發(fā)布時間：2019-01-10 09:16

【摘要】：膠質(zhì)瘤代表了人類腦部腫瘤中最具侵襲性,最致命的一類惡性腫瘤,起源于腦組織和脊髓,發(fā)生于神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞,約占中樞神經(jīng)系統(tǒng)腫瘤的40%。近年來,膠質(zhì)瘤的臨床治療主要依靠手術(shù)的切除,并結(jié)合放療和／或化療的聯(lián)合療法,但由于其呈浸潤性生長,具有高度侵襲性和富集血管性的特點(diǎn),決定了膠質(zhì)瘤手術(shù)不能完全切除,其術(shù)后復(fù)發(fā)率高,五年存活率仍舊不理想。因此,進(jìn)一步探究神經(jīng)膠質(zhì)瘤的發(fā)病機(jī)制,尋找新的診斷和治療方法顯得尤為重要。 微小RNAs (MicroRNAs, miRNAs)是一類長度約18-24個核苷的小的、非編碼RNA分子,可以在植物和動物中被發(fā)現(xiàn),在進(jìn)化上高度保守,通過與靶基因nRNA3'-UTR區(qū)域配對調(diào)控基因的表達(dá),調(diào)節(jié)細(xì)胞分化、凋亡、細(xì)胞周期、增殖和分裂等生理病理過程。MiRNAs在多種腫瘤中出現(xiàn)特征性的表達(dá)種類和量的變化,在腫瘤發(fā)生發(fā)展中扮演著癌基因或者抑癌基因的角色,并且以miRNAs為基礎(chǔ)治療的方法已經(jīng)得到越來越多的關(guān)注。 我們收集了6例正常腦組織和2/3/4級膠質(zhì)瘤組織各8例,共30例臨床組織標(biāo)本,檢測發(fā)現(xiàn)在腦膠質(zhì)瘤組織中,miR-124的表達(dá)顯著低于正常腦組織,與其他報(bào)道結(jié)果一致,并且miR-124表達(dá)水平的高低與膠質(zhì)瘤臨床分級密切相關(guān),提示miR-124在膠質(zhì)瘤中起著重要的作用。同時,我們還構(gòu)建了過表達(dá)miR-124的膠質(zhì)瘤穩(wěn)定細(xì)胞株,分別在分子水平和動物水平上研究miR-124的生物學(xué)功能。我們發(fā)現(xiàn),在膠質(zhì)瘤細(xì)胞系中,過表達(dá)miR-124可以顯著抑制細(xì)胞增長速率和細(xì)胞侵襲能力,并且可以在裸鼠體內(nèi)成瘤實(shí)驗(yàn)中抑制腫瘤的生長和腫瘤新的血管生成。為了進(jìn)一步研究其潛在的分子機(jī)制,我們通過生物信息學(xué)軟件預(yù)測和報(bào)告基因檢測發(fā)現(xiàn)miR-124可直接靶向R-RAS和N-RAS。R-RAS和N-RAS是參與細(xì)胞信號轉(zhuǎn)導(dǎo)的致癌基因,它們的激活可影響下游PI3K/AKT和RAF/ERK1/2兩條關(guān)于腫瘤生長和新的血管生成的重要信號通路。我們發(fā)現(xiàn)miR-124可通過降低R-RAS和N-RAS的蛋白水平,并通過下游信號通路下調(diào)HIF-1a及VEGF的表達(dá),抑制腫瘤生長及腫瘤新的血管生成。我們還發(fā)現(xiàn),與正常腦組織相比,R-RAS和N-RAS在膠質(zhì)瘤臨床標(biāo)本中表達(dá)上調(diào),并且和miR-124的表達(dá)水平呈負(fù)相關(guān)。 綜上所述,miR-124可通過直接靶向調(diào)節(jié)R-RAS和N-RAS,影響其下游信號的表達(dá),從而抑制膠質(zhì)瘤的生長及新的血管生成。MiR-124在體內(nèi)和體外都能抑制膠質(zhì)瘤的發(fā)生發(fā)展,并且miR-124及其靶基因R-RAS/N-RAS與膠質(zhì)瘤的發(fā)展進(jìn)程密切相關(guān)。通過研究,我們發(fā)現(xiàn)了miR-124的兩個新的作用靶點(diǎn),闡明了miR-124通過其靶點(diǎn)抑制膠質(zhì)瘤生長的作用及其分子機(jī)制,為膠質(zhì)瘤診斷及預(yù)后的miRNAs應(yīng)用提供了新的理論依據(jù),并為今后開發(fā)以niRNAs為基礎(chǔ)的治療藥物提供了新的理論支持。
[Abstract]:Gliomas represent the most aggressive and fatal type of malignant tumors in the human brain, originating in the brain and spinal cord and occurring in glial cells, accounting for about 40 percent of the tumors in the central nervous system. In recent years, the clinical treatment of glioma mainly depends on surgical resection, combined with radiotherapy and / or chemotherapy. However, because of its invasive growth, glioma has the characteristics of highly invasive and vascular enrichment. It is determined that glioma surgery can not be completely resected, its recurrence rate is high, five-year survival rate is still unsatisfactory. Therefore, it is very important to explore the pathogenesis of glioma and find new methods of diagnosis and treatment. Tiny RNAs (MicroRNAs, miRNAs) are a class of small, non-encoded RNA molecules with a length of about 18-24 nucleosides that can be found in plants and animals and are highly conserved in evolution, regulating the expression