【摘要】：目的:膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最為常見(jiàn)的腫瘤之一,它的預(yù)后與腫瘤的侵襲有著密切的聯(lián)系。本研究通過(guò)探討ARK5和Gab2是否通過(guò)Gab2-Akt-ARK5信號(hào)通路促進(jìn)膠質(zhì)瘤的侵襲,為有效控制膠質(zhì)瘤的侵襲提供全新的治療靶點(diǎn)。材料和方法:收集濰坊醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院病理科2005年至2013年明確診斷為膠質(zhì)瘤的90例病例作為研究對(duì)象,其中低級(jí)別膠質(zhì)瘤(WHOⅠ、Ⅱ級(jí))42例,高級(jí)別膠質(zhì)瘤(WTOⅢ、Ⅳ級(jí))48例。所有患者臨床及病理資料均齊全并且術(shù)前均未接受放療、化療。1.應(yīng)用常規(guī)HE染色,光鏡下觀察結(jié)果,經(jīng)病理明確診斷。2.采用免疫組織化學(xué)染色SP法檢測(cè)90例膠質(zhì)瘤組織中ARK5和Gab2蛋白表達(dá),分析ARK5和Gab2蛋白在低級(jí)別膠質(zhì)瘤組與高級(jí)別膠質(zhì)瘤組的表達(dá)差異,同時(shí)分析ARK5和Gab2蛋白表達(dá)的相關(guān)性。3.選取膠質(zhì)瘤LN-229細(xì)胞進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),傳代2次后采用細(xì)胞轉(zhuǎn)染技術(shù)將ARK5目標(biāo)片段5'-GAAGTTATGCTTTATTCAC-3'的小RNA干擾質(zhì)粒、Gab2目標(biāo)片段5'-GTGAGAACGATGAGAAATA-3'的小RNA干擾質(zhì)粒和SCR序列的小RNA干擾質(zhì)粒轉(zhuǎn)入LN-229細(xì)胞內(nèi)。轉(zhuǎn)染后細(xì)胞株分別命名為siARK5/LN-229細(xì)胞(實(shí)驗(yàn)A組)、siGab2/LN-229細(xì)胞(實(shí)驗(yàn)G組)、siARK5siGab2/LN-229細(xì)胞(實(shí)驗(yàn)AG組)和SCR/LN-229細(xì)胞(對(duì)照組),并通過(guò)蛋白質(zhì)印跡法(Western blot)檢測(cè)上述各組中ARK5和Gab2蛋白的降表達(dá)情況。4.應(yīng)用Transwell細(xì)胞體外侵襲實(shí)驗(yàn)檢測(cè)實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組LN-229細(xì)胞侵襲能力。5.采用明膠酶譜實(shí)驗(yàn)檢測(cè)在類胰島素樣生長(zhǎng)因子-1(IGF-1)刺激下的實(shí)驗(yàn)組和對(duì)照組中金屬基質(zhì)蛋白酶MMP-2和MMP-9的活性。6.在IGF-1刺激下,再次采用Western blot檢測(cè)實(shí)驗(yàn)G組和對(duì)照組ARK5和Akt的磷酸化情況。結(jié)果:1.免疫組織化學(xué)結(jié)果顯示:高級(jí)別膠質(zhì)瘤組ARK5蛋白表達(dá)明顯高于低級(jí)別膠質(zhì)瘤組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.002,P0.05);高級(jí)別膠質(zhì)瘤組Gab2蛋白表達(dá)明顯高于低級(jí)別膠質(zhì)瘤組,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P=0.000,P0.05);90例膠質(zhì)瘤組織中ARK5和Gab2蛋白表達(dá)呈正相關(guān)(P=0.000,P0.05)。2.Transwell細(xì)胞體外侵襲實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)A組,G組和AG組細(xì)胞穿透基質(zhì)膜的細(xì)胞數(shù)目均明顯減少,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05,P0.05,P0.05),其中實(shí)驗(yàn)AG組細(xì)胞穿透基質(zhì)膜的細(xì)胞數(shù)目減少更為明顯。3.明膠酶譜結(jié)果顯示:與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)A組,G組和AG組MMP-2和MMP-9均表達(dá)下降。4.Western blot結(jié)果顯示:4.1與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)A組僅ARK5蛋白表達(dá)降低,實(shí)驗(yàn)G組僅Gab2蛋白表達(dá)降低,實(shí)驗(yàn)AG組ARK5和Gab2蛋白均表達(dá)降低;4.2與對(duì)照組相比,實(shí)驗(yàn)AG組Akt和ARK5的磷酸化水平減弱而Akt和ARK5蛋白總量不變。數(shù)據(jù)采用SPSS16.0軟件進(jìn)行相關(guān)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。免疫組織化學(xué)采用χ2檢驗(yàn),對(duì)ARK5和Gab2之間進(jìn)行Spearman相關(guān)分析。所有定量資料數(shù)據(jù)結(jié)果用平均值x±s表示。各組兩兩比較用t檢驗(yàn)。P0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。結(jié)論:1.膠質(zhì)瘤組織中ARK5和Gab2蛋白表達(dá)與膠質(zhì)瘤分級(jí)有關(guān)且ARK5和Gab2蛋白在膠質(zhì)瘤中的表達(dá)呈正相關(guān),提示ARK5和Gab2對(duì)膠質(zhì)瘤惡性程度的評(píng)估具有一定的指導(dǎo)意義。2.小RNA干擾降低ARK5和Gab2表達(dá)后,能使膠質(zhì)瘤LN-229細(xì)胞侵襲能力降低,也能使膠質(zhì)瘤LN-229細(xì)胞中MMP2和MMP9的表達(dá)降低,提示ARK5和Gab2可促進(jìn)膠質(zhì)瘤的侵襲,可作為膠質(zhì)瘤聯(lián)合靶向治療的生物學(xué)指標(biāo)。3.小RNA干擾降低Gab2表達(dá)后,可使膠質(zhì)瘤LN-229細(xì)胞Akt和ARK5的磷酸化水平受到抑制,提示Gab2在信號(hào)通路中位于Akt和ARK5的上游且ARK5和Gab2可通過(guò)Gab2-Akt-ARK5信號(hào)通路促進(jìn)膠質(zhì)瘤侵襲。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：濰坊醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號(hào)】：R739.41

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本文編號(hào)：2427881