【摘要】：目的:通過觀測腦出血患者腦脊液(CSF)中生化指標(biāo)和miRNA表達(dá)變化,在蛋白水平和核酸水平層面篩選可用于腦出血疾病輔助診斷的CSF標(biāo)志物,進(jìn)而評(píng)估其臨床應(yīng)用價(jià)值。方法:選取腦出血(ICH)疾病患者26例,依據(jù)格拉斯哥評(píng)分(GCS)將其分為輕度ICH組(13例)、重度ICH組(13例),同時(shí)選取22例同期排除腦部疾病的住院患者作為對(duì)照組。采集各組研究對(duì)象入院48h內(nèi)CSF樣本3~5ml,按實(shí)驗(yàn)?zāi)康暮鸵髮?duì)原始樣本行前處理制備待試樣本。在蛋白水平層面:采用全自動(dòng)生化分析儀和化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢測β_2微球蛋白(β_2-MG)、門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶(AST)、乳酸(LAC)、乳酸脫氫酶(LD)、微量白蛋白(mAlb)、神經(jīng)元特異性烯醇化酶(NSE)和星形膠質(zhì)源性蛋白(S100B)水平的表達(dá)變化,評(píng)估上述指標(biāo)診斷腦出血疾病的價(jià)值;在核酸水平層面:以cel miRNA-39為外參,應(yīng)用qRT-PCR方法檢測文獻(xiàn)報(bào)道的與中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病相關(guān)的15個(gè)靶標(biāo)miRNA,觀察各靶標(biāo)miRNA在腦出血疾病中的表達(dá)變化、評(píng)估其診斷價(jià)值,進(jìn)而應(yīng)用生物信息學(xué)分析方法預(yù)測潛在與腦損傷相關(guān)的靶基因。結(jié)果:在蛋白水平層面:與對(duì)照組相比,輕度ICH組、重度ICH組CSF中LD、GLU、CL表達(dá)變化無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05);mAlb、PRO、清蛋白指數(shù)(QAlb,QAlb=CAlb/SAlb)水平在輕、重度ICH組中顯著升高(P0.05),但隨ICH損傷程度變化不大;而NSE、S100B、β_2-MG、AST、LAC水平在輕、重度ICH組中顯著升高(P0.05),并隨ICH損傷程度呈現(xiàn)增高趨勢。基于前期預(yù)實(shí)驗(yàn)結(jié)果,并結(jié)合相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道,選擇S100B、NSE作為下一步研究對(duì)象。對(duì)二者行ROC曲線分析,結(jié)果顯示NSE、S100B診斷ICH的曲線下面積、敏感度、特異度分別為0.931[95%CI:0.857~0.892]、80.8%、95.5%和0.795[95%CI:0.670~0.921]、76.9%、77.3%;兩者聯(lián)合檢測在特異度與單項(xiàng)檢測相當(dāng)(73.8%)的前提下,可提高診斷ICH的AUC至0.965,敏感度至95.6%。進(jìn)一步的研究顯示,NSE的水平與ICH患者出血量顯著相關(guān)(r=0.86;P0.05),S100B的水平與ICH患者出血量呈弱相關(guān)(r=0.49;P0.05);NSE、S100B與Qalb存在正相關(guān)關(guān)系(r分別為0.443、0.606)(P0.05),提示二指標(biāo)與血腦屏障損傷相關(guān);另外NSE、S100B表達(dá)水平與NIHSS評(píng)分均呈正相關(guān)(r分別為0.596、0.615)(P0.05),提示S100B、NSE蛋白可用于腦出血神經(jīng)功能缺損評(píng)估,進(jìn)一步對(duì)其診斷效能進(jìn)行分析,結(jié)果顯示S100B、NSE鑒別低、高NIHSS評(píng)分組腦出血疾病的敏感度分別為78.9%、80.8%,特異度分別為73.3%、55.2%,二指標(biāo)聯(lián)合檢測可顯著提高敏感度至95.9%(P0.05)。在核酸水平層面:ICH患者miR-124-3p、miR-146a-5p表達(dá)顯著上調(diào),進(jìn)而分析其在診斷ICH的效能,結(jié)果顯示:miR-124-3p、miR-146a-5p診斷ICH的AUC、敏感度、特異度分別為0.667[95%CI:0.512~0.822]、68.8%、81.8%和0.878[95%CI:0.776~0.844]、50.1%、86.4%,二者聯(lián)合可提高診斷ICH的敏感度至84.4%;進(jìn)一步的生物信息學(xué)分析結(jié)果顯示:miR-124-3p可預(yù)測到91個(gè)靶基因,miR-146a-5p可預(yù)測到126個(gè)靶基因,其中包括SERP1、PDCD6、VEGFR-2,提示miR-124-3p、miR-146a-5p可能參與細(xì)胞凋亡、炎癥反應(yīng)、血管內(nèi)皮的損傷與修復(fù)過程。結(jié)論:1.腦脊液中NSE、S100B水平可用于腦出血實(shí)驗(yàn)室輔助診斷,其表達(dá)變化可反映腦損傷嚴(yán)重程度;2.腦出血患者腦脊液中miR-124-3p、miR-146a-5p表達(dá)顯著上調(diào),兩者聯(lián)合檢測可用于ICH的實(shí)驗(yàn)室輔助診斷;3.miR-124-3p、miR-146a-5p可能參與腦損傷病理生理過程。
【圖文】：

監(jiān)測；臨床上常用的神經(jīng)功能評(píng)分雖然簡捷、易行，但無法客觀反應(yīng)病此，，腦出血疾病的早期診斷及客觀的病情評(píng)估成為臨床關(guān)注的焦點(diǎn)和熱傷標(biāo)志物有可能是解決這一問題的關(guān)鍵，相對(duì)于全血、血漿或血清而言白標(biāo)志物可更直接、客觀的反映腦損傷及腦損傷嚴(yán)重程度。研究，在蛋白水平層面，采用全自動(dòng)生化分析儀和化學(xué)發(fā)光免疫分析儀檢（β2-MG）、門冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶（AST）、乳酸（LAC）、乳酸脫氫酶（白（mAlb）、神經(jīng)元特異性烯醇化酶（NSE）、星形膠質(zhì)源性蛋白（S100變化，評(píng)估上述指標(biāo)在腦出血疾病中的診斷價(jià)值，旨在為腦出血的早期情評(píng)估遴選臨床檢驗(yàn)診斷指標(biāo)提供實(shí)驗(yàn)室參考。一、材料與方法對(duì)象 基本資料取 2017 年 3 月至 2018 年 9 月期間在本院神經(jīng)外科確診的的新發(fā) ICH 2例組（其中包括基底節(jié)出血 16 例）。平均年齡 56.35±13.90 歲，其中包括和 10 名女性患者，腦出血典型病例 CT 檢查結(jié)果見圖 1。

圖 2 CSF-NSE、S100B 單獨(dú)和聯(lián)合檢測的診斷腦出血的效能分析Figure 2 Efficacy analysis of CSF-NSE, S100B alone and combined detection fordiagnosis of ICH4. CSF-NSE、S100B 表達(dá)變化與腦出血量的相關(guān)性分析應(yīng)用 Pearson 直線相關(guān)分析 CSF-NSE、S100B 水平的表達(dá)變化是否與腦出血量有聯(lián)，結(jié)果顯示，CSF-NSE 水平與 ICH 患者出血量顯著相關(guān)（r=0.86; P<0.01，圖 3A）CSF-S100B 水平與 ICH 患者出血量呈弱相關(guān)（r=0.49; P<0.05，圖 3B）。
【學(xué)位授予單位】：石河子大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R743.34

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2624135