【摘要】：目的 研究腫瘤微環(huán)境對骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(bone mesenchymal stem cells, BMSCs)分化的影響,明確骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在腫瘤微環(huán)境中是否受到其中的細(xì)胞因子、信號分子的影響而自身發(fā)生分化,探討與膠質(zhì)瘤細(xì)胞間接共培養(yǎng)誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向內(nèi)皮細(xì)胞分化的可能性,從而進(jìn)一步揭示惡性膠質(zhì)瘤血管形成機(jī)制中內(nèi)皮細(xì)胞來源和惡性膠質(zhì)瘤細(xì)胞分泌的細(xì)胞因子對間充質(zhì)干細(xì)胞分化為內(nèi)皮細(xì)胞的影響,豐富腫瘤局部微循環(huán)建立模式的相關(guān)理論。 方法 取2-3周齡SD大鼠,通過全骨髓差速貼壁法獲得原代BMSCs,傳代純化擴(kuò)增,MTT法繪制第3代和第4代BMSCs的生長曲線。通過倒置相差光學(xué)顯微鏡觀察細(xì)胞光鏡下形態(tài),并通過流式細(xì)胞儀檢鋇BMSCs細(xì)胞表面抗原CD44. CD90、CD34和CD45進(jìn)行細(xì)胞表型鑒定。C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞采用與BMSCs相同的培養(yǎng)基進(jìn)行培養(yǎng)。 C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞對BMCS誘導(dǎo)實(shí)驗(yàn),根據(jù)誘導(dǎo)時(shí)間不同分成3組：(1)7d共培養(yǎng)組：7d誘導(dǎo)組以C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞以2×105／孔的密度接種于1answell小室上層,下層以2×105/孔的密度接種第4代BMSCs,;7d對照組transwell小室上層下層均以2×105/孔的密度接種第4代BMSCs, BMSCs接種于預(yù)先置有蓋玻片的下層六孔培養(yǎng)板中,每隔3天換液一次。(2)14d共培養(yǎng)組：14d誘導(dǎo)組以C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞以1×105/孔的密度接種于transwell小室上層,下層以1×105/孔的密度接種第4代BMSCs;14d對照組transwell小室上層下層均以1×105／孔的密度接種第4代BMSCs, BMSCs接種于預(yù)先置有蓋玻片的下層六孔培養(yǎng)板中,每隔3天換液一次。(3)21d共培養(yǎng)組：21d誘導(dǎo)組以C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞以5×104/孔的密度接種于1transwell小室上層,下層以5×104/孔的密度接種第4代BMSCs;21d對照組transwell小室上層下層均以5×104/孔的密度接種第4代BMSCs, BMSCs接種于預(yù)先置有蓋玻片的下層六孔培養(yǎng)板中,每隔3天換液一次。共培養(yǎng)結(jié)束后分別取出載玻片,用免疫組織化學(xué)檢測共培養(yǎng)后BMSCs中血管性血友病因子(von Willebrand factor,vWF)、內(nèi)皮細(xì)胞特異性標(biāo)志抗原CD31的表達(dá)。 結(jié)果 1.體外成功獲得大鼠BMSCs,其細(xì)胞形態(tài)單一,呈梭形或扁平型,增殖至細(xì)胞融合時(shí)呈漩渦狀和放射狀排列,細(xì)胞生長曲線典型,細(xì)胞表面抗原鑒定CD44陽性(平均陽性率98.4%),CD90陽性(平均陽性率98.7%),CD34陰性(平均陽性率2.5%),CD45陰性(平均陽性率4.5%)。 2.與C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞共間接共培養(yǎng)后,BMSCs向內(nèi)皮細(xì)胞分化,免疫組織化學(xué)檢測結(jié)果顯示,與C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞間接觸共培養(yǎng),隨著誘導(dǎo)時(shí)間的增加,BMSCs表達(dá)vWF和CD31增多,BMSCs形態(tài)發(fā)生變化,向內(nèi)皮細(xì)胞分化。 結(jié)論 1.差速貼壁法體外成功獲得大鼠BMSCs,其細(xì)胞形態(tài)單一,呈梭形或扁平型,增殖至細(xì)胞融合時(shí)呈漩渦狀和放射狀排列,細(xì)胞生長曲線典型。 2.與C6膠質(zhì)瘤細(xì)胞間接共培養(yǎng)可誘導(dǎo)BMSCs向內(nèi)皮細(xì)胞分化,表現(xiàn)為BMSCs表達(dá)內(nèi)皮細(xì)胞特異性蛋白vWF和CD31表達(dá)的增多,和細(xì)胞形態(tài)的變化。
【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R739.41

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2546027