發(fā)布時間：2020-03-22 00:35

【摘要】：目的:FZD7,是Wnt信號受體。其在物種進化過程中高度保守,參與生物體重要的生長發(fā)育過程,如神經(jīng)嵴誘導(dǎo)、原腸胚形成、調(diào)控消化系統(tǒng)發(fā)育及維持腸內(nèi)穩(wěn)態(tài)等。近年來研究發(fā)現(xiàn)FZD7也在人類不同種類腫瘤的增殖、遷移、侵襲、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化和凋亡中扮演重要角色。然而,其在膠質(zhì)瘤惡性進展過程中的具體作用及機制尚不清楚。因此,本研究的目的是評估FZD7表達上調(diào)對膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的影響,了解其在膠質(zhì)瘤中調(diào)控的惡性生物學(xué)行為以及可能的作用機制。方法:通過使用公共數(shù)據(jù)庫數(shù)據(jù)比較膠質(zhì)瘤組織和正常腦組織中FZD7轉(zhuǎn)錄組表達水平差異,研究FZD7表達水平與膠質(zhì)瘤級別的聯(lián)系,并通過臨床樣本驗證。通過生存曲線與COX比例風(fēng)險回歸模型評估FZD7對膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的影響,并通過生物信息軟件對FZD7進行膠質(zhì)瘤相關(guān)功能學(xué)注釋。然后,通過轉(zhuǎn)染慢病毒過表達或敲低FZD7,運用CCK-8、克隆形成和裸鼠皮下成瘤實驗研究FZD7對膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖及成瘤能力的影響。通過劃痕實驗和侵襲小室實驗研究FZD7對膠質(zhì)瘤細(xì)胞遷移、侵襲等生物學(xué)行為的影響。并進一步研究過表達或敲低FZD7后膠質(zhì)瘤細(xì)胞上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化標(biāo)志物和WNT通路標(biāo)志物蛋白的表達水平變化。最后,結(jié)合基礎(chǔ)實驗結(jié)果和生物信息學(xué)分析FZD7與膠質(zhì)母細(xì)胞瘤間質(zhì)亞型的聯(lián)系和其轉(zhuǎn)化到臨床的應(yīng)用意義。結(jié)果:我們發(fā)現(xiàn)FZD7在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中較正常腦組織表達上調(diào),且其表達值隨著膠質(zhì)瘤級別的增高而增高。在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者中,FZD7表達水平高的患者較低的患者總體生存率降低,并證明FZD7是膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的獨立預(yù)測因子。通過GO、GSEA和GSVA三種算法,我們發(fā)現(xiàn)FZD7可能與膠質(zhì)瘤增殖、遷移、細(xì)胞粘附,上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化等生物學(xué)行為相關(guān)。其后,通過細(xì)胞學(xué)實驗證明敲低FZD7可以顯著抑制膠質(zhì)瘤細(xì)胞增殖、遷移、侵襲和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化。且敲低FZD7后,WNT通路相關(guān)分子即磷酸化的GSK-3?與?-catenin表達均降低。除此之外,我們還發(fā)現(xiàn)FZD7在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤的間質(zhì)亞型中表達水平最高,且其可作為膠質(zhì)母細(xì)胞瘤間質(zhì)亞型和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化的標(biāo)志物。研究的最后發(fā)現(xiàn)在術(shù)后接受放療或化療的膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者中,FZD7表達水平高的患者1、2、3、4、5年生存率均較低表達患者低。結(jié)論:FZD7促進膠質(zhì)瘤細(xì)胞的增殖、遷移、侵襲和上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化,是膠質(zhì)瘤患者預(yù)后的獨立預(yù)測因子,也是將來可用于膠質(zhì)瘤靶向治療的新靶點。
【圖文】：

16圖 1 FZD7 表達高低與膠質(zhì)瘤惡性程度相關(guān)A：膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者 FZD7 表達水平較正常腦組織增高。B: 膠質(zhì)母細(xì)胞瘤患者 FZD7 表達水平較 WHOⅠ-Ⅲ級患者增高。C：ROC 曲線驗證 FZD7 作為診斷膠質(zhì)瘤患者惡性度級別的

圖 2 K-M 曲線評估 FZD7 表達高低在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中的預(yù)后意義3.3 在膠質(zhì)瘤中，F(xiàn)ZD7 與增殖、遷移、粘附、上皮間質(zhì)轉(zhuǎn)化（EMT）生物學(xué)過程相關(guān)使用GO分析FZD7相關(guān)基因和差異基因，發(fā)現(xiàn)在膠質(zhì)瘤中 FZD7 與細(xì)胞增殖、細(xì)胞生長、EMT、細(xì)胞粘附、細(xì)胞遷移相關(guān)。運用 GSEA 分析全基因組數(shù)據(jù)發(fā)現(xiàn)高風(fēng)險組和低風(fēng)險組差異基因主要富集在 EMT、肌動蛋白細(xì)胞骨架的調(diào)控、黏著斑、粘附連接。肌動蛋白參與到細(xì)胞遷移等重要的生物學(xué)過程中。而黏著斑組成了細(xì)胞外基質(zhì)與細(xì)胞的肌動蛋白細(xì)胞骨架之間的物理聯(lián)系，通過整聯(lián)蛋白發(fā)揮作用，參與調(diào)控細(xì)胞粘附。因為在 GO 分析和 GSEA 分析均發(fā)現(xiàn) FZD7 與 EMT、細(xì)胞粘附、細(xì)胞遷移相關(guān)，接下來我們用 GSVA 算法進行驗證。運用 GSVA 針對選定的功能基因集對每一個患者計算評分，發(fā)現(xiàn) FZD7 表達水平與 EMT、細(xì)胞遷移、細(xì)胞粘附的評分呈正相關(guān)，與間質(zhì)上皮轉(zhuǎn)化（MET）、負(fù)調(diào)控 EMT、細(xì)胞增殖調(diào)控、對藥物反應(yīng)
【學(xué)位授予單位】：中國醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號】：R739.4

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本文編號：2594174