發(fā)布時(shí)間：2020-04-10 05:59

【摘要】：目的:探討不同發(fā)育時(shí)期小腦各皮層Nna1(nervous system nuclear protein induced by axotomy protein 1,Nna1)表達(dá)與浦肯野細(xì)胞的胞體和樹突以及顆粒細(xì)胞的變化之間的關(guān)系,為小腦發(fā)育相關(guān)疾病的基因靶向治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。方法:本研究通過限制性內(nèi)切酶剪切以及PCR的方法檢測實(shí)驗(yàn)動(dòng)物基因型,將野生型小鼠(wild type,wt)設(shè)置為對(duì)照組,ams純合子小鼠設(shè)置為實(shí)驗(yàn)組作為研究對(duì)象。分別觀察出生后7天、15天、21天、28天小鼠小腦發(fā)育情況。通過免疫組化,免疫熒光的實(shí)驗(yàn)方法檢測不同發(fā)育天數(shù)(P7、P15、P21、P28)小鼠的小腦皮層中Nna1抗原表達(dá)。通過western blot檢測各基因型小鼠小腦皮層中蛋白表達(dá)情況。結(jié)果:野生型小鼠(wt)小腦的分子層和顆粒層均顯示Nna1染色陽性。其陽性染色強(qiáng)度在出生后7天的小鼠小腦中達(dá)到峰值,即在浦肯野細(xì)胞(PCs)樹突成熟之前,隨后染色強(qiáng)度逐漸減低。對(duì)于浦肯野細(xì)胞的染色結(jié)果顯示浦肯野細(xì)胞的胞體和樹突在小鼠出生后的15天時(shí)染色強(qiáng)度最強(qiáng),并且強(qiáng)度持續(xù)到出生后28天,我們推測原因可能P15小鼠中浦肯野細(xì)胞樹突開始被單一攀緣纖維支配。在ams純合子小鼠中,P Cs顯示出和野生型小鼠相同的陽性趨勢。在兩種基因型P7-28的小鼠中檢測到一條約140kDa的Western印跡條帶,與Nna1編碼蛋白的氨基酸序列長度一致。結(jié)論:浦肯野細(xì)胞的退化和缺失可能是由于Nna1基因蛋白質(zhì)短缺造成的,Nna1基因點(diǎn)突變可能導(dǎo)致了其蛋白質(zhì)的三級(jí)結(jié)構(gòu)的不穩(wěn)定性。
【圖文】：

小腦皮層分層

AMS小鼠基因型的鑒定原理圖
【學(xué)位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R741

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本文編號(hào)：2621848