【摘要】：目的：低氧預(yù)適應(yīng)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可以提高其移植后在靶組織的存活率。人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療缺血性腦卒中很大程度上是通過分泌一些因子促進(jìn)血管生成和神經(jīng)再生，但其機(jī)制尚未完全明確。本文的主要目的是探討低氧預(yù)適應(yīng)對老年人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)作用的影響，為其用于缺血性腦卒中治療臨床研究提供依據(jù)。 方法：采用全骨髓細(xì)胞貼壁法分離、培養(yǎng)50～70歲健康供者的骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞。倒置相差顯微鏡觀察細(xì)胞的形態(tài)學(xué)變化特征及增殖生長情況，取第3代細(xì)胞用于實(shí)驗(yàn)。用流式細(xì)胞儀檢測人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表面標(biāo)志物CD90、CD105、CD73和NBG。低氧環(huán)境構(gòu)建為94%N2、1%O2、5%CO2的三氣恒溫細(xì)胞培養(yǎng)箱。用胰酶細(xì)胞消化液（0.25%Trypsin-EDTA)消化后的第3代細(xì)胞以1×106/ml的密度接種到培養(yǎng)瓶，置于94%N2、1%O2、5%CO2的三氣恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)48h，以常氧（21%O2）培養(yǎng)作為對照。用Western blot法檢測細(xì)胞HIF-1α、VEGF、CXCR4、TLR4和NF-κB蛋白表達(dá)。ELISA法檢測細(xì)胞培養(yǎng)上清液中VEGF濃度。細(xì)胞免疫組化法檢測ki67表達(dá)陽性細(xì)胞率。 結(jié)果：體外分離、培養(yǎng)的老年人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞呈成纖維細(xì)胞樣梭形外觀，培養(yǎng)10～12天達(dá)80%融合，集落成旋渦狀。細(xì)胞表面抗原高表達(dá)CD90、CD105和CD73，而NBG表達(dá)陰性。低氧預(yù)適應(yīng)增強(qiáng)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞HIF-1α、VEGF、CXCR4、TLR4和NF-κB蛋白表達(dá)（P0.05）。ELISA法檢測結(jié)果顯示，與對照組相比，低氧預(yù)適應(yīng)組人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)上清液中VEGF濃度增高（P0.05）。低氧預(yù)適應(yīng)組與對照組均能檢測出ki67表達(dá)陽性細(xì)胞，陽性細(xì)胞數(shù)統(tǒng)計(jì)學(xué)無顯著差異（P0.05）。 結(jié)論：低氧預(yù)適應(yīng)可增強(qiáng)老年人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞HIF-1α、VEGF、CXCR4、TLR4和NF-κB蛋白表達(dá)和分泌VEGF。提示低氧預(yù)適應(yīng)可增強(qiáng)老年人自體骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療腦缺血效果。
【圖文】：

圖 1 老年人 BMSCs 原代培養(yǎng)（4 天，200×）Figure1 Aged human BMSCs growth in primary culture (4 d，200×）

圖 1 老年人 BMSCs 原代培養(yǎng)（4 天，200×）Figure1 Aged human BMSCs growth in primary culture (4 d，，200×）
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R743.3

【共引文獻(xiàn)】

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本文編號：2526803