【摘要】：背景 應(yīng)激通常被認(rèn)為是應(yīng)激相關(guān)障礙的誘因,急性應(yīng)激可引起個體出現(xiàn)認(rèn)知障礙等神經(jīng)功能異常,然而個體在面對應(yīng)激時的表現(xiàn)卻具有明顯的異質(zhì)性。目前尚不清楚個體表現(xiàn)出這種異質(zhì)性的具體分子生物學(xué)機制。腦內(nèi)BDNF通常被認(rèn)為是應(yīng)激調(diào)控相關(guān)環(huán)路中的重要調(diào)節(jié)因子,miRNAs是調(diào)節(jié)腦內(nèi)BDNF表達的重要因子。本研究以SD大鼠為研究對象,以急性不可逃避應(yīng)激(acute unavoidable stress,AUS)來建立急性逃避缺陷大鼠模型acute escape deficit (AED) paradigm,以逃避測試試驗來評價大鼠對傷害性刺激的逃避行為,并確定大鼠是否對應(yīng)激易感。觀察急性應(yīng)激對應(yīng)激易感大鼠及應(yīng)激抵抗大鼠腦內(nèi)易感腦區(qū)BDNF及相關(guān)調(diào)控miRNAs表達的影響。以此研究嘗試解釋這種個體異質(zhì)性的具體分子生物學(xué)機制。 目的 (1)驗證是否有部分大鼠對急性應(yīng)激不易感。 (2)了解腦內(nèi)的BDNF與大鼠對急性應(yīng)激的易感性間的關(guān)系。 (3)了解腦內(nèi)BDNF相關(guān)調(diào)控miRNAs與應(yīng)激所致大鼠認(rèn)知功能改變間的關(guān)系,及了解腦內(nèi)BDNF相關(guān)調(diào)控niRNAs與相關(guān)BDNF表達變化間的關(guān)系。 方法 (1)研究對象,研究設(shè)計及觀察指標(biāo) 研究對象為成年SD大鼠。采取單干預(yù)因素組間對照設(shè)計。將35只SD大鼠,依行為學(xué)評價取得分相近30只,隨機取6只為對照組,其余接受急性不可逃避應(yīng)激。應(yīng)激6小時后進行行為學(xué)評價,依得分分為應(yīng)激抵抗組6只,隨機取6只為應(yīng)激易感組。觀察急性應(yīng)激后大鼠腦內(nèi)BDNF及調(diào)控BDNF的miRNAs的表達量。 (2)應(yīng)激范式及認(rèn)知功能評價 應(yīng)激采用急性不可逃避應(yīng)激范式,將大鼠進行50min行為限制(置于40×30×20Cm3電擊籠中),在同一時間內(nèi)給予80次足底電擊(60V,持續(xù)7秒,每30秒一次)。 應(yīng)激評價方法采用應(yīng)激逃避試驗,記錄大鼠在30次電擊刺激下在規(guī)定時間內(nèi)成功逃避電擊的次數(shù)。 (3)BDNF及其相關(guān)調(diào)控miRNA表達檢查方法 分別取雙側(cè)海馬及額葉皮質(zhì),等量混合后,以RT-PCR法檢測相應(yīng)區(qū)域BDNF及其相關(guān)調(diào)控miRNAs表達。 (4)統(tǒng)計學(xué)方法 采用方差分析分析實驗數(shù)據(jù),用SPSS16.0進行數(shù)據(jù)處理。采用單因素方差分析(one-way ANOVA)進行比較。以P0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)果 (1)行為學(xué)檢測 應(yīng)激前,各組大鼠平均逃避次數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05,),應(yīng)激后6小時,易感組(1.330±1.030)明顯低于對照組(16.170±2.920)(P0.05),抵抗組(17.170±3.540)與對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。 (2)各組各腦區(qū)BDNF表達 急性應(yīng)激后前額皮質(zhì)BDNF表達易感組及抵抗組均低于對照組(P0.05),抵抗組與易感組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。急性應(yīng)激后海馬BDNF表達易感組高于對照組(P=0.000),抵抗組低于對照組及易感組(分別P=0.000,P=0.000)。 (3)各組各腦區(qū)調(diào)控BDNF相關(guān)的miRNAs表達 前額皮質(zhì) Rt-1 易感組(1.87±0.24)及抵抗組(1.76±0.23)均顯著高于對照組(0.98±0.17)(均P=0.00)。 RT-1Oa-5p 易感組(0.51±0.16)顯著低于對照組(0.94±0.15)(P=0.010)；抵抗組(1.59±0.39)顯著高于對照組(P=0.001)及易感組(JP=0.000)。 RT.195 易感組(1.81±±0.29)及抵抗組(1.54±0.44)均顯著高于對照組(0.95±0.27)(分別P=0.001,P=0.0091。 RT-206 易感組(0.36±0.10)顯著低于對照組(1.03±0.23)(P=0.000)；抵抗組(1.59±0.39)顯著高于易感組(P=0.000)。 海馬 Rt-1 易感組(3.79±1.60)抵抗組(4.26±1.42)均顯著高于對照組(1.01±0.25)(分別P=0.002,P=0.000)。 RT-10a-5p 易感組(0.144±0.05)抵抗組(0.65±0.14)均顯著高于對照組(0.96±±0.31)(分別P=0.000,P=0.019)。 RT-195 易感組(0.33±0.10)顯著低于抵抗組(0.91±0.30)和對照組(0.94±0.20)(分別P=0.000,P=0.000)。 RT-206 易感組(2.59±0.41)顯著高于對照組(1.044±0.31)(P=0.003),抵抗組(5.06±1.20)顯著高于易感組(P=0.000)。結(jié)論 (1)部分大鼠在急性不可逃避性應(yīng)激下,未出現(xiàn)逃避缺陷性認(rèn)知障礙,出現(xiàn)應(yīng)激抵抗。 (2)海馬區(qū)BDNF下降是大鼠對急性不可逃避應(yīng)激產(chǎn)生應(yīng)激抵抗的分子生物學(xué)機制的一部分。 (3)miRNAs表達的變化可能參與應(yīng)激抵抗的形成,但并非完全通過對BDNF表達變化的調(diào)節(jié)來實現(xiàn)。
【圖文】：

