【摘要】：目的:探討孕酮對抗腺苷三磷酸(ATP)誘導(dǎo)的人神經(jīng)母細胞瘤SH-SY5Y細胞損傷的神經(jīng)保護作用和機制。方法:取對數(shù)生長期的SH-SY5Y細胞按照孕酮或ATP濃度的不同進行分組,CCK-8法檢測細胞存活率,YO-PRO-1染色檢測細胞膜通透性,Fluo-3染色檢測細胞內(nèi)Ca~(2+)濃度的變化,Western blot法檢測嘌呤能P2X_7受體表達的變化。結(jié)果:與對照組相比,不同濃度(1、3、5和7 mmol/L)ATP作用2 h,SH-SY5Y細胞存活率顯著降低(P0.05),細胞攝入YO-PRO-1的熒光強度明顯增加(P0.05),且呈劑量依賴性。濃度為3、10和30 nmol/L的孕酮預(yù)孵育30 min可減輕ATP損傷作用,細胞存活率較單純ATP組明顯升高(P0.05或P0.01)。孕酮(30nmol/L)或P2X_7受體拮抗劑KN-62(500 nmol/L)預(yù)孵育30 min均可顯著抑制ATP誘導(dǎo)的胞內(nèi)YO-PRO-1的熒光增強(P0.01),而孕酮和KN-62兩者之間沒有明顯差異。正常組細胞內(nèi)鈣離子含量少,ATP組細胞內(nèi)鈣離子熒光強度較對照組明顯增高(P0.05),孕酮(30 nmol/L)或KN-62(500 nmol/L)預(yù)孵育30 min可明顯降低(P0.05)ATP誘導(dǎo)的胞內(nèi)鈣熒光增強,而孕酮和KN-62兩者之間的作用無明顯差異。ATP組SH-SY5Y細胞P2X_7受體表達較對照組明顯增加(P0.05),而孕酮(30 nmol/L)預(yù)孵育30 min則可顯著降低ATP誘導(dǎo)的P2X_7受體表達(P0.05)。結(jié)論:孕酮可抑制ATP誘導(dǎo)的P2X_7受體表達、膜孔形成和胞內(nèi)Ca~(2+)升高,降低細胞死亡率,明顯減輕高濃度ATP對SH-SY5Y細胞的損傷作用。
【圖文】：

H-SY5Ycells．Mean±SEM．n=3．＊＊P＜0.01vscontrolgroup;#P＜0.05，##P＜0.01vsATPgroup．圖3孕酮對ATP損傷的SH-SY5Y細胞活力的影響4孕酮對ATP誘導(dǎo)的SH-SY5Y細胞膜孔形成的影響熒光顯微鏡下觀察YO-PＲO-1的結(jié)果，與對照組相比，，ATP組胞內(nèi)YO-PＲO-1熒光信號明顯增強，而孕酮+ATP組和KN-62+ATP組熒光信號明顯低于ATP組。多功能酶標儀檢測結(jié)果示，孕酮+ATP組和KN-62+ATP組細胞內(nèi)熒光強度分別為103.9%和98.23%，均明顯低于ATP(5mmol/L)組的120.5%(P＜0.01)，而與對照組無顯著差別(P＞0.05)，見圖4。5孕酮對細胞內(nèi)游離鈣離子的影響正常細胞內(nèi)鈣離子含量少且穩(wěn)定。ATP處理組平均熒光值隨著ATP作用時間的延長逐漸增高，即Figure4．Theeffectofprogesterone(PＲOG)andKN-62onYO-PＲO-1uptakeinducedbyATPintheSH-SY5Ycells(×400)．Mean±SEM．n=3．＊＊P＜0.01vscontrolgroup;##P＜0.01vsATPgroup．圖4孕酮和KN-62對ATP誘導(dǎo)的細胞攝入YO-PＲO-1的影響胞內(nèi)鈣離子逐漸增高。與ATP組相比，孕酮+ATP組和KN-62+ATP組胞內(nèi)鈣離子均明顯降低(P＜0.05)，見圖5。6孕酮對ATP誘導(dǎo)的SH-SY5Y細胞P2X7受體表達的影響Westernblot實驗結(jié)果示，ATP處理后SH-SY5Y細胞P2X7受體蛋白表達明顯增加(P＜0.05)，而預(yù)先給予孕酮預(yù)孵育，P2X7受體蛋白表達水平則明顯低于ATP處理組(P＜0.05)，由此看來孕酮能抑制ATP誘導(dǎo)的SH-SY5Y細胞P2X7受體蛋白表達的上調(diào)，見圖6。討論至今繼發(fā)性腦損傷仍缺乏理想的治療方法和手段，而孕酮作為神經(jīng)甾體對腦損傷的保護作用已有較多的報道。許多動物模型實驗表明，孕酮可延緩神經(jīng)細胞的壞死、凋亡，促進血腦屏障重建，減少炎癥級聯(lián)反應(yīng)，減輕腦水腫，促進神經(jīng)髓鞘合成［7

