【摘要】：目的:通過研究帕金森病患者外周循環(huán)中的Tfh細(xì)胞與Tfr細(xì)胞的表達(dá),及外周血中相關(guān)的IL-4、IL-10、IL-21和TGF-β的表達(dá)水平,探討Tfh細(xì)胞與Tfr細(xì)胞在帕金森病發(fā)生發(fā)展中的作用。方法:選取了2017年1月至2018年1月在吉林大學(xué)第一醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科門診及住院治療的PD患者40例,同時(shí)選取年齡、性別相匹配的健康對照者30例。在受試者知情同意的情況下,晨起空腹采集外周靜脈血。肝素抗凝血用于流式細(xì)胞儀檢測外周血中Tfh細(xì)胞及Tfr細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的比例;促凝血離心后用于流式液相多重蛋白定量技術(shù)檢測外周血血清中IL-4、IL-10、IL-21及TGF-β的水平。同時(shí)采集患者的基本信息和臨床資料,包括性別、年齡、病程等,帕金森病�？漆t(yī)生對PD患者進(jìn)行H-Y分期、UPDRS-III評分及NMSS評分。最后,比較PD組患者和HC組的外周血中Tfh細(xì)胞與Tfr細(xì)胞的表達(dá)水平,及兩組間IL-4、IL-10、IL-21和TGF-β的水平差異。結(jié)果:1、與HC組相比,PD組患者外周循環(huán)中的Tfh細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的比例明顯升高[3.68(2.64-5.70)vs 1.94(1.32-2.99),P0.001],差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2、與HC組相比,PD組患者外周循環(huán)中的Tfr細(xì)胞占CD4+T細(xì)胞的比例降低,但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異[1.05(0.62-1.54)vs 1.3(0.63-1.90),P0.05]。3、與HC組相比,PD組患者外周循環(huán)中的CD19+B細(xì)胞占淋巴細(xì)胞的比例明顯降低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義[5.35(4.13-9.38)vs 8.68(5.61-12.93),P=0.014]。4、PD組患者與HC組相比,外周血中細(xì)胞因子的水平IL-4、IL-10、IL-21及TGF-β的水平均未發(fā)現(xiàn)明顯差異(P0.05);但PD組患者外周血中的IL-21水平與H-Y分期及UPDRS-III評分呈正相關(guān)(P0.05)。結(jié)論:1、與HC組相比,PD組患者外周循環(huán)中的Tfh細(xì)胞表達(dá)明顯增加,Tfr細(xì)胞的表達(dá)雖無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,但具有下降的趨勢。這提示PD患者可能存在持續(xù)激活的體液免疫反應(yīng),推測可能與PD的慢性持續(xù)性進(jìn)展有關(guān),有可能成為干預(yù)PD疾病的新靶點(diǎn)。2、IL-21的水平與PD組患者的H-Y分期和UPDRS-III評分呈正相關(guān),這提示IL-21可能用來評估疾病的嚴(yán)重程度。
【圖文】：

圖 3.1 Tfh 細(xì)胞、Tfr 細(xì)胞和 B 細(xì)胞的流式圖（2）流式液相多重蛋白定量技術(shù)（CBA）檢測外周血中 IL-4 、IL-10、IL-21及 TGF-β 的水平的步驟說明：可能各種細(xì)胞因子的檢測方法不完全相同，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作，下面以 IL-4、IL-10 及 IL-21 試劑盒為例，介紹 CBA 法檢測血清中細(xì)胞因子含量的步驟。①標(biāo)準(zhǔn)品的制備a 用 4ml 的稀釋液稀釋標(biāo)準(zhǔn)品，用移液槍輕輕混勻后室溫靜置 15 分鐘，標(biāo)記為 Top Standard 管；b 按順序標(biāo)記 12×75mm 流式管，1:2 倍稀釋，1:4 倍稀釋，1:8 倍稀釋，1:16倍稀釋，，1:32 倍稀釋，1:64 倍稀釋，1:128 倍稀釋，1:256 倍稀釋，共 8管；

圖 3.2 IL-21 的 CBA 法標(biāo)準(zhǔn)曲線（橫坐標(biāo)代表濃度 pg/ml，縱坐標(biāo)代表平均熒光強(qiáng)度）3.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)采用 SPSS 22.0 統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行分析，對計(jì)量資料進(jìn)行正態(tài)性檢驗(yàn)，符合正態(tài)分布的，以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，進(jìn)行兩獨(dú)立樣本 t 檢驗(yàn)；不符合正態(tài)分布的，用中位數(shù)（四分位數(shù)間距）表示，進(jìn)行 Mann-Whitney u 檢驗(yàn)；變量之間采用 Spearman 進(jìn)行相關(guān)性分析，P<0.05 認(rèn)為具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R742.5

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本文編號：2608883