【摘要】：目的： 腦缺血再灌注損傷（cerebral ischemia reperfusion injury，CIRI）是指缺血腦組織重新獲得血供后，腦細(xì)胞功能代謝障礙及結(jié)構(gòu)破壞進(jìn)一步加重的現(xiàn)象，是由多種機(jī)制參與的可引起一系列細(xì)胞、分子及其調(diào)節(jié)過(guò)程變化的復(fù)雜的病理生理過(guò)程。 血管緊張素Ⅱ (Angiotensin,Ang Ⅱ)是腎素血管緊張素醛固酮系統(tǒng)(renin angiotensin aldosterone system,RAAS)一種重要的多功能血管活性物質(zhì),可作用于特異的膜結(jié)合受體上，目前所知的RAAS的生物效應(yīng)幾乎均通過(guò)AngⅡ與相應(yīng)的受體作用，其受體分為AngⅡ1型受體(AT1受體)和AngⅡ2型受體(AT2受體)兩種。在許多情況下, AngⅡ與AT2受體結(jié)合和AngⅡ與AT1受體結(jié)合所介導(dǎo)的生物學(xué)效應(yīng)及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路具有拮抗作用，如增殖/抗增殖,細(xì)胞分裂/分化和凋亡,血管收縮/舒張。在未成熟的大腦，AT2受體表達(dá)豐富且分布廣泛，主要集中在與運(yùn)動(dòng)、感覺(jué)、學(xué)習(xí)相關(guān)的中樞區(qū)域及邊緣系統(tǒng)的某些結(jié)構(gòu),但在成年大鼠中,這些部位的AT2受體顯著減少。既往研究表明，在神經(jīng)組織內(nèi)AT2受體可以促進(jìn)細(xì)胞的分化和再生，從而促進(jìn)神經(jīng)功能的恢復(fù)。 本研究首先建立大鼠大腦中動(dòng)脈閉塞（middle carotid artery occlusion，MCAO）模型，觀察腦缺血再灌注損傷后腦組織中AT2受體的表達(dá)情況及相關(guān)因子的變化，探討AT2受體在腦缺血再灌注損傷中的作用及其可能的機(jī)制，并進(jìn)一步探討坎地沙坦(Candesartan)對(duì)腦缺血再灌注損傷的影響和可能的機(jī)制，從而為腦缺血再灌注損傷提供新的治療方向和理論依據(jù)。 實(shí)驗(yàn)方法： 1.建立MCAO模型。 2. TTC染色檢測(cè)腦梗死體積。 3.免疫組化法檢測(cè)腦組織AT2受體、IL1β、TNF α、IL10、c fos、c jun及大腦中動(dòng)脈PCNA、α SM actin的表達(dá)。 4. HE染色檢測(cè)大腦中動(dòng)脈橫斷面內(nèi)膜、中膜面積并做內(nèi)膜與中膜面積比。 5. Real time PCR檢測(cè)腦組織Bcl2mRNA、Bax mRNA的表達(dá)。 6. Western blot檢測(cè)腦組織Bcl2、Bax蛋白的表達(dá)。 7.統(tǒng)計(jì)學(xué)處理：采用SPSS11.5軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，所有數(shù)據(jù)以均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示，采用t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果： 1.免疫組化法檢測(cè)AT2受體表達(dá)變化說(shuō)明AT2受體參與了腦缺血再灌注過(guò)程：再灌注1天時(shí)腦組織中AT2受體表達(dá)量開(kāi)始上升（P＜0.05），于第7天達(dá)高峰，第10天表達(dá)量逐漸下降。 2.免疫組化法檢測(cè)IL1β、TNF α和IL10表達(dá)變化說(shuō)明免疫炎癥反應(yīng)參與了腦缺血再灌注過(guò)程：與sham組比較，I/R組腦組織中IL-1β表達(dá)增加（P＜0.05），TNF-α表達(dá)增加（P＜0.05），IL-10表達(dá)增加（P＜0.05）。 3.免疫組化法檢測(cè)大腦中動(dòng)脈PCNA和α SM actin表達(dá)變化，HE染色檢測(cè)大腦中動(dòng)脈橫斷面內(nèi)膜、中膜面積并做內(nèi)膜與中膜面積比（I/M）說(shuō)明腦缺血再灌注可引起缺血?jiǎng)用}內(nèi)膜增生，進(jìn)而導(dǎo)致血運(yùn)重建后血管狹窄的發(fā)生：與sham組比較，I/R組缺血側(cè)大腦中動(dòng)脈PCNA表達(dá)增加（P＜0.05），α-SM-actin表達(dá)減少（P＜0.05）； I/R組缺血側(cè)大腦中動(dòng)脈橫截面的I/M值增大（P＜0.05）。 4.免疫組化法檢測(cè)c fos、c jun表達(dá)變化，RT PCR檢測(cè)Bcl2mRNA、BaxmRNA及Western blot檢測(cè)Bcl2、Bax蛋白的表達(dá)變化說(shuō)明細(xì)胞凋亡參與了腦缺血再灌注過(guò)程：與sham組比較，I/R組腦組織中Bcl-2mRNA的相對(duì)表達(dá)量減少（P＜0.05），BaxmRNA的相對(duì)表達(dá)量增多（P＜0.05）；Bcl-2蛋白的相對(duì)表達(dá)量減少（P＜0.05），Bax蛋白的相對(duì)表達(dá)量增多（P＜0.05）；c-fos表達(dá)增加（P＜0.05），c-jun表達(dá)增加（P＜0.05）。 5.