【摘要】：目的從信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)及細(xì)胞凋亡角度,研究亞低溫對(duì)大鼠腦缺血再灌注損傷(I/R)的腦保護(hù)作用及機(jī)制。方法 72只雄性健康SD大鼠,隨機(jī)分成假手術(shù)組(S組)、缺血再灌注組(IR組)、亞低溫組(M組),每組24只;三組缺血10 min后分別按再灌注12 h、24 h、48 h,再分為3個(gè)亞組,各亞組動(dòng)物均為8只。大鼠腦缺血再灌注損傷模型制作采用改良四血管阻滯法,免疫組化SP法動(dòng)態(tài)觀察各個(gè)時(shí)間點(diǎn)海馬CA1區(qū)caspase-3蛋白的變化;光鏡和電鏡分別觀察再灌注48 h亞組海馬CA1區(qū)神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)和線粒體超微結(jié)構(gòu)的改變。結(jié)果 (1)大鼠腦缺血再灌注損傷后12 h海馬CA1區(qū)caspase-3即有明顯表達(dá),24 h達(dá)高峰,48 h后仍有較高表達(dá);(2)IR組和M組各時(shí)間點(diǎn)caspase-3表達(dá)水平比S組明顯升高(P0.05);24 h亞組線粒體超微結(jié)構(gòu)和神經(jīng)細(xì)胞形態(tài)受損嚴(yán)重;(3)M組各個(gè)時(shí)間點(diǎn)caspase-3表達(dá)水平較IR組明顯下降(P0.05或P0.01);24 h亞組線粒體超微結(jié)構(gòu)和神經(jīng)元形態(tài)均有不同程度的改善。結(jié)論亞低溫對(duì)caspase-3依賴的線粒體凋亡通路有干預(yù)作用,通過(guò)維持線粒體膜穩(wěn)定,抑制釋放和激活caspase-3蛋白,保護(hù)線粒體的形態(tài)功能,從而減少神經(jīng)細(xì)胞凋亡的發(fā)生,發(fā)揮腦保護(hù)作用。
【圖文】：

圖1腦I/Ｒ后海馬caspase-3蛋白免疫組化結(jié)果(SP×400)Fig．1Expressionofcaspase-3athippocampusCA1regionafterI/Ｒ(SP×400)1A:Expressionofcaspase-3inS24hsubgroup1B:Expressionofcaspase-3inIＲ24hsubgroup1C:Expressionofcaspase-3inM24hsubgroup圖2腦I/Ｒ后24h海馬CA1區(qū)光鏡結(jié)果(H-E×400)Fig．2CellularmorphologyathippocampusCA1regionat24hoursafterI/Ｒunderthelightmicroscope(H-E×400)2A:S24hsubgroup2B:IＲ24hsubgroup2C:M24hsubgroup2．3透射電鏡觀察S組海馬CA1區(qū)的超微結(jié)構(gòu)基本正常:神經(jīng)細(xì)胞核大小形態(tài)正常，呈橢圓形，核膜光滑，可見(jiàn)清晰的核仁，胞質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)大量正常的線粒體，胞質(zhì)密度均勻，內(nèi)可見(jiàn)大量排列密雜的嵴和基質(zhì)，見(jiàn)圖3A。IＲ組:神經(jīng)細(xì)胞破壞嚴(yán)重，染色質(zhì)聚集濃縮，核仁碎裂和邊移，核膜破壞，完整性和連續(xù)性中斷。胞質(zhì)排列紊亂，密度不均，線粒體水腫明顯，部分呈空泡樣或燒瓶樣改變，其內(nèi)部基質(zhì)嵴斷裂和脫落，排列欠緊密。見(jiàn)圖3B。M組:較IＲ組受損明顯減輕，細(xì)胞有一定程度皺縮或腫脹，細(xì)胞核內(nèi)可見(jiàn)染色質(zhì)點(diǎn)狀凝集，細(xì)胞質(zhì)密度較均勻，核膜較平滑，未見(jiàn)核固縮，碎裂和溶解;線粒體仍有一定程度的水腫，大多數(shù)嵴完整，排列較緊密，未見(jiàn)明顯內(nèi)部基質(zhì)嵴斷裂和脫落，見(jiàn)圖3C。圖3腦I/Ｒ后24h海馬CA1區(qū)透射電鏡結(jié)果(×12000)(黑白)Fig．3CellularmorphologyathippocampusCA1regionat24hoursafterI/Ｒundertheelectronmicroscope(×12000)3A:S24hsubgroup3B:IＲ24hsubgroup3C:M24hsubgroup3討論近年來(lái)，大量實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，凋亡是腦I/Ｒ后神經(jīng)元細(xì)胞死亡的重要方式之一。大量研究同時(shí)也證實(shí)，在腦I/Ｒ過(guò)程中，半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)在caspase依賴的線粒體凋亡途徑中起著十分重要的作用［3］。在細(xì)胞

