【摘要】：腦膜炎是一種常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)感染性疾病,其主要類型有結(jié)核性腦膜炎、化膿性腦膜炎、病毒性腦膜炎。其中,化膿性腦膜炎及結(jié)核性腦膜炎預(yù)后較差,需要及早診斷,及時合理治療。然而,早期腦膜炎缺乏特異性臨床表現(xiàn),腦脊液生化指標(biāo)及影像學(xué)表現(xiàn)也沒有典型特征。神經(jīng)感染性疾病確診的依據(jù)在于從腦實質(zhì)或腦脊液內(nèi)檢測到病原生物的存在,但傳統(tǒng)病原微生物檢測方法耗時長,且陽性率并不多,早期腦膜炎的分型診斷極為困難。因此,需要找到一種快速且特異性高的腦膜炎分型診斷方法。目的應(yīng)用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)(liquid chromatography-tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)對已有表面增強(qiáng)激光解吸離子化飛行時間質(zhì)譜(surface-enhanced laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry,SELDI-TOF-MS)找出的腦膜炎分型診斷樹中m/z=2176.205,m/z=3399.302的蛋白進(jìn)行鑒定。方法選取62例腦脊液中m/z=2176.205,m/z=3399.302含量均高的腦脊液6組,采用液相色譜-雙壓線性離子阱高分辨率組合型質(zhì)譜儀(LC-LTQ Orbitrap Velos)對樣品進(jìn)行檢測,使用MZmine v2.27對質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行可視化。使用Mascot v2.3.02對蛋白質(zhì)進(jìn)行鑒定。然后用酶聯(lián)免疫吸附測定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)對所得蛋白質(zhì)進(jìn)行對比檢驗。結(jié)果應(yīng)用液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜技術(shù)鑒定出m/z=2176.205為泛素羧基末端水解酶1(UCHL1),m/z=3399.302為巨噬細(xì)胞移動抑制因子(MIF),經(jīng)過ELISA驗證,支持m/z=3399.302為MIF,不支持m/z=2176.205為UCHL1。結(jié)論質(zhì)核比為3399.302的蛋白質(zhì)為MIF,且在化膿性腦膜炎患者中升高,完善了腦膜炎分型診斷樹。
【圖文】：

第 3 章 實驗資料與方法第 3 章 實驗資料與方法3.1 前期工作利用 62 例腦膜炎患者，其中包括化膿性腦膜炎 16 例、結(jié)核性腦膜炎病毒性腦膜炎 28 例。采用 SELDI-TOF-MS 技術(shù)對 62 例腦脊液樣本進(jìn)行得到全部可識別的差異蛋白峰共 129 個，，通過軟件分析得到有統(tǒng)計學(xué)差峰共 40 個，利用 m/z=2176.205、m/z=2326.05、m/z=2436.154、m/z=33m/z=4125.172、m/z=8927.867、m/z=14675.06 七個顯著差異表達(dá)的蛋白腦膜炎分類決策樹（圖 3.1.1），并給出各組中七個差異蛋白的平均含量（[42]�，F(xiàn)選取 m/z=2176.205、m/z=3399.302 的蛋白進(jìn)行鑒定，進(jìn)一步明確類型。

圖 4.2 UCHL1 肽段二級譜圖解析2)M/Z=3399.302Macrophage migration inhibitory factor肽段解析圖如下（圖 4.3）MIF_HUMAN Score: 57Macrophage migration inhibitory factor OS=Homo sapiens GN=MIF PE=1 SV=4Nominal mass (Mr): 12639; Calculated pI value: 7.74Sequence Coverage: 19%紅色部分為相匹配肽段1 MPMFIVNTNV PRASVPDGFL SELTQQLAQA TGKPPQYIAVHVVPDQLMAF51 GGSSEPCALC SLHSIGKIGG AQNRSYSKLL CGLLAERLRI
【學(xué)位授予單位】：吉林大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R742.9

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