【摘要】：在人類(lèi)神經(jīng)系統(tǒng)中,腦膠質(zhì)瘤[1]是其中發(fā)病率最高的腦部腫瘤之一。其特點(diǎn)為惡性程度較高,呈浸潤(rùn)性生長(zhǎng),手術(shù)治療不易完全清除。放射性治療極易損傷中樞神經(jīng),化療藥物不易到達(dá)腦腫瘤病灶部位,而且化療藥物在體內(nèi)的分布沒(méi)有選擇性,在殺傷腫瘤細(xì)胞的同時(shí)也會(huì)伴隨著正常細(xì)胞的死亡,治療難度較大。而腦膠質(zhì)瘤干細(xì)胞[2]則是腦膠質(zhì)瘤中很小的一部分,是引發(fā)腫瘤的根源并同時(shí)維持著腫瘤生長(zhǎng)。在適當(dāng)?shù)臈l件下可以分化成為新的腫瘤細(xì)胞,腫瘤發(fā)生,轉(zhuǎn)移,復(fù)發(fā)的根本原因就在于此。因此,腫瘤治療效果的關(guān)鍵之處就在于消除腫瘤干細(xì)胞,但對(duì)于腫瘤干細(xì)胞的治療至今沒(méi)有有效的治療手段�？紤]到其治療方法的局限性我們采取了另一種治療手段----聲動(dòng)力療法。聲動(dòng)力療法(Sonodynamic Tharapy,SDT)[3]是 1989 年日本學(xué)者 Umemura S[4]等人首次提出的一種利用超聲激活聲敏劑治療腫瘤細(xì)胞的新方法。聲動(dòng)力療法是超聲波能夠利用其自身的穿透力作用于腫瘤組織,激活聲敏劑[5]從而產(chǎn)生對(duì)腫瘤組織的殺傷。應(yīng)用SDT療法聲敏劑的選擇是關(guān)鍵,本文研究中選擇二氫卟吩e6即Ce6[6],是一種葉綠素降解衍生物。其優(yōu)點(diǎn)在于具有較強(qiáng)的聲動(dòng)力反應(yīng)能力,無(wú)毒,較高的腫瘤組織選擇性及非腫瘤組織清除率高等。而在抗癌藥物的選擇方面本文研究中選擇了抗癌藥物卡鉑(Carboplatin,CBP)[7]。其作用靶點(diǎn)不僅是細(xì)胞DNA,同時(shí)也會(huì)對(duì)RNA及蛋白質(zhì)的合成產(chǎn)生抑制作用,屬于周期非特異性抗癌藥物。但大劑量給藥時(shí)會(huì)產(chǎn)生神經(jīng)毒性及各種不適反應(yīng)。生物納米技術(shù)[8]的出現(xiàn)可為抗癌藥物CBP的毒性缺陷提供解決途徑。以脂質(zhì)體[9]作為攜載抗癌藥物的遞送系統(tǒng)進(jìn)入目標(biāo)細(xì)胞,在高效治療腫瘤的同時(shí)還可顯著降低化療藥物的毒副作用。另一方面,通過(guò)文獻(xiàn)了解到整合素α v β 3[10]在腦膠質(zhì)瘤等腫瘤細(xì)胞表面有高表達(dá),而iRGD肽[11]是能夠與整合素αv 3特異性結(jié)合的短肽序列,由甘氨酸,精氨酸,天冬氨酸序列組成,是整合素與其腫瘤表面配體蛋白的識(shí)別位點(diǎn)。本課題討論了一種藥物靶向遞送系統(tǒng)----靶向型脂質(zhì)體[12]。在超聲條件下,iRGD肽修飾并攜載聲敏劑Ce6與抗癌藥物CBP的靶向共載脂質(zhì)體,通過(guò)超聲響應(yīng)在特定時(shí)間,特定條件下釋放藥物,并從抗癌效果方面探討靶向型脂質(zhì)體對(duì)腦膠質(zhì)瘤的殺傷效應(yīng)。本文主要從靶向共載脂質(zhì)體的合成,聲控釋藥,體外細(xì)胞毒性效應(yīng),腦膠質(zhì)瘤微球體的毒性效應(yīng)評(píng)價(jià)等方面展開(kāi)研究。并從四個(gè)方面進(jìn)行概述:第一部份iRGD靶向肽修飾CBP、Ce6共載靶向脂質(zhì)體的制備、表征及釋藥研究選擇PEG化脂質(zhì)體的標(biāo)準(zhǔn)制劑作為聲敏劑Ce6和抗癌藥物CBP的藥物裝載平臺(tái),Ce6裝載到脂質(zhì)體疏水脂質(zhì)雙分子層中,水溶性抗癌藥物CBP則被包封在脂質(zhì)體的親水核心內(nèi)。實(shí)驗(yàn)采用薄膜水化法[13]分別制備卡鉑脂質(zhì)體(CBP-L),二氫卟吩e6脂質(zhì)體(Ce6-L),卡鉑與Ce6共載脂質(zhì)體(CBP-Ce6-L),iRGD肽修飾卡鉑與Ce6共載靶向脂質(zhì)體(iRGD-CBP-Ce6-L)。利用透射電鏡觀(guān)察其形態(tài)特征;馬爾文Nano-ZS90動(dòng)態(tài)光散射粒徑分析儀檢測(cè)不同脂質(zhì)體粒徑,電位及分散系數(shù)大小。結(jié)果顯示:薄膜水化法制備脂質(zhì)體操作步驟簡(jiǎn)單,結(jié)果穩(wěn)定易重復(fù)。通過(guò)研究發(fā)現(xiàn),四種脂質(zhì)體分布均勻,粒徑均在1OOnm-140nm,分布范圍適中,帶有少量負(fù)電荷,有效克服了抗癌藥物卡鉑臨床應(yīng)用中毒副作用強(qiáng)的問(wèn)題。并可以在一定時(shí)間內(nèi)穩(wěn)定保存。第二部份iRGD靶向肽修飾CBP、Ce6共載靶向脂質(zhì)體聯(lián)合超聲對(duì)人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞(U87)的抗腫瘤效應(yīng)研究選用人腦膠質(zhì)瘤U87細(xì)胞為模型,采用MTT法、AnnexinV/PI等實(shí)驗(yàn)技術(shù)考察不同脂質(zhì)體分別聯(lián)合超聲處理所產(chǎn)生的細(xì)胞毒效應(yīng)。PI凍染結(jié)合流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同脂質(zhì)體聯(lián)合超聲處理下細(xì)胞的DNA損傷情況。流式細(xì)胞儀結(jié)合熒光顯微鏡分析不同時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞對(duì)靶向共載脂質(zhì)體的攝取情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:靶向共載脂質(zhì)體聯(lián)合超聲處理對(duì)于U87細(xì)胞有著最強(qiáng)的細(xì)胞毒性,對(duì)其DNA也表現(xiàn)出最強(qiáng)的損傷程度。U87細(xì)胞對(duì)于靶向共載脂質(zhì)體的攝取也隨著時(shí)間的積累而增強(qiáng)。第三部份iRGD靶向肽修飾CBP、Ce6共載靶向脂質(zhì)體聯(lián)合超聲對(duì)大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞(C6)的抗腫瘤效應(yīng)研究選用大鼠腦膠質(zhì)瘤C6細(xì)胞為模型,采用MTT法、AnnexinV/PI等實(shí)驗(yàn)技術(shù)考察不同脂質(zhì)體分別聯(lián)合超聲處理所產(chǎn)生的細(xì)胞毒效應(yīng)。PI凍染結(jié)合流式細(xì)胞儀檢測(cè)不同脂質(zhì)體聯(lián)合超聲處理下細(xì)胞的DNA損傷情況。流式細(xì)胞儀結(jié)合熒光顯微鏡分析不同時(shí)間點(diǎn)細(xì)胞對(duì)靶向共載脂質(zhì)體的攝取情況。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:靶向共載脂質(zhì)體聯(lián)合超聲處理對(duì)C6細(xì)胞有著最強(qiáng)的細(xì)胞毒性,對(duì)其DNA也表現(xiàn)出最強(qiáng)的損傷程度。C6細(xì)胞對(duì)于靶向共載脂質(zhì)體的攝取也隨著時(shí)間的積累而不斷增加。第四部份iRGD靶向肽修飾CBP、Ce6共載靶向脂質(zhì)體聯(lián)合超聲對(duì)大鼠C6腦膠質(zhì)瘤微球體的抗腫瘤效應(yīng)研究在添加有生長(zhǎng)因子的無(wú)血清培養(yǎng)基中接種大鼠腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞(C6)[14],待其長(zhǎng)成微球體三到四天時(shí)傳代換液。三到四周后微球體直徑則可達(dá)到200-300um大小。當(dāng)生長(zhǎng)到合適大小時(shí),采用MTT法、AnnexinV/PI等實(shí)驗(yàn)技術(shù)考察不同脂質(zhì)體分別聯(lián)合超聲處理所產(chǎn)生的細(xì)胞毒效應(yīng)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)大鼠腦膠質(zhì)瘤微球體[16]對(duì)靶向共載脂質(zhì)體隨不同時(shí)間點(diǎn)的攝取情況。利用激光共聚焦顯微鏡拍攝超聲前后靶向共載脂質(zhì)體在微球體中的滲透情況來(lái)確定其脂質(zhì)體的靶向效果。
【圖文】：

