【摘要】：帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是阿爾茨海默病后的第二大神經(jīng)退行性疾病,60歲以上人群的PD患病率約為1.0%。然而,導(dǎo)致PD選擇性多巴胺能細(xì)胞損傷的確切致病機(jī)制尚不清楚,仍缺乏安全有效的延緩疾病進(jìn)展的早期神經(jīng)保護(hù)治療藥物。缺氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)是調(diào)節(jié)細(xì)胞對缺氧反應(yīng)的主要轉(zhuǎn)錄因子,它可以被脯氨酰羥化酶(PHD)羥化,然后進(jìn)入降解途徑。最近有研究表明HIF PHD抑制劑(HIF-PHI)可以通過增加HIF-1α的表達(dá)對帕金森病(PD)模型具有神經(jīng)保護(hù)作用。近年來出現(xiàn)了一種名為FG-4592的新型HIF-PHI,目前正在進(jìn)行治療慢性腎病(CKD)患者貧血的三期臨床試驗。在本研究中,我們首先使用MPP~+處理的SH-SY5Y細(xì)胞作為體外細(xì)胞模型來檢測FG-4592在PD中的作用。我們發(fā)現(xiàn),FG-4592可以減弱MPP~+誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡,并在一定程度上緩解線粒體膜電位(MMP)、三磷酸腺苷(ATP)及線粒體氧耗的降低,減少細(xì)胞因神經(jīng)毒素造成的活性氧(ROS)的產(chǎn)生。FG-4592還可以提高微管相關(guān)蛋白1輕鏈3 LC3II/LC3I的比值,降低p62及組織蛋白酶D(cathepsin D)的蛋白表達(dá),增強(qiáng)細(xì)胞自噬水平,增加錯誤折疊蛋白及損傷線粒體的清除�？寡趸瘧�(yīng)激相關(guān)蛋白轉(zhuǎn)錄因子NF-E2相關(guān)因子2(Nrf2)、血紅素加氧酶1(HO-1)和過氧化物歧化酶2(SOD-2)也在FG-4592處理后發(fā)生不同程度的上調(diào)。通過進(jìn)一步研究我們發(fā)現(xiàn),FG-4592可以通過增加AMP激活的蛋白激酶(AMPK)的磷酸化來誘導(dǎo)過氧化物酶體增殖物激活受體-γ共激活因子-1α(PGC-1α)的表達(dá),挽救線粒體功能障礙來保護(hù)多巴胺能神經(jīng)元細(xì)胞。此外,FG-4592還可以增加酪氨酸羥化酶(TH)的蛋白質(zhì)水平。在MPTP處理的小鼠中,FG-4592可以減少M(fèi)PTP誘導(dǎo)的多巴胺能神經(jīng)元的丟失失,挽救了TH和多巴胺水平的下降,并且改善了小鼠的行為障礙。因此,我們認(rèn)為,FG-4592將有希望成為PD的治療策略之一。
【圖文】：

值代表其代表細(xì)胞中線粒體的呼吸潛力。最后加入是魚藤酮或寡霉素，二者都是線粒體電子呼吸鏈抑制劑，可以完全阻止線粒體耗氧，得到的相對差值代表線粒體的備用呼吸量。見圖2-2.圖 2：線粒體呼吸檢測流程圖Figure 2 mitochondrial respiration detected schedule2.2.2.9.1 實驗前兩天（1）拿到 Seahorse XF24 檢測專用細(xì)胞板，提前摸好每孔鋪種的細(xì)胞個數(shù)。要求細(xì)胞密度適中，保持細(xì)胞單層分布，不要有重疊。（2）Seahorse XF24 檢測專用細(xì)胞板4行5列，每行留有一孔為 blank 孔不鋪設(shè)細(xì)胞，分別為A1、B2、C3、D4。實驗前兩天晚上鋪細(xì)胞，每孔先加 100μl 培養(yǎng)基，19

+處理濃度的增加，HIF-1α的蛋白水平不斷減少（圖2-3B）。隨后我們使用3.5mM 的 MPP+濃度處理不同時間（0,6,12,24,36h），發(fā)現(xiàn) HIF-1α的蛋白水平也隨之降低并呈現(xiàn)一定的時間依賴（圖2-3C）。然而，，與蛋白水平變化不同的是，HIF-1α的 mRNA 表達(dá)在 PD 體內(nèi)模型中是增加的（圖2-3D），表明線粒體抑制劑 MPP+可能影響 HIF-1α的降解，而不影響其基因的轉(zhuǎn)錄。圖 2-3：MPP+抑制SH-SY5Y細(xì)胞增殖，減少HIF-1α的表達(dá)Figure 2-3. MPP+caused inhibition of cell viability, and decreased the expression of HIF-1α.（A）不同濃度的MPP+處理SH-SY5Y細(xì)胞24h對細(xì)胞活力影響。不同濃度的MPP+理處理SH-SY5Y 細(xì)胞24h以及3.5mM MPP+作用細(xì)胞不同時間后，Western-Blot檢測HIF-1α蛋白含量23
【學(xué)位授予單位】：上海交通大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號】：R742.5

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本文編號：2611577