【摘要】：目的:許多研究表明人巨細(xì)胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)與膠質(zhì)瘤的惡性發(fā)展密切相關(guān),如影響細(xì)胞周期、抑制細(xì)胞凋亡、促進(jìn)血管生成和幫助細(xì)胞免疫逃避等。近年來(lái)研究顯示參與DNA拓?fù)淇臻g結(jié)構(gòu)相互轉(zhuǎn)換的核酶拓?fù)洚悩?gòu)酶2A(TOP2A)在許多惡性腫瘤中高表達(dá),有望成為腫瘤預(yù)后的新型分子標(biāo)志物。但尚未見(jiàn)關(guān)于HCMV感染與TOP2A表達(dá)的相關(guān)研究。本研究通過(guò)檢測(cè)IE1和TOP2A在膠質(zhì)瘤中的表達(dá),研究膠質(zhì)瘤HCMV感染與TOP2A表達(dá)的關(guān)系。方法:在Oncomine數(shù)據(jù)庫(kù)平臺(tái),利用其在線分析工具薈萃分析了6個(gè)不同數(shù)據(jù)集中膠質(zhì)瘤樣本與正常組織對(duì)照樣本中TOP2A的表達(dá)水平。PrognoScan數(shù)據(jù)庫(kù)分析GSE4271 77例膠質(zhì)瘤樣本和GSE4412 74例膠質(zhì)瘤樣本,預(yù)測(cè)TOP2A的表達(dá)情況與膠質(zhì)瘤生存預(yù)后的關(guān)系。收集并分析膠質(zhì)瘤組織石蠟標(biāo)本58例。采用免疫組織化學(xué)方法檢測(cè)樣本中TOP2A蛋白和HCMV IE1蛋白的表達(dá)情況,并分析HCMV感染和TOP2A表達(dá)的相關(guān)性。以HCMV感染人膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組,未感染HCMV U87細(xì)胞對(duì)照組、HCMV+800μmol/L更昔洛韋(GCV)陰性對(duì)照組。應(yīng)用蛋白質(zhì)印跡法(Western Blot)的方法檢測(cè)IE1和TOP2A蛋白的表達(dá)。取HCMV感染后的U87細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)組,未感染HCMV的U87對(duì)照組,異種移植兩組細(xì)胞于B-NSG重度免疫缺陷鼠,每組4只。成瘤后采用免疫組化檢測(cè)IE1和TOP2A蛋白的表達(dá)。結(jié)果:在Oncomine數(shù)據(jù)庫(kù)平臺(tái)薈萃分析853例膠質(zhì)瘤樣本和52例正常腦組織樣本顯示,TOP2A在膠質(zhì)瘤組中明顯高表達(dá)(P=3.14í10~(-6),中位數(shù)=126)。PrognoScan數(shù)據(jù)庫(kù)平臺(tái)分析GSE4271 77例膠質(zhì)瘤樣本示:TOP2A高表達(dá)與膠質(zhì)瘤死亡事件負(fù)相關(guān)[P=0.002735,HR=1.41(1.13-1.76)]。分析GSE4412 74例膠質(zhì)瘤樣本示TOP2A高表達(dá)與膠質(zhì)瘤死亡事件負(fù)相關(guān)[P=0.009506,HR=1.37(1.08-1.73)]。膠質(zhì)瘤石蠟樣本免疫組化結(jié)果顯示:與瘤旁免疫組織對(duì)比,膠質(zhì)瘤中TOP2A明顯高表達(dá)(P0.0001,t=4.578);TOP2A的表達(dá)情況與患者的腫瘤分級(jí)相關(guān)(P0.0001,F=11.91)。在所有膠質(zhì)瘤樣本中,IE1陽(yáng)性率(56/58,98%),IE1低表達(dá)組(28/58,48%),IE1高表達(dá)(30/58,62%)。IE1低表達(dá)組與IE1高表達(dá)組對(duì)照顯示:TOP2A在IE1高表達(dá)組明顯高表達(dá)(P0.0001,t=4.479)。Western blot結(jié)果均表明:與未感染HCMV和HCMV感染+800μmol/L GCV雙陰性對(duì)照組相比,MOI=2感染U87細(xì)胞48h后TOP2A蛋白明顯高表達(dá)(P=0.0068,t=4.436)。腫瘤異種移植實(shí)驗(yàn)顯示:HCMV感染組U87細(xì)胞成瘤速度快于HCMV陰性組U87細(xì)胞(P0.0001,t=2.430)。成瘤31天后,HCMV感染組瘤體重量高于HCMV陰性組(P=0.0133,t=5.265)。瘤體組織免疫組化顯示:在HCMV感染組中TOP2A明顯高于HCMV陰性組(P0.0001,t=5.447)。結(jié)論:與正常腦組織相比,膠質(zhì)瘤組織中TOP2A高表達(dá),并可能與膠質(zhì)瘤的腫瘤生存預(yù)后有關(guān)。HCMV感染膠質(zhì)瘤后能促進(jìn)TOP2A高表達(dá),進(jìn)而促進(jìn)膠質(zhì)瘤惡性進(jìn)展。
【圖文】：

（P=2.59 10-13，t=30.6，圖3.1b）。另外在Sun L等人的數(shù)據(jù)芯片中顯示TOP2A的表達(dá)高于正常腦組織 102.5 倍（P=2.37 10-27，t=18.62，圖 3.1c）。Table 3.1 在 Oncomine 數(shù)據(jù)庫(kù)平臺(tái) meta 分析 6 個(gè)不同數(shù)據(jù)集 TOP2A 基因的表達(dá)情況數(shù)據(jù)集 (樣本總數(shù)) 膠質(zhì)瘤與正常對(duì)照（樣本數(shù)） 差異倍數(shù) P 值高表達(dá)基因Gene RankSun Brain(150)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 81 vs. 正常對(duì)照 23 102.54 2.37 10-2722 (in top1%)少突膠質(zhì)細(xì)胞 50 vs. 正常對(duì)照 23 28.44 8.4 10-1827 (in top1%)間變性星形細(xì)胞瘤19 vs正常對(duì)照23 34.64 4.10 10-1238 (in top1%)Liang Brain (33) 膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 31 vs 正常對(duì)照 2 2.20 6.27 10-6115 (in top2%)TCGA Brain (552) 膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 542 vs 正常對(duì)照 10 28.90 2.59 10-13137 (in top2%)French Brain (29) 間變性少突膠質(zhì)瘤 23 vs 正常對(duì)照 6 9.68 1.15 10-8145 (in top1%)Shai Brain (34) 膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 27 vs 腦白質(zhì) 7 2.29 1.17 10-6227 (in top3%)Murat Brain (84) 膠質(zhì)母細(xì)胞瘤 80 vs. 正常對(duì)照 4 13.76 2

PrognoScan數(shù)據(jù)庫(kù)平臺(tái)生成膠質(zhì)瘤病人TOP2AmRNAKaplanMeier生存曲線
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R739.41

【參考文獻(xiàn)】

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2 楊發(fā)達(dá);賈璋林;;TOP2A在結(jié)直腸癌組織中的表達(dá)和意義[J];南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2010年08期

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本文編號(hào)：2624047