【摘要】：目的:我們通過研究線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔與線粒體膜電位之間的關(guān)系,進(jìn)而探討線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔對線粒體分裂的影響,從而為抗腦缺血再灌注的損傷提供新思路和新理念。方法:通過建立海馬神經(jīng)元的氧糖剝奪再灌注(OGD/RP)損傷細(xì)胞模型來模擬腦缺血再灌注的臨床損傷狀態(tài)。選用出生24 h內(nèi)的Wistar大鼠,皮膚紅潤光澤,完好無損,體重5.0-6.0g,雌雄不限,獲得海馬神經(jīng)元細(xì)胞進(jìn)行體外培養(yǎng),培養(yǎng)至第8天,采用隨機(jī)數(shù)字表法,將其分為5組(n=45):正常組(C組)細(xì)胞正常培養(yǎng),無需任何處理;缺氧復(fù)氧組(I組)細(xì)胞采用氧糖剝奪法(OGD)模擬構(gòu)建大鼠海馬神經(jīng)元缺氧復(fù)氧損傷模型;賦形劑組(V組)用同樣的方法進(jìn)行氧糖剝奪處理,處理前40 min加入DMSO培養(yǎng)6h,終濃度0.1%;缺氧復(fù)氧加蒼術(shù)苷組(M組)細(xì)胞在進(jìn)行氧糖剝奪處理前40 min加入400 umol/L的蒼術(shù)苷(ATR)(溶于DMSO,DMSO濃度0.1%);缺氧復(fù)氧加環(huán)孢素組(N組)細(xì)胞在進(jìn)行氧糖剝奪處理前40 min加入0.2 umol/L的環(huán)孢菌素A(CSA)(溶于DMSO,DMSO濃度0.1%)。分組處理后,用倒置顯微鏡觀察正常組海馬神經(jīng)元生長狀態(tài)、用JEM-1200EX透射電鏡觀察線粒體的超微結(jié)構(gòu)形態(tài)、酶標(biāo)儀法測三磷酸腺苷(ATP)含量、熒光顯微鏡檢測線粒體膜電位(MMP)、Western Blot法檢測線粒體分裂蛋白(Drp1)、細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白細(xì)胞色素C(Cyt c)和抑制凋亡蛋白(Bcl-2)的表達(dá)、用流式儀測定神經(jīng)元凋亡率。結(jié)果:結(jié)果顯示,電鏡下線粒體超微結(jié)構(gòu)中C組為正常線粒體,可見完整的線粒體內(nèi)外膜、清晰的線粒體嵴結(jié)構(gòu)以及致密的基質(zhì)結(jié)構(gòu),并且細(xì)胞凋亡率不足10%,而與C組相比,I組線粒體腫脹明顯,基質(zhì)疏散無序,內(nèi)外膜分離,嵴斷裂,網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)破壞,ATP含量和線粒體膜電位明顯降低,細(xì)胞凋亡率升高,Drp1和Cyt c蛋白表達(dá)升高,而Bcl-2的蛋白表達(dá)降低,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。與I組相比,N組預(yù)處理后線粒體腫脹明顯減輕,基質(zhì)緊致有序,線粒體內(nèi)外膜可見,網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)基本保存完好,ATP含量和線粒體膜電位明顯升高,細(xì)胞凋亡率明顯降低,Drp1和Cyt c蛋白表達(dá)降低,而Bcl-2的表達(dá)顯著升高,差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05);而M組預(yù)處理后各實驗結(jié)果與N組實驗結(jié)果變化完全相反,進(jìn)一步說明了MPTP活性在細(xì)胞凋亡的重要性。在各組實驗結(jié)果中顯示,與I組相比,V組各項實驗指標(biāo)變化無明顯差異(P0.05),沒有統(tǒng)計學(xué)意義,進(jìn)一步說明DMSO對海馬神經(jīng)元無損傷作用。結(jié)論:在體外培養(yǎng)海馬神經(jīng)元模擬臨床腦缺血再灌注損傷模型中,發(fā)現(xiàn)通過激活線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔的開放,會促使海馬神經(jīng)元線粒體分裂的明顯增加,而抑制線粒體通透轉(zhuǎn)換孔的開放能夠明顯減少腦缺血再灌注損傷中線粒體的分裂,并減少神經(jīng)元的凋亡,其機(jī)制可能是穩(wěn)定線粒體膜電位。
【圖文】：

海馬神經(jīng)元（×200）

各組線粒體的電鏡圖
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R743

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 吳秀云;王士雷;王鵬;李瑜;王艷婷;姚如永;王黎;;線粒體鈣單向轉(zhuǎn)運(yùn)體對線粒體通透性轉(zhuǎn)換孔的調(diào)控作用[J];國際麻醉學(xué)與復(fù)蘇雜志;2012年04期

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本文編號：2564337