發(fā)布時(shí)間：2019-05-17 18:48

【摘要】：背景蛛網(wǎng)膜下腔出血(subarachnoid hemorrhage,SAH)具有極高的致殘率及致死率,是一類在神經(jīng)外科中較為常見的出血性腦血管疾病。臨床發(fā)現(xiàn)大部分蛛網(wǎng)膜下腔出血導(dǎo)致的死亡都發(fā)生于72小時(shí)內(nèi),因此,有學(xué)者提出了“早期腦損傷”的概念,即蛛網(wǎng)膜下腔出血后72小時(shí)內(nèi),多因素造成整個(gè)腦組織的直接損傷,并認(rèn)為蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷可能是導(dǎo)致患者預(yù)后不良的主要原因。蛛網(wǎng)膜下腔出血后腦損傷涉及一系列病理生理過程,其中氧化應(yīng)激損傷在神經(jīng)細(xì)胞死亡、血-腦屏障破壞及其他腦損傷中具有重要作用。Sestrin2(Sesn2)是一種誘導(dǎo)型應(yīng)激蛋白,氧化應(yīng)激能誘導(dǎo)其表達(dá),通過抑制細(xì)胞內(nèi)活性氧生成而發(fā)揮抗氧化作用,已有文獻(xiàn)報(bào)道,Sesn2在神經(jīng)退行性疾病中具有神經(jīng)保護(hù)作用,我們前期研究也表明其在腦缺血再灌注損傷中具有一定的腦保護(hù)作用,但在蛛網(wǎng)膜下腔出血后誘發(fā)的早期腦損傷(early brain injury,EBI)中的作用機(jī)制仍然不太清楚。目的研究大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后誘發(fā)的早期腦損傷中,Sesn2是否具有腦保護(hù)作用。方法1.通過視交叉前池注射法來建立大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血(sah)的模型。2.構(gòu)建一條controlsirna及三條特異性sesn2sirna(sesn2-1、sesn2-2、sesn2-3),將sirna注射至大鼠左側(cè)側(cè)腦室,24小時(shí)后建立大鼠sah模型,用westernblot及real-timeqpcr方法檢測(cè)其干擾效率,篩選其中最有效的sesn2sirna干擾片段。3.將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分為假手術(shù)組(sham)、蛛網(wǎng)膜下腔出血組(sah)、scramblesirna+sah組、sesn2sirna+sah組。每組大鼠在sah后24小時(shí)處死。觀察干擾sesn2基因后,大鼠神經(jīng)功能損傷、腦水腫情況,測(cè)量腦組織evansblue含量評(píng)估血-腦屏障通透性,he染色觀察神經(jīng)元形態(tài)學(xué)改變,測(cè)定谷胱甘肽(gsh)和氧化型谷胱甘肽(gssg)濃度對(duì)氧化應(yīng)激損傷進(jìn)行評(píng)價(jià)。結(jié)果1.與sah組相比,三條特異性片段中sesn2-2干擾效果最佳,controlsirna無干擾效果。2.與sah組相比,干擾sesn2后,神經(jīng)功能損傷加重,腦組織水含量明顯增多,血-腦屏障通透性明顯加強(qiáng),神經(jīng)元損傷加重,氧化應(yīng)激明顯增強(qiáng)。結(jié)論對(duì)sesn2進(jìn)行干擾后,可加重蛛網(wǎng)膜下腔出血后早期腦損傷,從而說明sesn2具有一定的腦保護(hù)作用。
[Abstract]:Background subarachnoid hemorrhage (subarachnoid hemorrhage,SAH) is a common hemorrhagic cerebrovascular disease in neurosurgery because of its high disability rate and mortality. It has been found that most of the deaths caused by subarachnoid hemorrhage occur within 72 hours. Therefore, some scholars have put forward the concept of "early brain injury", that is, within 72 hours after subarachnoid hemorrhage. Multiple factors cause the direct injury of the whole brain tissue, and it is considered that the early brain injury after subarachnoid hemorrhage may be the main cause of poor prognosis. Brain injury after subarachnoid hemorrhage involves a series of pathophysiological processes, in which oxidative stress injury plays an important role in nerve cell death, blood-brain barrier destruction and other brain injuries. Sestrin 2 (Sesn2) is an induced stress protein. Oxidative stress can induce its expression and play an antioxidant role by inhibiting the production of reactive oxygen species in cells. It has been reported that Sesn2 plays a neuroprotective role in neurodegenerative diseases. Our previous studies have also shown that it has a certain cerebral protective effect in cerebral ischemia-reperfusion injury, but the mechanism of its role in early brain injury induced by subarachnoid hemorrhage (early brain injury,EBI) is still unclear. Objective to study whether Sesn2 has cerebral protective effect in early brain injury induced by subarachnoid hemorrhage in rats. Method 1. The (sah) model of subarachnoid hemorrhage in rats was established by injection of anterior optic chiasma cistern. 2. One controlsirna and three specific sesn2sirna (sesn2-1,sesn2-2,sesn2-3) were constructed and sirna was injected into the left lateral ventricle of rats. 24 hours later, the rat sah model was established. The interference efficiency was detected by westernblot and real-timeqpcr. Screening the most effective sesn2sirna interference fragments. 3. The experimental animals were randomly divided into (sham), subarachnoid hemorrhage group (sah), scramblesirna sah group and sesn2sirna sah group. The rats in each group were killed 24 hours after sah. After interfering with sesn2 gene, the nerve function injury and brain edema were observed, the evansblue content in brain tissue was measured to evaluate the permeability of blood-brain barrier, and the morphological changes of neurons were observed by he staining. The oxidative stress damage was evaluated by measuring the concentration of Glutathion (gsh) and oxidized Glutathion (gssg). Result 1. Compared with sah group, sesn2-2 interference effect was the best among the three specific fragments, and controlsirna had no interference effect. 2. Compared with sah group, after interfering with sesn2, the damage of nerve function was aggravated, the content of water in brain tissue was significantly increased, the permeability of blood-brain barrier was significantly enhanced, the damage of neurons was aggravated, and the oxidative stress was significantly enhanced. Conclusion interference with sesn2 can aggravate the early brain injury after subarachnoid hemorrhage, which indicates that sesn2 has certain cerebral protective effect.
【學(xué)位授予單位】：重慶醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R743.35

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