圖１．１超聲原理示意圖。逡逑Ｆｉｇｕｒｅ邋１．１邋Ｓｃｈｅｍａｔｉｃ邋ｄｉａｇｒａｍ邋ｏｆ邋ｐｒｉｎｃｉｐｌｅ邋ｏｆ邋ｕｌｔｒａｓｏｉｃ．逡逑而在ＳＤＴ治療過(guò)程中，聲敏劑［３８］的選擇尤為關(guān)鍵。聲敏劑在ＳＤＴ中關(guān)重要的作用，傳統(tǒng)的聲敏劑主要來(lái)源于光敏劑如卟啉類(lèi)、卟吩類(lèi)、氧物、植物提取物類(lèi)等［３９］，當(dāng)然還包括一些腫瘤藥物［４Ｇ］，非甾體抗炎藥等［４代卟啉類(lèi)化合物是作為光敏劑廣泛應(yīng)用于光動(dòng)力療法領(lǐng)域的。但卟啉類(lèi)是ＳＤＴ中最為常見(jiàn)的聲敏劑類(lèi)型，包括光敏素（Ｐｈｏｔｉｆｒｉｎ）、血卟啉（Ｈｐ）、血卟啉單甲醚（ＨＭＭＥ）及新型卟啉衍生物［４２］等。氧雜蒽衍生物是一類(lèi)包括羅丹明和熒光素等。早期研究表明超聲可以增強(qiáng)該類(lèi)染料對(duì)腫瘤細(xì)組織的生長(zhǎng)抑制作用，但此種化合物在腫瘤組織中富集量少因而限制了劑的發(fā)展１４４］。而近年來(lái)，大量抗癌藥物也被運(yùn)用于ＳＤＴ的抗腫瘤治療中，（ＤＯＸ）是最為常見(jiàn)的抗腫瘤藥物聲敏劑。超聲在其中的作用為增強(qiáng)其ＤＮＡ損傷、細(xì)胞凋亡、自由基的產(chǎn)生及空化效應(yīng)等達(dá)到協(xié)同殺傷腫瘤的類(lèi)藥物［４５］聯(lián)合超聲處理也可以治療腫瘤細(xì)胞。而在植物提取類(lèi)聲敏劑中，括姜黃素［４６］、葉綠素衍生物等。葉綠素衍生物是一類(lèi)重要的聲敏劑，且類(lèi)屬于其中一種。包括二氫卟吩ｅ６等，，該類(lèi)聲敏劑也同時(shí)具有良好的光

