【摘要】：目的本研究利用人神經(jīng)母細(xì)胞瘤(Neuroblastoma,NB)細(xì)胞系SHSY5Y,研究抑制葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(Glucose transporter 1,GLUT1)的表達(dá)對(duì)腫瘤細(xì)胞糖酵解水平、增殖和侵襲遷移能力等生物學(xué)行為的影響。方法用GLUT1特異性小分子抑制劑WZB117處理人神經(jīng)母細(xì)胞瘤細(xì)胞株SH-SY5Y,實(shí)時(shí)熒光定量PCR檢測(cè)GLUT1 mRNA水平表達(dá),Western blotting在蛋白水平檢測(cè)GLUT1、糖酵解相關(guān)酶、周期蛋白的表達(dá),CCK-8法檢測(cè)細(xì)胞增殖能力,ATP試劑盒檢測(cè)ATP含量變化,LDH試劑盒檢測(cè)LDH含量變化,流式細(xì)胞技術(shù)檢測(cè)細(xì)胞周期、凋亡情況,Transwell侵襲、遷移實(shí)驗(yàn)分別檢測(cè)細(xì)胞侵襲、遷移能力。結(jié)果1.隨著WZB117處理濃度增大,SH-SY5Y細(xì)胞增殖呈下降趨勢(shì),10μmol/L時(shí)增殖抑制最明顯,15和30μmol/L時(shí),細(xì)胞死亡較多,故選擇10μmol/L作為抑制濃度。2.WZB117(10μmol/L)處理SHSY5Y細(xì)胞24 h后,GLUT1 mRNA水平表達(dá)開(kāi)始增高,72 h時(shí)表達(dá)降低;處理24h后開(kāi)始出現(xiàn)GLUT1蛋白水平表達(dá)明顯降低。3.WZB117(10μmol/L)分別處理SH-SY5Y細(xì)胞12、24、48、72 h,隨著處理時(shí)間的延長(zhǎng),ATP含量和LDH含量呈下降趨勢(shì)。4.WZB117(10μmol/L)處理SH-SY5Y細(xì)胞24 h后,己糖激酶(HK2),丙酮酸激酶(PKM2),磷酸果糖激酶(PFKL)蛋白水平表達(dá)下降。5.WZB117(10μmol/L)處理SH-SY5Y細(xì)胞24 h后,觀察到細(xì)胞周期G0-G1期阻滯,SH-SY5Y細(xì)胞出現(xiàn)明顯的壞死而非凋亡。細(xì)胞周期蛋白(Cyclin E2)、周期蛋白依賴性激酶(CDK2)與視網(wǎng)膜母細(xì)胞瘤基因pRb蛋白水平表達(dá)均降低,抑癌基因P53蛋白水平表達(dá)增高。6.WZB117(10μmol/L)處理SHSY5Y細(xì)胞24 h后,Transwell侵襲、遷移實(shí)驗(yàn)顯示細(xì)胞穿膜數(shù)量均明顯減少。結(jié)論WZB117抑制GLUT1的表達(dá)降低糖酵解水平,抑制NB細(xì)胞體外生長(zhǎng),誘導(dǎo)細(xì)胞周期阻滯,抑制細(xì)胞侵襲、遷移。本研究提示GLUT1可作為NB的潛在治療靶點(diǎn)。
【圖文】：

GLUT1 mRNA 水平明顯增高，48 h 后進(jìn)一步增高，但培養(yǎng) 72 h 后表達(dá)降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖2，P<0.01）。圖 2 實(shí)時(shí)熒光定量 PCR 檢測(cè) SH-SY5Y 細(xì)胞 GLUT1 mRNA 水平Figure 2. Level of GLUT1 mRNAwas assessed by qRT-PCR*P ≤ 0.05, **P ≤ 0.01, ***P ≤ 0.001

重慶醫(yī)科大學(xué)碩士研究生學(xué)位論文3.3 Western blotting 檢測(cè) GLUT1 及糖酵解相關(guān)酶蛋白表達(dá)WZB117 作用于 SH-SY5Y 細(xì)胞 24 h 后，GLUT1 蛋白水平表達(dá)量顯著降低，48h、72h 后蛋白水平表達(dá)量進(jìn)一步降低（圖 3A，P＜0.01）。WZB117 作用于 SH-SY5Y 細(xì)胞 12 h 后，HK2、PKM2、PFKL 蛋白水平表達(dá)量均降低，，24 h 后進(jìn)一步下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（圖 3C，P＜0.001）。A B
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類(lèi)號(hào)】：R739.4

【參考文獻(xiàn)】

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1 樊健;袁鋒;李山珠;祝曉忠;梅炯;俞光榮;;抑制葡萄糖轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1表達(dá)對(duì)骨肉瘤MG63細(xì)胞體內(nèi)外功能的影響[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2016年01期

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本文編號(hào)：2608343