Figure5．Theeffectofprogesterone(PＲOG)andKN-62onCa2+concentrationsinducedbyATPinSH-SY5Ycells(×400)．Mean±SEM．n=3．＊＊P＜0.01vscontrolgroup;##P＜0.01vsATPgroup．圖5孕酮和KN-62對胞外ATP誘導(dǎo)的細胞內(nèi)Ca2+濃度的影響Figure6．Theeffectofprogesterone(PＲOG)ontheproteinex-pressionofP2X7receptor(P2X7Ｒ)inducedbyATPintheSH-SY5Ycells．Mean±SEM．n=3．＊＊P＜0.01vscontrolgroup;#P＜0.05vsATPgroup．圖6孕酮對ATP誘導(dǎo)的SH-SY5Y細胞P2X7受體表達的影響腦組織ATP主要由神經(jīng)膠質(zhì)細胞釋放，且具有遞質(zhì)活性，故稱為膠質(zhì)遞質(zhì)。生理情況下胞內(nèi)ATP達mmol/L濃度，胞外μmol/L水平。胞外μmol/L水平的ATP可激活P2X7Ｒ，形成陽離子通道，介導(dǎo)Ca2+、Na+內(nèi)流以及K+外流，使細胞去極化，維持神經(jīng)細胞正常興奮活動。而在腦外傷、腦缺血、炎癥等些病理情況下，受傷局部的膠質(zhì)細胞釋放出大量ATP及其降解產(chǎn)物，且向鄰近區(qū)域擴散，高濃度ATP長時間或者反復(fù)刺激細胞膜上P2X7Ｒ，形成允許各種陽離子和900D以下的有機物質(zhì)通過的“膜孔”，使細胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)失衡而死亡。膜孔形成可加速Ca2+內(nèi)流，引起鈣超載，使膠質(zhì)細胞釋放致炎因子，引發(fā)炎癥反應(yīng)，加重腦組織損傷［13］。Suadicani等［14］采用表達P2X7受體的人類膠質(zhì)細胞瘤1321N1細胞系作為實驗對象，發(fā)現(xiàn)苯甲酰苯甲酸腺嘌呤核苷三磷酸可使胞內(nèi)Ca2+濃度、YO-PＲO-1攝取及ATP釋放明顯增加。有研究表明ATP作用于分化的NG108-15神經(jīng)細胞，激活P2X7受體后不僅引起細胞內(nèi)鈣超載，而且通過三磷酸肌醇受體介導(dǎo)鈣釋放，最終導(dǎo)致細胞的凋亡［15］。因此鈣超載也是P2X7Ｒ產(chǎn)生毒性作用的重要因素。

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 張宇新,趙煥英,蘇月,蘇玉金,趙春禮,徐群淵,楊慧;α-synuclein-pEGFP真核表達載體的構(gòu)建及其在SH-SY5Y細胞中的表達[J];神經(jīng)解剖學雜志;2003年02期

2 錢進軍;王穎;趙康仁;吳頡言;張渭芳;王清芳;馬瑞;;低濃度利福平對魚藤酮介導(dǎo)的帕金森病細胞模型SH-SY5Y細胞的保護作用[J];江蘇醫(yī)藥;2011年16期

3 田明秀;常明;朱本清;解洪榮;王丹平;張春光;胡林森;;多巴胺誘導(dǎo)SH-SY5Y細胞帕金森病模型中GRP78的表達[J];吉林大學學報(醫(yī)學版);2010年01期

4 徐八一;何衛(wèi)紅;何平;夏濤;陳學敏;王愛國;;PBDE-47對人神經(jīng)母細胞瘤SH-SY5Y細胞致突變作用[J];癌變.畸變.突變;2007年06期

5 李燕;毛善平;翁小東;邢變枝;劉軍;;缺血后處理對SH-SY5Y細胞缺血再灌注模型的保護作用[J];卒中與神經(jīng)疾病;2012年05期

相關(guān)會議論文 前3條

1 姜慧軼;胡林森;;蛋白酶體抑制劑處理的未分化及分化SH-SY5Y細胞的蛋白質(zhì)組學[A];中華醫(yī)學會第十三次全國神經(jīng)病學學術(shù)會議論文匯編[C];2010年

2 李勤;索麗松;謝海燕;張耀陽;鄧玉林;;免疫熒光法檢測DAT在SH-SY5Y細胞中的分布[A];第六屆全國光生物學學術(shù)研討會論文集[C];2004年

3 楊威;麻琦;唐力;鄧玉林;;SH-SY5Y細胞內(nèi)羥自由基水平的HPLC-ECD測定方法研究[A];第十五次全國色譜學術(shù)報告會文集（下冊）[C];2005年

相關(guān)博士學位論文 前1條

1 孫允霄;順鉑通過miR-16下調(diào)BDNF表達抑制SH-SY5Y細胞生長的研究[D];山東大學;2014年

相關(guān)碩士學位論文 前2條

1 張寧;尿酸調(diào)節(jié)Nrf2信號通路減輕6-OHDA對SH-SY5Y細胞損傷的實驗研究[D];蘇州大學;2014年

2 周立冬;2，3-吲哚醌多靶點誘導(dǎo)腫瘤細胞SH-SY5Y凋亡機制的研究[D];青島大學;2009年

本文編號：2570453