U6-F CTCGCTTCGGCAGCACATATACTU6-R ACGCTTCACGAATTTGCGTGTCRT-10a-5p GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACCACAAART- MiR-1 GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACTACCTART- MiR-195 GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACCACCACRT- MiR-206 GTCGTATCCAGTGCAGGGTCCGAGGTATTCGCACTGGATACGACCACTTGniiR-10a-5p-F GCGGCGGTACCCTGTAGATCCGmir-l-F GCGGCGGTGCCTACTCAGAGCACinir-195-F GCGGCGGAACTCTCCTGGCTCTAGiTiir-206-F GCGGCGGCTTCCCCAGGCCACATGR CAGTGCAGGGTCCGAGGTATBDNF-F ATCCACTGAGCAAAGCCGAACBDNF-R CAGCCTTCATGCAACCGAAGTA

—圖3 ：部分H標(biāo)產(chǎn)物RT — PCR時的融解曲線及擴增曲線：1.3.8統(tǒng)計學(xué)方法所有的統(tǒng)計分析均采用SPSS16.0軟件完成，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(Mean±SD)表示。以方差分析進行數(shù)據(jù)比較，以P<0.05為差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。2結(jié)果2.1急性應(yīng)激對大鼠認(rèn)知功能的影響應(yīng)激前，各組大鼠平均逃避次數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P〉0.05)，應(yīng)激后6小時，易感組(1.330±1.030)明顯低于對照組(16.170±2.920)(P<0.05)，抵抗組(17.丨70±3.540)與對照組相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P〉0.05)。（圖4,圖5)22
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R741

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本文編號：2553043