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血清外泌體miRNAs在急性腦梗死診斷中的應(yīng)用研究

發(fā)布時(shí)間:2020-03-22 07:52
【摘要】:目的通過檢測急性缺血性卒中(AIS)患者的血清外泌體濃度和兩種腦特異性微小RNA(miRNA),miR-9和miR-124的表達(dá)水平,探討其用于AIS診斷及損傷評(píng)估的預(yù)測價(jià)值。方法1.選擇2014年9月至2015年8月期間收住入院的65名AIS患者(發(fā)病時(shí)間72h)與同期在我院進(jìn)行體檢的66名非卒中志愿者,采用ExoQuick試劑盒方案提取兩組血清中的外泌體,通過透射電子顯微鏡,納米粒子跟蹤分析和免疫印跡(Western blot)鑒定血清外泌體的存在。使用實(shí)時(shí)定量PCR的方法測定血清外泌體miR-9和miR-124的表達(dá)水平。2.收集入組者年齡、性別、高血壓、糖尿病、房顫、高脂血癥等臨床資料及梗死體積、NIHSS評(píng)分及IL-6的值,探討miR-9、miR-124與梗死體積、NIHSS評(píng)分及IL-6的相關(guān)性。3.通過ROC曲線分析血清外泌體miR-9和miR-124對(duì)于AIS的診斷價(jià)值。結(jié)果1.AIS患者血清外泌體的miR-9和miR-124的表達(dá)水平與對(duì)照組相比顯著升高,且差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。2.AIS患者血清外泌體的miR-9和miR-124表達(dá)水平與美國國立衛(wèi)生院神經(jīng)功能缺損評(píng)分(NIHSS評(píng)分)、梗死體積及血清炎癥因子IL-6呈正相關(guān),且均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p0.01)。3.血清外泌體miR-9和miR-124在ROC曲線下面積分別為0.8026和0.6976。結(jié)論miR-9和miR-124有潛力成為診斷AIS及評(píng)估缺血損傷程度的生物標(biāo)志物,為探討AIS患者預(yù)后的生物標(biāo)志物提供了新的思路。
【圖文】:

透射電鏡觀察,血清,南通大學(xué),碩士學(xué)位論文


南通大學(xué)碩士學(xué)位論文 第三章 結(jié) 果到外泌體的存在。針對(duì) CD81 的抗體我們探測到 26kDa 條帶,也是 CD81 的預(yù)期分子量,CD9 和 CD63 我們也發(fā)現(xiàn)了類似的結(jié)果(圖 1D)?傊,獲得的微泡呈現(xiàn)了外泌體的主要特征,并且在后續(xù)的實(shí)驗(yàn)中我們也使用這種分離方法提取血清外泌體。

血清,對(duì)照組


圖 2. AIS 組和對(duì)照組血清外泌體的濃度比較我們通過 qPCR 的方法檢測血清外泌體中 miR-9 和 miR-124 的相對(duì)表達(dá)量。由于缺乏適用于循環(huán)外泌體 miRNA 研究中的歸一化控制的管家基因,我們建立的工作流程確保從不同實(shí)驗(yàn)和個(gè)人獲得的 PCR 數(shù)據(jù)具有可比性。首先,從相同體積血清(250μl)提取而來的外泌體中提取總 RNA,并在相同體積的不含 Rnase的水中洗脫。然后將相同體積的 RNA 溶液進(jìn)行 poly(A)尾部的 3’延伸并隨后進(jìn)行逆轉(zhuǎn)錄和 qPCR。加入 25fmol 的 Cel-miR-39 作為外參并進(jìn)行數(shù)據(jù)歸一化。miR-451 是一種大量存在于紅細(xì)胞中的 miRNA,在前期實(shí)驗(yàn)中,我們確定了miR-451 的穩(wěn)定性,故將其作為內(nèi)參。如圖 3A 和 3B 所示,與對(duì)照組相比,卒中組 miR-9 和 miR-124 的水平均顯著增加(p <0.01)。由于 miR-9 和 miR-124 在卒中組的中位 Cq 值分別比對(duì)照組低約 4 個(gè)和 2 個(gè)周期,故 miR-9 的變化較 miR-124 的變化更為明顯,AIS 患者miR-9 和 miR-124 比健康者分別增加 16 和 4 倍。在外泌體 miR-451 的表達(dá)水平在兩組中無顯著差異(p> 0.1)(圖 3C)。
【學(xué)位授予單位】:南通大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】:碩士
【學(xué)位授予年份】:2018
【分類號(hào)】:R743.3

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本文編號(hào):2594752

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