of genes by pairing with the nRNA3'-UTR region of the target gene. Regulation of cell differentiation, apoptosis, cell cycle, proliferation and mitosis, and other physiological and pathological processes. MiRNAs in a variety of tumors have a characteristic variety of expression and quantity changes, and play the role of oncogene or tumor suppressor gene in tumorigenesis and development. And more attention has been paid to the treatment based on miRNAs. We collected 6 cases of normal brain tissue and 8 cases of grade glioma in 2-3-4, 30 clinical tissue specimens were collected. We found that the expression of miR-124 in glioma tissue was significantly lower than that in normal brain tissue, which was consistent with other reported results. The level of miR-124 expression is closely related to the clinical grade of glioma, suggesting that miR-124 plays an important role in glioma. At the same time, we also constructed a stable glioma cell line with overexpression of miR-124 to study the biological function of miR-124 at the molecular level and animal level, respectively. We found that overexpression of miR-124 could significantly inhibit cell growth and cell invasion in glioma cell lines, and inhibit tumor growth and tumor angiogenesis in nude mice. In order to further study its potential molecular mechanism, we found that miR-124 can directly target R-RAS, N-RAS.R-RAS and N-RAS as the oncogenes involved in cell signal transduction through bioinformatics software prediction and report gene detection. Their activation may affect downstream PI3K/AKT and RAF/ERK1/2 signaling pathways related to tumor growth and new angiogenesis. We found that miR-124 can inhibit tumor growth and tumor angiogenesis by decreasing the protein levels of R-RAS and N-RAS and down-regulating the expression of HIF-1a and VEGF through downstream signaling pathway. We also found that the expression of R-RAS and N-RAS was up-regulated in clinical specimens of glioma compared with normal brain tissue and negatively correlated with the expression of miR-124. In conclusion, miR-124 can inhibit the growth and angiogenesis of gliomas by directly targeting the expression of R-RAS and N-RAS. MiR-124 can inhibit the occurrence and development of gliomas in vivo and in vitro. MiR-124 and its target gene R-RAS/N-RAS are closely related to the development of glioma. We have found two new targets of miR-124, elucidated the role of miR-124 in inhibiting glioma growth and its molecular mechanism, and provided a new theoretical basis for miRNAs application in glioma diagnosis and prognosis. It provides new theoretical support for the development of niRNAs-based drugs in the future.
【學(xué)位授予單位】：南京醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R739.41

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本文編號：2406148