【摘要】：目的利用小分子RNA(small interfering RNA,siRNA)技術(shù)體外沉默人膠質(zhì)瘤細(xì)胞COX-2基因表達(dá),探討其對放射敏感性的影響,以期為膠質(zhì)瘤的治療提供新的思路和方法。方法體外培養(yǎng)膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞,使用siRNA技術(shù)構(gòu)建U251細(xì)胞COX-2基因沉默模型,Western blot檢測轉(zhuǎn)染后細(xì)胞COX-2蛋白表達(dá)情況,篩出最適序列。將實(shí)驗(yàn)分為對照組與轉(zhuǎn)染組,分別予以2、4、6、8 Gy四個劑量組予以X線照射,實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次,使用MTT法檢測輻射后細(xì)胞增殖抑制情況,平板克隆形成實(shí)驗(yàn)檢測細(xì)胞存活分?jǐn)?shù)(SF)并通過單擊多靶擬合曲線計(jì)算增敏比(SER),流式細(xì)胞術(shù)檢測細(xì)胞凋亡情況。結(jié)果轉(zhuǎn)染組COX-2蛋白表達(dá)情況較對照組均下降,其中以siRNA600序列降低最為明顯,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05),后續(xù)實(shí)驗(yàn)均以siRNA600序列進(jìn)行轉(zhuǎn)染。輻射后轉(zhuǎn)染組的細(xì)胞增殖抑制率為(84.87±3.50)%、(63.62±0.35)%、(55.05±4.87)%、(36.85±3.00)%,較對照組增殖抑制作用明顯增強(qiáng),并隨放射劑量增加而增加,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。輻射后的轉(zhuǎn)染組SF低于對照組,且轉(zhuǎn)染組D0為4.110,Dq為1.387,均低于對照組,對照組D0為6.908,Dq為2.772,放射增敏比SER為1.680,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。輻射后的轉(zhuǎn)染組細(xì)胞凋亡率為(3.63±0.45)%、(6.08±0.87)%、(47.97±2.13)%、(59.56±3.07)%均高于對照組,且在6 Gy、8 Gy照射后升高更為明顯。結(jié)論 siRNA技術(shù)沉默人膠質(zhì)瘤U251細(xì)胞COX-2基因表達(dá)可以提高細(xì)胞的放射敏感性,增加了放射后細(xì)胞的凋亡率及增殖抑制作用,降低了克隆形成率。

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本文編號：2601463