邐陜西師范大學(xué)碩士學(xué)位論文邐逡逑體是一種人工合成囊泡，其磷脂分子的親水頭部插入水溶液中，疏水尾部伸入外逡逑部。即可形成雙層脂分子的球形脂質(zhì)體，其粒徑大小在３０－１０００ｎｍ不等。由于脂逡逑質(zhì)體可以和細(xì)胞相融合，進(jìn)而可將藥物送入細(xì)胞內(nèi)部。而本實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)的這種靶向逡逑型脂質(zhì)體是將水溶性抗癌藥物卡鉑包裹于磷脂雙分子的腔內(nèi)，將脂溶性聲敏劑二逡逑氫卟吩ｅ６嵌入磷脂雙分子層的中間，最后將靶向肽ｉＲＧＤ連接在脂質(zhì)體的表面并逡逑對(duì)脂質(zhì)體進(jìn)行表面的靶向修飾［８６］。即本實(shí)驗(yàn)中的靶向共載脂質(zhì)體逡逑—ｉＲＧＤ－ＣＢＰ－Ｃｅ６－Ｌ。逡逑
【學(xué)位授予單位】：陜西師范大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類(lèi)號(hào)】：R739.41

【參考文獻(xiàn)】

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1 王安元;凌家俊;謝波;徐月圓;;腫瘤聲動(dòng)力療法中的聲敏劑研究現(xiàn)狀及應(yīng)用前景[J];中國(guó)現(xiàn)代應(yīng)用藥學(xué);2013年02期

2 車(chē)曉明;崔大明;汪洋;施煒;劉天津;王柯;;膠質(zhì)母細(xì)胞瘤腫瘤干細(xì)胞體外分離培養(yǎng)鑒定及生物學(xué)特性的研究[J];中國(guó)臨床神經(jīng)科學(xué);2007年06期

3 王靜;王志剛;許川山;;聲動(dòng)力療法醫(yī)學(xué)應(yīng)用及其生物學(xué)效應(yīng)[J];中國(guó)醫(yī)學(xué)影像技術(shù);2006年12期

本文編號(hào)：2609273