【摘要】：目的：康復訓練是是目前缺血性腦卒中恢復期促進神經(jīng)功能恢復的有效治療措施之一。研究證實缺血性腦卒中后給予針對性的功能訓練和活動有利于缺損神經(jīng)功能的恢復，提高患者的日常生活質(zhì)量[1-3]。同時cAMP-PKA-pCREB信號通路的激活可明顯促進損傷軸突再生[4-6]，改善CNS損傷后的神經(jīng)功能障礙。因此，為求進一步探索康復訓練促進缺血性卒中后的神經(jīng)功能恢復機制是否與cAMP-PKA-pCREB信號通路的激活促進損傷軸突再生有關，我們擬以cAMP-PKA-pCREB這條信號通路為切入點，通過觀察康復訓練對腦梗死后大鼠腦組織內(nèi)cAMP、總PKA含量以及PKAc、pCREB蛋白表達變化的影響，結合軸突再生標志物GAP-43蛋白表達變化的檢測和平衡木試驗對實驗性大鼠運動功能的評價，闡述cAMP-PKA-pCREB信號通路在康復訓練促進腦梗死后大鼠的運動功能恢復過程中的具體作用，，為臨床康復治療提供新的理論支持。 方法：采用成年健康的SD雄性大鼠，參照Longa改良線栓法進行大腦中動脈缺血灌注（MACO）模型的制備，缺血2h后再灌注。模型成功的大鼠隨機分為自然恢復組、自然恢復+Rp-cAMP組、康復訓練組和康復訓練+Rp-cAMP組，PKA抑制劑Rp-cAMP于側腦室注射后立即進行MACO模型的制備。同時設立假手術組。康復訓練的實驗性大鼠均于術后48h開始訓練。時間點設立為術后2d、7d、14d和21d。通過酶聯(lián)免疫法檢測腦組織內(nèi)cAMP、總PKA的含量變化，Western Blot檢測腦組織內(nèi)PKAc、pCREB蛋白的表達變化，同時采用免疫組化法進行pCREB、PKAc、GAP-43蛋白表達的定位檢測及GAP-43蛋白表達的半定量分析，應用平衡木試驗對實驗性大鼠進行運動功能評價。 結果：（1）運動功能評分結果：自然恢復組大鼠的平衡木試驗評分低于自然恢復+Rp-cAMP組；康復訓練組大鼠明顯低于自然恢復組，也低于康復訓練+Rp-cAMP組；（2）腦組織內(nèi)cAMP、總PKA的含量和PKAc、pCREB蛋白表達的結果:自然恢復組大鼠高于自然恢復+Rp-cAMP組，康復訓練組大鼠明顯高于自然恢復組，也高于康復訓練+Rp-cAMP組；（3）腦組織GAP-43蛋白表達結果：自然恢復組大鼠高于自然恢復+Rp-cAMP組，康復訓練組大鼠明顯高于自然恢復組，也高于康復訓練+Rp-cAMP組。以上改變均于術后14d最為明顯。 結論：（1）腦組織缺血后腦組織內(nèi)cAMP、總PKA的含量增加，PKAc及其下游pCREB蛋白的表達也增強，同時GAP-43蛋白表達也隨之明顯增加。（2）康復訓練可明顯增加腦組織cAMP、總PKA的含量，促進PKAc、pCREB蛋白的表達，同時GAP-43蛋白的表達也隨之明顯增加。（3）側腦室注射Rp-cAMP可可明顯抑制MACO大鼠腦組織內(nèi)總PKA、PKAc和pCREB蛋白的表達，并明顯的拮抗了康復訓練對以上指標的促進作用。（4）康復訓練可明顯改善MACO大鼠的運動功能。（5）側腦室注射Rp-cAMP可明顯減弱康復訓練對運動功能的改善作用。這些研究發(fā)現(xiàn)提示，cAMP-PKA-pCREB信號通路的激活促進損傷軸突再生參與了腦缺血后的神經(jīng)功能的自然恢復，同時也是康復治療促進腦缺血后大鼠神經(jīng)功能恢復的可能機制之一。
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重慶醫(yī)科大學碩士研究生學位論文21圖1 各組大鼠不同時間點的運動功能評分比較Fig.1 Comparision of the scores of motor function test in each group at different time points.2 指標檢測結果2.1 實驗性大鼠腦組織 cAMP、總 PKA 的含量變化不同時間點各組大鼠腦組織內(nèi)cAMP含量的結果見表2、圖2，總PKA含量的結果見表3、圖3�？祻陀柧毥M的大鼠腦組織內(nèi)cAMP、總PKA含量明顯高于自然恢復組，結合大鼠的運動功能評分結果，提示康復訓練促進腦缺血后大鼠的運動功能恢復與腦組織內(nèi)cAMP、總PKA含量的增加有關；側腦室給予PKA抑制劑Rp-cAMP后，自然恢復組的大鼠腦組織內(nèi)總PKA含量的表達明顯減少，同時也抑制了康復訓練對腦缺血后腦組織內(nèi)總PKA含量的促進作用，結合運動功能評價結果提示cAMP-PKA信號通路參與了康復訓練促進腦缺血后大鼠運動功能的恢復過程。

▲P＜0.05圖2 各組大鼠不同時間點的腦組織內(nèi)cAMP含量的變化趨勢圖Fig.2 The concentration of cAMP in the rats at different time points.表3 各組大鼠不同時間點的腦組織內(nèi)總PKA含量變化注：與自然恢復組比較，* P＜0.05，與康復訓練組比較，▲P＜0.05分組例 數(shù)（只）cAMP（nmol/100 mg）術后2 d 術后7 d 術后14 d 術后21 d假手術組 12 46.48±2.10 45.82±1.87 45
【學位授予單位】：重慶醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R743.3

【參考文獻】

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1 牛陵川;李長清;陳艷;劉圣山;黃瑩;;雙丁酸環(huán)腺苷酸促進腦缺血再灌注大鼠軸突再生和運動功能恢復[J];中國老年學雜志;2009年07期

2 張燕虹;李長清;牛陵川;;康復訓練對腦缺血大鼠運動功能恢復和腦組織cAMP-PKA信號通路的影響[J];中國實驗動物學報;2013年06期

本文編號：2551080