免疫組化法檢測(cè)不同組AT2受體表達(dá)變化及TTC染色檢測(cè)腦梗死體積說(shuō)明AT2受體在腦缺血再灌注過(guò)程中起保護(hù)作用：給予CGP42112處理后腦組織中AT2受體表達(dá)量增加（*P＜0.05vs.Control組），給予PD123319處理后腦組織中AT2受體表達(dá)量減少（#P＜0.05vs.Control組）；給予CGP42112處理后腦梗死體積縮�。�*P＜0.05vs.Control組）；給予PD123319處理后腦梗死體積擴(kuò)大（#P＜0.05vs.Control組）。 6.免疫組化法檢測(cè)不同組IL1β、TNF α和IL10表達(dá)變化說(shuō)明再灌注損傷后AT2受體通過(guò)抑制免疫炎癥反應(yīng)起神經(jīng)保護(hù)作用：給予CGP42112處理后腦組織中IL-1β表達(dá)減少（*P＜0.05vs.Control組），TNF-α表達(dá)減少（*P＜0.05vs.Control組），IL-10表達(dá)增加（*P＜0.05vs.Control組）；給予PD123319處理后腦組織中IL-1β表達(dá)增加（#P＜0.05vs.Control組），TNF-α表達(dá)增加（#P＜0.05vs.Control組），，IL-10表達(dá)減少（#P＜0.05vs.Control組）。 7.免疫組化法檢測(cè)不同組大腦中動(dòng)脈PCNA和α SM actin表達(dá)變化，HE染色檢測(cè)大腦中動(dòng)脈橫斷面的內(nèi)膜、中膜面積并做內(nèi)膜與中膜面積比（I/M）說(shuō)明再灌注損傷后AT2受體通過(guò)抑制血運(yùn)重建后血管狹窄的發(fā)生起神經(jīng)保護(hù)作用：給予CGP42112處理后，缺血側(cè)大腦中動(dòng)脈PCNA表達(dá)減少（*P＜0.05vs.Control組），α-SM-actin表達(dá)增加（*P＜0.05vs.Control組），給予PD123319處理后缺血側(cè)大腦中動(dòng)脈PCNA表達(dá)增加（#P＜0.05vs.Control組），α-SM-actin表達(dá)減少（#P＜0.05vs.Control組）；給予CGP42112處理后動(dòng)脈橫截面的I/M值減小（*P＜0.05vs.Control組）；給予PD123319處理后動(dòng)脈橫截面的I/M值增大（#P＜0.05vs.Control組）。 8.免疫組化法檢測(cè)不同組c fos、c jun表達(dá)變化，RT PCR檢測(cè)Bcl2mRNA、BaxmRNA及Western blot檢測(cè)Bcl2、Bax蛋白的表達(dá)變化說(shuō)明再灌注損傷后AT2受體通過(guò)抑制神經(jīng)細(xì)胞的凋亡起神經(jīng)保護(hù)作用：給予CGP42112處理后腦組織中Bcl-2mRNA的相對(duì)表達(dá)量增加（*P＜0.05vs.Control組），BaxmRNA的相對(duì)表達(dá)量減少（*P＜0.05vs.Control組），給予PD123319處理后腦組織中Bcl-2mRNA的相對(duì)表達(dá)量減少（#P＜0.05vs.Control組），BaxmRNA的相對(duì)表達(dá)量增加（#P＜0.05vs.Control組）；給予CGP42112處理后腦組織中Bcl-2蛋白的相對(duì)表達(dá)量增加（#P＜0.05vs.Control組），Bax蛋白的相對(duì)表達(dá)量減少（#P＜0.05vs.Control組）；給予PD123319處理后腦組織中Bcl-2蛋白的相對(duì)表達(dá)量減少（*P＜0.05vs.Control組），Bax蛋白的相對(duì)表達(dá)量增加（*P＜0.05vs.Control組）。 9.免疫組化法檢測(cè)不同組AT2受體表達(dá)變化及TTC染色檢測(cè)腦梗死體積說(shuō)明再灌注損傷后Candesartan可通過(guò)促進(jìn)AT2受體的表達(dá)起神經(jīng)保護(hù)作用：給予Candesartan處理后腦組織中AT2受體表達(dá)量增加（P＜0.05）；腦梗死體積縮�。≒＜0.05）。 結(jié)論： 1.腦缺血再灌注后，腦組織AT2受體表達(dá)增加。 2.腦缺血再灌注損傷可誘發(fā)腦組織內(nèi)免疫炎癥反應(yīng)、血液重建后缺血?jiǎng)用}狹窄及神經(jīng)細(xì)胞凋亡。 3. AT2受體在腦缺血再灌注過(guò)程中起保護(hù)作用，這種保護(hù)作用可能通過(guò)抑制免疫炎癥反應(yīng)、血運(yùn)重建后血管狹窄的發(fā)生及神經(jīng)細(xì)胞的凋亡而實(shí)現(xiàn)。 4. Candesartan在腦缺血再灌注過(guò)程中起保護(hù)作用，這種保護(hù)作用可能是通過(guò)促進(jìn)AT2受體在再灌注腦組織中的表達(dá)，進(jìn)而促進(jìn)AT2受體所介導(dǎo)的神經(jīng)保護(hù)作用而實(shí)現(xiàn)。
【學(xué)位授予單位】：大連醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類(lèi)號(hào)】：R743

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 劉廣義;;腦缺血后Caspase-3蛋白Bcl-2和Bax基因表達(dá)在神經(jīng)損傷中的作用[J];中國(guó)康復(fù);2010年03期

本文編號(hào)：2570671