【摘要】：目的:應(yīng)用大腦中動脈阻塞(Middle cerebral artery occlusion,MCAO)模型,探討新型抗炎因子白介素35(Interleukin-35,IL-35)在腦缺血再灌注損傷后的表達(dá)以及作用機(jī)制,為卒中后腦保護(hù)臨床藥物開發(fā)提供新的依據(jù)。方法:以大腦中動脈阻塞方法建立小鼠缺血再灌注動物模型,根據(jù)不同再灌注時間點收集腦組織,利用酶聯(lián)免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)以及實時熒光定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(real-time quantitative PCR,RT-qPCR)方法檢測不同時間點缺血組織中IL-35蛋白以及mRNA水平的表達(dá)變化,采用免疫印跡實驗(Western blot,WB)檢測再灌注后12小時IL-35蛋白的表達(dá)改變。在缺血再灌注動物模型前后進(jìn)行藥物干預(yù),利用神經(jīng)功能缺損評分評估不同劑量rIL-35干預(yù)后對小鼠缺血再灌注后神經(jīng)功能缺損的影響;采用2,3,5-氯化三苯基四氮唑(TTC)染色法,檢測不同劑量rIL-35干預(yù)后對再灌注損傷后小鼠梗死體積的影響。根據(jù)以上實驗結(jié)果選取最小有效劑量,在缺血再灌注模型后不同時間點進(jìn)行給藥,利用神經(jīng)功能缺損評分評估模型后不同時間點rIL-35干預(yù)對小鼠缺血再灌注后神經(jīng)功能缺損的影響;采用TTC染色法,檢測缺血再灌注后不同時間點rIL-35干預(yù)對再灌注損傷后小鼠梗死體積的影響。通過檢測行為學(xué)觀察小鼠缺血再灌注損傷后遠(yuǎn)期神經(jīng)功能恢復(fù)。最后,利用Western blot方法檢測rIL-35干預(yù)后對炎癥因子IL-6、IL-1β表達(dá)對影響。結(jié)果:IL-35在缺血再灌注損傷后蛋白以及mRNA水平的表達(dá)存在時間依賴性,再灌注后12小時前呈下降趨勢,12小時至7天呈緩慢恢復(fù)趨勢,再灌注后12小時表達(dá)為最低點。不同劑量rIL-35在缺血再灌注損傷前給藥,5μg/kg以及10μg/kg可以明顯減小缺血體積以及改善神經(jīng)功能缺損評分;并且5μg/kg劑量下對遠(yuǎn)期神經(jīng)功能恢復(fù)有有利影響。同時在此劑量下,缺血再灌注模型后不同時間點給藥證明,再灌注損傷后2小時及4小時給藥可以明顯減小小鼠梗死體積以及改善神經(jīng)功能缺損評分。另外,模型前側(cè)腦室給與rIL-35后,小鼠腦組織中炎癥因子IL-6、IL-1β的表達(dá)明顯降低。結(jié)論:我們的研究首次表明了新型抗炎因子IL-35的表達(dá)在缺血再灌注損傷中有明顯的時間趨勢,并且發(fā)揮著重要作用,在腦缺血再灌注后呈先下降后升高的趨勢,rIL-35在缺血再灌注損傷前或后給藥均可以減小小鼠梗死體積以及改善神經(jīng)功能缺損癥狀。并且rIL-35干預(yù)可以明顯降低炎癥因子IL-6、IL-1β的表達(dá)。因此我們的實驗首次證明了IL-35在缺血再灌注損傷中的保護(hù)作用,為臨床卒中腦保護(hù)藥物的研究提供了基礎(chǔ)和思路。
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R743.3

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5 唐sヶ，

本文編號：2616750