【摘要】：研究背景 全球每年約有7%的普通人群飽受慢性疼痛的折磨，嚴重影響著患者的生活質(zhì)量。但由于對慢性疼痛的具體發(fā)生發(fā)展機制迄今仍未完全闡明，因此導致對其的臨床治療也缺乏突破。近年來，越來越多的研究發(fā)現(xiàn)脊髓背角的星形膠質(zhì)細胞和小膠質(zhì)細胞活化及炎性因子的釋放都與慢性疼痛的發(fā)生和發(fā)展有著密切的關(guān)系。因此以膠質(zhì)細胞活化和炎性反應為研究慢性疼痛的新靶點，可能為臨床提供更多更有效的治療方法和新的治藥物。 當外周神經(jīng)受到損傷后，神經(jīng)膠質(zhì)細胞可以通過釋放TNF-等炎性因子，改變神經(jīng)遞質(zhì)清除能力，促進痛覺信息的異常放大，，形成痛覺敏化，通過抑制膠質(zhì)細胞的活化，減少促炎因子的釋放則疼痛得到抑制。有研究證實，使用TNF-的中和抗體或者受體的拮抗劑可以緩解神經(jīng)損傷誘導的慢性疼痛，沙利度胺(Thalidomide, Tha)就是其中之一種。 Tha是一種谷氨酸衍生物，具有很好的抗炎和免疫調(diào)節(jié)作用。有研究表明，Tha可以選擇性地抑制單核巨噬細胞分泌TNF-，同時促進TNF-的降解而發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用。最近的動物實驗研究結(jié)論已經(jīng)證實了Tha可以緩解外周神經(jīng)系統(tǒng)損傷所導致的慢性疼痛，然而，其參與慢性疼痛的鎮(zhèn)痛機制尚不完全清楚。 綜上，本課題以Tha為工具藥，研究其對兩種慢性疼痛即神經(jīng)病理性痛和炎性痛是否有鎮(zhèn)痛作用、發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用的方式、預防和治療的時間窗以及其發(fā)揮鎮(zhèn)痛作用的膠質(zhì)細胞和炎性因子相關(guān)機制，為進一步闡明慢性疼痛的相關(guān)發(fā)生機制和臨床治療慢性疼痛提供理論依據(jù)。 研究方法 本課題分別通過實驗大鼠脊神經(jīng)結(jié)扎和足底注射福爾馬林的方法制作神經(jīng)病理性痛和炎性疼痛動物模型；通過行為藥理學方法觀察實驗動物的熱痛敏反應潛伏期和機械性痛覺異常反應潛伏期；并通過免疫熒光化學和Western Blot蛋白定量方法觀察脊髓背角相關(guān)細胞和分子在慢性疼痛過程中的變化，分別在整體動物、細胞以及分子水平研究和觀察Tha對慢性痛發(fā)生發(fā)展的作用。 研究結(jié)果 第一部分研究內(nèi)容觀察到：（1）在SNL模型建立前即腹腔給予Tha（20mg/kg）預處理后，能明顯的抑制由SNL介導的大鼠機械性痛；（2）在SNL模型建立后第3、5、7、14d分別Tha（20mg/kg）干預能顯著提高大鼠的機械性縮足閾值；（3）在坐骨神經(jīng)結(jié)扎（Spinal nerve ligation, SNL）模型建立后不同時間點（0、3、7、14d）大鼠手術(shù)側(cè)脊髓背角的GFAP和Iba1比假手術(shù)組表達量明顯增多，但各時間點腹腔給予Tha（20mg/kg）膠質(zhì)原纖維酸性蛋白（GFAP）和離子鈣結(jié)合銜接分子1（Iba1）表達量減少；（4）Western blot結(jié)果顯示SNL所致的神經(jīng)病理性疼痛大鼠脊髓背角腫瘤壞死因子-（TNF-）分子在術(shù)后3～14d表達增多，然而給予Tha干預后，表達量則明顯減少。 第二部分研究內(nèi)容觀察到：（1）大鼠足底皮下注射5%福爾馬林50μl后，能引起典型的雙時相（phaseⅠ、phase Ⅱ）自發(fā)痛行為，第一時相是福爾馬林注射后直接由機械性刺激損傷組織而引起的急性疼痛，隨后會出現(xiàn)一個持續(xù)超過40min慢反應過程稱第二時相，是由注射的福爾馬林引起的炎癥反應而導致的持續(xù)疼痛；（2）模型建立前2h經(jīng)灌胃給予布洛芬（20mg/kg）和不同劑量的Tha（10、20、30mg/kg）干預后能夠明顯的抑制福爾馬林介導的大鼠第一時相和第二時相的痛行為，布洛芬與各沙利度胺治療組之間沒有明顯區(qū)別；（3）福爾馬林注射組的脊髓背角內(nèi)，Iba1陽性小膠質(zhì)細胞、P物質(zhì)（SP）陽性終末以及FOS蛋白的表達量均增多，而給予不同劑量（10、20、30mg/kg）的Tha處理組與0.9%生理鹽水治療對照組相比表達量呈明顯的下降趨勢；（4）福爾馬林注射組大鼠中腦導水管周圍灰質(zhì)(Periaqueductalgray，PAG)腹外側(cè)區(qū)、前扣帶回皮質(zhì)（Anterior cingulate cortex，ACC）、島葉皮質(zhì)（Insular cortex，IC）、前額葉皮質(zhì)（Prefrontal cortex，PFC）等區(qū)域，均有大量的FOS陽性神經(jīng)元表達，然而沙利度胺（20mg/kg）治療組同一區(qū)域內(nèi)的FOS陽性神經(jīng)元數(shù)量明顯下降；（5）正常對照組的Ibal陽性小膠質(zhì)細胞為靜息狀態(tài)，主要呈細長、分枝狀的細胞，LPS+生理鹽水組的Ibal陽性小膠質(zhì)細胞為激活狀態(tài)，細胞體積增大、變?yōu)閳A形，甚至呈阿米巴樣的細胞，而Tha干預可以減輕LPS刺激對小膠質(zhì)細胞形態(tài)的影響，使激活狀態(tài)的細胞數(shù)量明顯減少；（6）LPS+生理鹽水組的GFAP陽性細胞較正常對照組相比，細胞胞體變大，突起回縮；而Tha干預可以減輕LPS刺激對星形膠質(zhì)細胞形態(tài)的影響；（7）與正常對照組相比，LPS+生理鹽水組TNF-、白介素-1β（IL-1β）、白介素-6（IL-6）和白介素-10（IL-10）的表達明顯增多，而Tha干預可以降低TNF-、IL-1β、和IL-6的表達量，但對IL-10的表達卻沒有明顯影響。 小結(jié) 本研究通過動物模型模擬了臨床常見的兩種慢性疼痛，即神經(jīng)病理性痛和炎性痛，兩者的發(fā)生機制都有膠質(zhì)細胞及其相關(guān)的細胞因子引起的神經(jīng)免疫應答反應參與其中。應用Tha可以預防和緩解上述兩種慢性疼痛，同時抑制膠質(zhì)細胞激活，還可以下調(diào)神經(jīng)免疫應答反應。這些研究結(jié)論為臨床治療慢性疼痛提供了新的理論依據(jù)和治療策略。
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【學位授予單位】：第四軍醫(yī)大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2014
【分類號】：R741

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 ;Effects of thalidomide on angiogenesis and tumor growth and metastasis of human hepatocellular carcinoma in nude mice[J];World Journal of Gastroenterology;2005年02期

本文編號：2400333