圖1腦I/Ｒ后海馬caspase-3蛋白免疫組化結(jié)果(SP×400)Fig．1Expressionofcaspase-3athippocampusCA1regionafterI/Ｒ(SP×400)1A:Expressionofcaspase-3inS24hsubgroup1B:Expressionofcaspase-3inIＲ24hsubgroup1C:Expressionofcaspase-3inM24hsubgroup圖2腦I/Ｒ后24h海馬CA1區(qū)光鏡結(jié)果(H-E×400)Fig．2CellularmorphologyathippocampusCA1regionat24hoursafterI/Ｒunderthelightmicroscope(H-E×400)2A:S24hsubgroup2B:IＲ24hsubgroup2C:M24hsubgroup2．3透射電鏡觀察S組海馬CA1區(qū)的超微結(jié)構(gòu)基本正常:神經(jīng)細(xì)胞核大小形態(tài)正常，呈橢圓形，核膜光滑，可見(jiàn)清晰的核仁，，胞質(zhì)內(nèi)可見(jiàn)大量正常的線粒體，胞質(zhì)密度均勻，內(nèi)可見(jiàn)大量排列密雜的嵴和基質(zhì)，見(jiàn)圖3A。IＲ組:神經(jīng)細(xì)胞破壞嚴(yán)重，染色質(zhì)聚集濃縮，核仁碎裂和邊移，核膜破壞，完整性和連續(xù)性中斷。胞質(zhì)排列紊亂，密度不均，線粒體水腫明顯，部分呈空泡樣或燒瓶樣改變，其內(nèi)部基質(zhì)嵴斷裂和脫落，排列欠緊密。見(jiàn)圖3B。M組:較IＲ組受損明顯減輕，細(xì)胞有一定程度皺縮或腫脹，細(xì)胞核內(nèi)可見(jiàn)染色質(zhì)點(diǎn)狀凝集，細(xì)胞質(zhì)密度較均勻，核膜較平滑，未見(jiàn)核固縮，碎裂和溶解;線粒體仍有一定程度的水腫，大多數(shù)嵴完整，排列較緊密，未見(jiàn)明顯內(nèi)部基質(zhì)嵴斷裂和脫落，見(jiàn)圖3C。圖3腦I/Ｒ后24h海馬CA1區(qū)透射電鏡結(jié)果(×12000)(黑白)Fig．3CellularmorphologyathippocampusCA1regionat24hoursafterI/Ｒundertheelectronmicroscope(×12000)3A:S24hsubgroup3B:IＲ24hsubgroup3C:M24hsubgroup3討論近年來(lái)，大量實(shí)驗(yàn)研究發(fā)現(xiàn)，凋亡是腦I/Ｒ后神經(jīng)元細(xì)胞死亡的重要方式之一。大量研究同時(shí)也證實(shí)，在腦I/Ｒ過(guò)程中，半胱氨酸蛋白酶-3(caspase-3)在caspase依賴的線粒體凋亡途徑中起著十分重要的作用［3］。在細(xì)胞
【作者單位】： 同濟(jì)大學(xué)附屬第十人民醫(yī)院急診醫(yī)學(xué)科;同濟(jì)大學(xué)附屬第十人民醫(yī)院護(hù)理部;
【分類號(hào)】：R741

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本文編號(hào)：2545998