發(fā)布時間：2020-04-12 00:37

【摘要】：目的:許多研究表明人巨細胞病毒(human cytomegalovirus,HCMV)與膠質瘤的惡性發(fā)展密切相關,如影響細胞周期、抑制細胞凋亡、促進血管生成和幫助細胞免疫逃避等。近年來研究顯示參與DNA拓撲空間結構相互轉換的核酶拓撲異構酶2A(TOP2A)在許多惡性腫瘤中高表達,有望成為腫瘤預后的新型分子標志物。但尚未見關于HCMV感染與TOP2A表達的相關研究。本研究通過檢測IE1和TOP2A在膠質瘤中的表達,研究膠質瘤HCMV感染與TOP2A表達的關系。方法:在Oncomine數據庫平臺,利用其在線分析工具薈萃分析了6個不同數據集中膠質瘤樣本與正常組織對照樣本中TOP2A的表達水平。PrognoScan數據庫分析GSE4271 77例膠質瘤樣本和GSE4412 74例膠質瘤樣本,預測TOP2A的表達情況與膠質瘤生存預后的關系。收集并分析膠質瘤組織石蠟標本58例。采用免疫組織化學方法檢測樣本中TOP2A蛋白和HCMV IE1蛋白的表達情況,并分析HCMV感染和TOP2A表達的相關性。以HCMV感染人膠質瘤U87細胞為實驗組,未感染HCMV U87細胞對照組、HCMV+800μmol/L更昔洛韋(GCV)陰性對照組。應用蛋白質印跡法(Western Blot)的方法檢測IE1和TOP2A蛋白的表達。取HCMV感染后的U87細胞為實驗組,未感染HCMV的U87對照組,異種移植兩組細胞于B-NSG重度免疫缺陷鼠,每組4只。成瘤后采用免疫組化檢測IE1和TOP2A蛋白的表達。結果:在Oncomine數據庫平臺薈萃分析853例膠質瘤樣本和52例正常腦組織樣本顯示,TOP2A在膠質瘤組中明顯高表達(P=3.14í10~(-6),中位數=126)。PrognoScan數據庫平臺分析GSE4271 77例膠質瘤樣本示:TOP2A高表達與膠質瘤死亡事件負相關[P=0.002735,HR=1.41(1.13-1.76)]。分析GSE4412 74例膠質瘤樣本示TOP2A高表達與膠質瘤死亡事件負相關[P=0.009506,HR=1.37(1.08-1.73)]。膠質瘤石蠟樣本免疫組化結果顯示:與瘤旁免疫組織對比,膠質瘤中TOP2A明顯高表達(P0.0001,t=4.578);TOP2A的表達情況與患者的腫瘤分級相關(P0.0001,F=11.91)。在所有膠質瘤樣本中,IE1陽性率(56/58,98%),IE1低表達組(28/58,48%),IE1高表達(30/58,62%)。IE1低表達組與IE1高表達組對照顯示:TOP2A在IE1高表達組明顯高表達(P0.0001,t=4.479)。Western blot結果均表明:與未感染HCMV和HCMV感染+800μmol/L GCV雙陰性對照組相比,MOI=2感染U87細胞48h后TOP2A蛋白明顯高表達(P=0.0068,t=4.436)。腫瘤異種移植實驗顯示:HCMV感染組U87細胞成瘤速度快于HCMV陰性組U87細胞(P0.0001,t=2.430)。成瘤31天后,HCMV感染組瘤體重量高于HCMV陰性組(P=0.0133,t=5.265)。瘤體組織免疫組化顯示:在HCMV感染組中TOP2A明顯高于HCMV陰性組(P0.0001,t=5.447)。結論:與正常腦組織相比,膠質瘤組織中TOP2A高表達,并可能與膠質瘤的腫瘤生存預后有關。HCMV感染膠質瘤后能促進TOP2A高表達,進而促進膠質瘤惡性進展。
【圖文】：

（P=2.59 10-13，t=30.6，圖3.1b）。另外在Sun L等人的數據芯片中顯示TOP2A的表達高于正常腦組織 102.5 倍（P=2.37 10-27，t=18.62，圖 3.1c）。Table 3.1 在 Oncomine 數據庫平臺 meta 分析 6 個不同數據集 TOP2A 基因的表達情況數據集 (樣本總數) 膠質瘤與正常對照（樣本數） 差異倍數 P 值高表達基因Gene RankSun Brain(150)膠質母細胞瘤 81 vs. 正常對照 23 102.54 2.37 10-2722 (in top1%)少突膠質細胞 50 vs. 正常對照 23 28.44 8.4 10-1827 (in top1%)間變性星形細胞瘤19 vs正常對照23 34.64 4.10 10-1238 (in top1%)Liang Brain (33) 膠質母細胞瘤 31 vs 正常對照 2 2.20 6.27 10-6115 (in top2%)TCGA Brain (552) 膠質母細胞瘤 542 vs 正常對照 10 28.90 2.59 10-13137 (in top2%)French Brain (29) 間變性少突膠質瘤 23 vs 正常對照 6 9.68 1.15 10-8145 (in top1%)Shai Brain (34) 膠質母細胞瘤 27 vs 腦白質 7 2.29 1.17 10-6227 (in top3%)Murat Brain (84) 膠質母細胞瘤 80 vs. 正常對照 4 13.76 2

PrognoScan數據庫平臺生成膠質瘤病人TOP2AmRNAKaplanMeier生存曲線
【學位授予單位】：青島大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2018
【分類號】：R739.41

【參考文獻】

相關期刊論文 前3條

1 宋靜宜;錢冬萌;王斌;黃睿;胡明;華曉敏;朱秀麗;陳豪;宋旭霞;;HCMV感染對膠質瘤細胞U87自噬的影響[J];微生物學雜志;2015年01期

2 楊發(fā)達;賈璋林;;TOP2A在結直腸癌組織中的表達和意義[J];南方醫(yī)科大學學報;2010年08期

3 朱誠,盧亦成,王駒,白如林,丁學華,蔡如玨,袁國j,顧健人,金海英,許秀蘭;胸苷激酶基因治療腦膠質瘤25例報告[J];中華神經外科疾病研究雜志;2002年02期

相關博士學位論文 前1條

1 胡明;HCMV IE86介導的乙�；{控參與神經膠質瘤發(fā)展的作用機制研究[D];青島大學;2014年

相關碩士學位論文 前1條

1 王桐梅;HCMV感染對惡性神經膠質瘤細胞增殖、凋亡的影響及作用機制的研究[D];青島大學;2014年

，

本文編號：2624047