【摘要】：目的:觀察α-硫辛酸(α-LA)對(duì)帕金森病(PD)模型大鼠中腦黑質(zhì)(SN)和PD細(xì)胞模型的鐵含量、氧化應(yīng)激水平、以及FBXL5、鐵調(diào)節(jié)蛋白2(IRP2)、膜鐵轉(zhuǎn)運(yùn)蛋白1(FP1)表達(dá)的變化,探討α-LA干預(yù)PD鐵代謝的分子機(jī)制。方法:(1)動(dòng)物實(shí)驗(yàn):將健康雄性SD大鼠隨機(jī)分為假手術(shù)組(n=15)、PD模型組(n=15)和α-LA治療組(n=15);利用APO誘導(dǎo)的旋轉(zhuǎn)試驗(yàn)和圓筒試驗(yàn)檢測(cè)PD大鼠的行為學(xué)變化評(píng)估α-LA療效;采用免疫組化檢測(cè)PD大鼠中腦右側(cè)SN酪氨酸羥化酶(TH)的表達(dá)情況;采用普魯士藍(lán)鐵染色法和雙吡啶法檢測(cè)大鼠中腦右側(cè)SN鐵含量;采用分光光度法和WST-1法分別檢測(cè)大鼠中腦右側(cè)SN谷胱甘肽(GSH)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力;采用Western blot檢測(cè)各組大鼠右側(cè)SN區(qū)域FBXL5、IRP2和FP1的表達(dá)情況。(2)細(xì)胞實(shí)驗(yàn):采用6-OHDA誘導(dǎo)PC12細(xì)胞建立帕金森病細(xì)胞模型,噻唑藍(lán)(MTT)法檢測(cè)細(xì)胞活性篩選最佳6-OHDA建模濃度和α-LA干預(yù)治療濃度,細(xì)胞實(shí)驗(yàn)分為3個(gè)組,即正常對(duì)照組、模型組(200μmol/L 6-OHDA)和α-LA干預(yù)組(10μmol/Lα-LA+200μmol/L6-OHDA);采用雙吡啶法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鐵含量;采用比色法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)丙二醛(MDA)含量,熒光探針2,7-二氯二氫熒光素二乙酸酯(DCFH-DA)染色法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)含量;采用Western blot檢測(cè)各組PC12細(xì)胞內(nèi)FBXL5、IRP2和FP1的表達(dá)情況。結(jié)果:(1)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果:與假手術(shù)組大鼠相比,PD模型組大鼠經(jīng)APO誘導(dǎo)后的旋轉(zhuǎn)速度顯著增加(P0.01),圓筒試驗(yàn)檢測(cè)的左上肢使用率顯著下降(P0.01),PD模型組大鼠中腦右側(cè)SN的TH表達(dá)顯著減少(P0.01),鐵染色陽性細(xì)胞數(shù)量和總鐵含量均顯著增加(P0.01,P0.01),FBXL5表達(dá)明顯減少(P0.01),IRP2表達(dá)明顯增多(P0.01),FP1表達(dá)明顯減少(P0.01),GSH含量和SOD活力顯著降低(P0.01,P0.01);與PD模型組大鼠相比,α-LA治療組大鼠經(jīng)APO誘導(dǎo)后的旋轉(zhuǎn)速度明顯下降(P0.01),左上肢使用率明顯升高(P0.01),α-LA治療組大鼠中腦右側(cè)SN的TH表達(dá)明顯回升(P0.01),鐵染色陽性細(xì)胞數(shù)量和總鐵含量均明顯減少(P0.01,P0.01),FBXL5表達(dá)明顯增多(P0.05),IRP2表達(dá)明顯減少(P0.01),FP1表達(dá)明顯增多(P0.05),GSH含量和SOD活力明顯增加(P0.05,P0.01)。(2)細(xì)胞實(shí)驗(yàn)結(jié)果:200μmol/L的6-OHDA處理PC12細(xì)胞24 h后細(xì)胞活力下降至65.05±5.61%,作為PD模型細(xì)胞處理;而經(jīng)10μmol/Lα-LA預(yù)處理1 h后再加入200μmol/L 6-OHDA共孵育24 h,PC12細(xì)胞的細(xì)胞活力升至87.79±3.76%,此作為α-LA干預(yù)組細(xì)胞處理。與正常對(duì)照組PC12細(xì)胞相比,模型組PC12細(xì)胞活力顯著降低(P0.01),鐵含量明顯增多(P0.01),FBXL5表達(dá)明顯減少(P0.01),IRP2表達(dá)明顯增多(P0.01),FP1表達(dá)明顯減少(P0.01),MDA和ROS含量顯著增加(P0.01,P0.01);與模型組PC12細(xì)胞相比,α-LA干預(yù)組細(xì)胞活力明顯回升(P0.01),鐵含量明顯減少(P0.01),FBXL5表達(dá)明顯增多(P0.01),IRP2表達(dá)明顯減少(P0.05),FP1表達(dá)明顯增多(P0.05),MDA和ROS含量明顯降低(P0.01,P0.01)。結(jié)論:(1)α-LA可能通過FBXL5-IRP2通路上調(diào)FP1增加鐵轉(zhuǎn)出,抑制PD模型鐵沉積。(2)α-LA通過抗氧化作用上調(diào)PD模型FBXL5蛋白表達(dá)水平。
【圖文】：

驗(yàn)結(jié)果誘導(dǎo) PC12 細(xì)胞選取最佳建模建模濃度究[37-38]以及本課題組前期的前期研究結(jié)果[26誘導(dǎo)建模的處理時(shí)間。PC12 細(xì)胞被不同濃度呈劑量依賴性降低（圖 2-7）。用 6-OHDA要求細(xì)胞損傷程度適中（細(xì)胞損傷過重造成不利于觀察藥物的干預(yù)效果），當(dāng) 6-OHD為 65.05±5.61 %（P<0. 01），符合實(shí)驗(yàn)所需A 濃度作為 PD 細(xì)胞模型建模濃度。
【學(xué)位授予單位】：貴州醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R742.5

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本文編號(hào)：2590401