW9662,觀察其對PD1鎮(zhèn)痛作用及脊髓PPAR-γ、TNF-α、IL-6表達的影響鞘內(nèi)置管成功的雄性SD大鼠,隨機數(shù)表法分為六組(n=11):Sham+Vehicle+Vehicle組、SNI+Vehicle+Vehicle組、SNI+PD1+Vehicle組、SNI+Vehicle+GW9662 200μg組、SNI+PD1+GW9662 100μg組、SNI+PD1+GW9662 200μg組。預(yù)處理組術(shù)前至術(shù)后7 d連續(xù)8天鞘內(nèi)注射PPAR-γ特異性拮抗劑GW9662或Vehicle,每天一次,于PD1注射前15 min注射。術(shù)前3天測定大鼠術(shù)側(cè)及對側(cè)機械性撤足閾值,確定行為學(xué)基礎(chǔ)值;并于術(shù)后1d、3 d、5 d、7 d、10 d、14 d測定大鼠術(shù)側(cè)及對側(cè)機械撤足閾值。各組于術(shù)后7 d完成痛行為學(xué)測定后分別取3只大鼠,Western-Blot檢測術(shù)側(cè)脊髓PPAR-γ、TNF-α、IL-6的表達水平。Vehicle:10%DMSO。實驗結(jié)果1 SNI引起大鼠機械性痛覺超敏,脊髓PPAR-γ蛋白表達下調(diào)坐骨神經(jīng)分支選擇性損傷(spared nerve injury,SNI)模型引起大鼠術(shù)側(cè)機械性痛覺超敏。行為學(xué)結(jié)果顯示:SNI組大鼠術(shù)側(cè)PWT于術(shù)后1 d開始下降,術(shù)后7 d開始維持在較低水平,持續(xù)時間超過兩周(圖-1.1 A);Western-Blot結(jié)果顯示:SNI引起大鼠術(shù)側(cè)脊髓PPAR-γ表達下調(diào)(圖-1.2)。2鞘內(nèi)注射PD1減輕SNI所致大鼠機械性痛覺超敏,引起脊髓PPAR-γ蛋白表達上調(diào),TNF-α、IL-6的表達下調(diào)鞘內(nèi)注射PD1可減輕SNI引起的大鼠術(shù)側(cè)機械性痛覺超敏。與Vehicle組相比,PD1治療組劑量依賴性的升高大鼠術(shù)側(cè)PWT(圖-2.1 A)。Western-Blot結(jié)果顯示:鞘內(nèi)注射PD1可以抑制SNI引起的TNF-α、IL-6的表達上調(diào),PPAR-γ表達下調(diào)(圖-2.2)。3鞘內(nèi)預(yù)注GW9662可以減弱PD1鎮(zhèn)痛作用,引起脊髓PPAR-γ蛋白表達下調(diào),TNF-α、IL-6的表達上調(diào)鞘內(nèi)預(yù)注GW9662可劑量依賴性減弱PD1的鎮(zhèn)痛作用。與PD1組相比,GW9662預(yù)處理組劑量依賴性的降低SNI大鼠術(shù)側(cè)PWT(圖-3.1 A)。Western-Blot結(jié)果顯示:鞘內(nèi)預(yù)注GW9662可以抑制PD1引起的大鼠脊髓TNF-α、IL-6的表達下調(diào),PPAR-γ表達上調(diào)(圖-3.2)。結(jié)論PD1可能通過激活PPAR-γ抑制炎癥因子的表達緩解神經(jīng)病理性疼痛
【圖文】：

等待蘇醒。蘇醒后將大鼠放置在飼養(yǎng)架上，添加適量的水和食物。注意：操作過程中嚴格遵守?zé)o菌原則。圖.IA-D SNI 模型神經(jīng)結(jié)扎示意圖2.3 鞘內(nèi)置管及給藥術(shù)前導(dǎo)管的準備：在進行鞘內(nèi)置管術(shù)前一天應(yīng)將 PE-10 導(dǎo)管準備好。首先根據(jù)第二天手術(shù)大鼠的數(shù)量，多截取 5 根備用。導(dǎo)管長度為 18.5cm,隨后在距離導(dǎo)管一端 3 cm 處打結(jié)。導(dǎo)管備好后進行消毒：75% 乙醇反復(fù)沖洗三遍，

結(jié)果1 SNI 引起雄性 SD 大鼠脊髓 PPAR-γ 蛋白表達下調(diào)成功造模是動物實驗的第一步，，造模失敗接下來的實驗就無從談起。本課題使用 Richner 的方法制造大鼠坐骨神經(jīng)分支選擇結(jié)扎切斷（Spared nerveinjury , SNI）模型[40]。結(jié)果：與 Sham 組相比，SNI 組術(shù)側(cè)足底 PWT 于術(shù)后1 d 開始下降，術(shù)后 7 d 開始維持在較低水平，持續(xù)時間超過兩周，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（***P < 0.001）（圖-1.1 A）；SNI 手術(shù)對大鼠對側(cè)足底 PWT 無影響（圖-1.1 B）。SNI 造模成功。
【學(xué)位授予單位】：鄭州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R741

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本文編號：2626662