【摘要】：朊病毒病(Priondiseases)是一類嚴(yán)重危害人類和其他多種哺乳動(dòng)物生命的致死性神經(jīng)退行性疾病。這類疾病中錯(cuò)誤結(jié)構(gòu)的朊蛋白聚集和纖維化,使神經(jīng)元大量死亡,并使大腦組織形成空泡樣病變。線粒體功能障礙、氧化應(yīng)激損傷與包括朊病毒病在內(nèi)的衰老相關(guān)神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病密切相關(guān)。SIRT3作為線粒體內(nèi)主要的去乙�；�,能夠從多個(gè)方面調(diào)節(jié)線粒體的功能。盡管研究顯示SIRT3與一些神經(jīng)退行性疾病的發(fā)病機(jī)制有關(guān)系,但該蛋白是否參與朊病毒病發(fā)病過程到目前為止是未知的。本研究中,我們首先證明在朊病毒感染的細(xì)胞系SMB-S15以及SMB-S15細(xì)胞裂解物感染的動(dòng)物腦組織中線粒體主要去乙酰化酶SIRT3表達(dá)及活性下降,這意味著該蛋白在細(xì)胞中的去乙�；饔孟陆怠Ｈ缓�,我們?cè)谏鲜鲭貌《靖腥炯?xì)胞和動(dòng)物模型中檢測(cè)了SIRT3重要的底物SOD2的乙�；�。我們發(fā)現(xiàn)朊病毒感染的細(xì)胞和動(dòng)物腦組織中,SOD2在K68和K122兩個(gè)重要乙�；稽c(diǎn)的乙酰化水平升高。SOD2的過度乙酰化理論上會(huì)引起該蛋白活性的下降,而SOD2是細(xì)胞中很重要的抗氧化酶,其活性下降,很有可能會(huì)導(dǎo)致細(xì)胞中活性氧(reactive oxygen species,ROS)清除不足。為了檢驗(yàn)這一點(diǎn),我們?cè)诟腥镜募?xì)胞模型SMB-S15中檢測(cè)了SOD2蛋白活性以及ROS水平。實(shí)驗(yàn)結(jié)果符合我們預(yù)期,朊病毒感染細(xì)胞模型中SOD2活性下降,ROS水平升高。SIRT3另一重要底物ATP5β是ATP酶重要的亞基。我們發(fā)現(xiàn)在感染的細(xì)胞模型SMB-S15中,ATP5β乙�；缴�。ATP5β的過度乙�；碚撋蠒�(huì)引起ATP酶活性的下降,最終導(dǎo)致ATP生成減少。為了檢驗(yàn)這一點(diǎn),我們?cè)诟腥镜募?xì)胞模型SMB-S15中檢測(cè)了ATP水平。跟我們的預(yù)期一致,感染細(xì)胞中ATP水平是降低的。最后,我們發(fā)現(xiàn)用白藜蘆醇清除朊病毒感染的細(xì)胞SMB-S15中的PrPSc后,SIRT3活性得到部分恢復(fù)。綜上,這些結(jié)果表明朊病毒感染引起了SIRT3蛋白表達(dá)和活性的下降,同時(shí)朊病毒的感染與SIRT3介導(dǎo)的線粒體蛋白的去乙�；g存在密切聯(lián)系,這很有可能在一定程度上能夠解釋朊病毒病中出現(xiàn)的線粒體功能異常。
【圖文】：

活性檢測(cè)試劑盒檢測(cè)了邋ＳＭＢ細(xì)胞系和接種ＳＭＢ細(xì)胞裂解物的小鼠腦組織中Ｓ０Ｄ２逡逑活性。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，ＳＭＢ－Ｓ１５細(xì)胞中Ｓ０Ｄ２活性比ＳＭＢ－ＰＳ的低，，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意逡逑義（尸＜０．０５）（圖４．５Ａ）。然而和接種ＳＭＢ－ＰＳ細(xì)胞裂解物的小鼠相比，在接種ＳＭＢ－Ｓ１５逡逑細(xì)胞裂解物的小鼠腦組織中，Ｓ０Ｄ２活性雖然呈現(xiàn)下降的趨勢(shì)，但是這種變化沒有統(tǒng)逡逑計(jì)學(xué)意義（圖４．５Ｂ）。緊接著，我們檢測(cè)了邋ＳＭＢ細(xì)胞中的ＲＯＳ水平，結(jié)果顯示ＳＭＢ－Ｓ１５逡逑細(xì)胞中ＲＯＳ水平比ＳＭＢ－ＰＳ的高，定量結(jié)果顯示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（／＾Ｏ．Ｏ〗）（圖逡逑４．５Ｄ）。這些結(jié)果說明，在朊病毒感染細(xì)胞和動(dòng)物腦組織中，ＳＯＤ２活性下降，從而逡逑導(dǎo)致了邋ＲＯＳ的升高。而ＳＯＤ２在兩個(gè)位點(diǎn)的高度乙�；辽倏梢圆糠纸忉專樱希模不铄义闲缘南陆怠ｅ义希铃义希校渝澹悖澹欤欤筮姡樱保靛澹悖澹欤欤箦义线婂澹哌姡椋颍脲义希澹保福暹婂义希樱希模策�？邋１－６－邐￣Ｔ￣逡逑Ｚ邋１－４－邋■■■：逡逑｜邋１．２－逡逑ＳＯＤ２－Ｋ１２２邋■邋．邐？？一＾邐Ｉ邋１．０－逡逑

小結(jié)逡逑究首先在朊病毒感染的細(xì)胞與動(dòng)物模型中檢測(cè)到了邋ＳＩＲＴ３表達(dá)與活后探宄了邋ＳＩＲＴ３底物的乙�；欠癜l(fā)生了相應(yīng)的變化。我們發(fā)現(xiàn)在系ＳＭＢ－Ｓ１５中，ＳＩＲＴ３關(guān)鍵靶蛋白ＳＯＤ２和ＡＴＰ５邋Ｐ出現(xiàn)過度乙酰現(xiàn)在朊病毒感染的細(xì)胞系ＳＭＢ－Ｓ１５中，ＲＯＳ水平升高而ＡＴＰ水平化酶Ｓ０Ｄ２的過度乙�；瘜�(dǎo)致該蛋白活性下降，部分解釋了朊病毒Ｂ－Ｓ１５中ＲＯＳ增多的發(fā)生。而ＡＴＰ酶重要亞基ＡＴＰ５邋Ｐ的過度乙酰ＴＰ酶活性下降，一定程度上解釋了上述感染細(xì)胞系中ＡＴＰ水平的下結(jié)論：ＳＩＲＴ３表達(dá)與活性下降，導(dǎo)致下游蛋白過度乙�；锌芍芯�粒體功能異常，從而在朊病毒病發(fā)生發(fā)展中起到了一定的作用（0
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R741

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