【摘要】：第一部分縫隙連接蛋白、不對稱二甲基精氨酸與腦血管痙攣關(guān)系的研究 目的：建立大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血模型,觀測大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血后基底動脈縫隙連接蛋白、腦脊液中不對稱二甲基精氨酸(ADMA)和基底動脈直徑的變化,并應(yīng)用縫隙連接阻斷劑18p-甘草次酸進行干預(yù)。研究縫隙連接蛋白和不對稱二甲基的變化規(guī)律及它們與基底動脈直徑變化的相關(guān)性,初步探討縫隙連接蛋白和、不對稱二甲基精氨酸在腦血管痙攣中發(fā)揮作用的機制。 方法：120只Sprague-Dawley大鼠,分為對照組、假手術(shù)組、實驗組和干預(yù)組。視交叉前池二次注血法建立Sprague-Dawley大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血模型。在第1、3、5、7和14天(d)五個時間點,使用Kaoutzanis評分法對大鼠神經(jīng)行為學(xué)進行評分,壓力肌動儀測量基底動脈直徑,免疫印跡法檢測基底動脈Cx37、Cx40、Cx43和Cx45的表達(dá),酶聯(lián)免疫吸附法檢測腦脊液中ADMA的含量。將實驗組數(shù)據(jù)與對照組和假手術(shù)組進行對比,總結(jié)各指標(biāo)的時相性變化規(guī)律。大鼠腹腔注射縫隙連接抑制劑18β-甘草次酸干預(yù)后,觀察上述指標(biāo)的變化情況。使用Pearson檢驗對縫隙連接蛋白和直徑進行相關(guān)性分析,縫隙連接蛋白和ADMA進行相關(guān)性分析。 結(jié)果：實驗組大鼠神經(jīng)行為學(xué)評分在第3、5、7和14d明顯下降；在建模后第1d大鼠基底動脈直徑就明顯下降,在第3、5、7和14d下降趨勢更為明顯,第7d達(dá)最低。Cx37蛋白未檢測到；第1d Cx40無明顯變化,在第3、5、7和14d明顯下降,第7d最低。Cx43和Cx45在所有時間點都明顯增高,峰值出現(xiàn)在7d。在建模后所有時間點ADMA都明顯增高,也是第7天最高。在干預(yù)組,上述指標(biāo)的變化都在不同程度上有所抑制。Cx40與基底動脈直徑呈正相關(guān),Cx43和Cx45都與基底動脈直徑呈負(fù)相關(guān)。 結(jié)論：縫隙連接蛋白Cx40、Cx43和Cx45參與了SAH后的腦血管痙攣。18β-GA可以通過抑制縫隙連接蛋白減輕血管痙攣。ADMA也參與SAH后的腦血管痙攣,ADMA引起血管痙攣的機制有可能與其改變基底動脈Cx43的表達(dá)有關(guān)。 第二部分蛛網(wǎng)膜下腔出血后微動脈膜電位時相性變化規(guī)律的研究 目的：蛛網(wǎng)膜下腔出后顱內(nèi)微動脈(基底動脈分支)膜電位和膜電導(dǎo)的時相性變化,探討SAH后微動脈的電生理特性,為微循環(huán)障礙和微血栓形成的研究提供前期基礎(chǔ)。 方法：120只Sprague-Dawley大鼠,分為對照組、假手術(shù)組、實驗組和干預(yù)組。視交叉前池二次注血法建立Sprague-Dawley大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血模型。在第1、3、5、7和14天(d)五個時間點,使用壓力肌動儀測量基底動脈直徑,全細(xì)胞膜片鉗技術(shù)測量記錄微動脈膜電位和膜電導(dǎo)。將實驗組數(shù)據(jù)與對照組和假手術(shù)組進行對比,總結(jié)各指標(biāo)的時相性變化規(guī)律。大鼠腹腔注射縫隙連接抑制劑18p-甘草次酸干預(yù)后,觀察上述指標(biāo)的變化情況。Pearson檢驗對微動脈膜電位和基底動脈直徑進行相關(guān)性分析。 結(jié)果：在建模后第1d大鼠基底動脈直徑就明顯下降,在第3、5、7和14d下降趨勢更為明顯,第7d達(dá)最低。實驗組大鼠微動脈膜電位在第1d無明顯變化,第3、5和7d明顯上升,第7d達(dá)高峰,14d恢復(fù)正常;在建模后所有時間點SAH組的大鼠微動脈膜電導(dǎo)都顯著升高,第7天達(dá)高峰,14天開始下降。在干預(yù)組,上述指標(biāo)的變化都在不同程度上有所抑制。微動脈膜電位與基底動脈直徑呈負(fù)相關(guān)。 結(jié)論：SAH后,顱內(nèi)的微動脈和大動脈一樣也出現(xiàn)了痙攣,這種變化與平滑肌細(xì)胞膜的通透性變化有關(guān)。大血管的痙攣可能會導(dǎo)致微動脈的收縮。微動脈的電生理變化可以被縫隙連接阻斷劑18β-GA所抑制,可為臨床治療微血管痙攣提供參考。 第三部分內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的凋亡通路在蛛網(wǎng)膜下腔出血后神經(jīng)元細(xì)胞凋亡中作用的研究 目的：在大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血模型上觀測海馬區(qū)組織中GRP78和CHOP蛋白表達(dá),caspase-12mRNA和神經(jīng)元細(xì)胞凋亡的變化。論證內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的凋亡通路在SAH后神經(jīng)元細(xì)胞凋亡中發(fā)揮作用,初步探討caspase通路和CHOP通路在神經(jīng)元細(xì)胞凋亡中的作用機制。 方法：72只Sprague-Dawley大鼠,分為對照組、假手術(shù)組和實驗組。視交叉前池注血法建立Sprague-Dawley大鼠蛛網(wǎng)膜下腔出血模型。在第1、6、24、48和72小時(h)五個時間點,使用免疫印跡法檢測海馬區(qū)腦組織GRP78和CHOP蛋白表達(dá),Real Time-PCR技術(shù)檢測caspase-12mRNA的表達(dá),原位末端標(biāo)記法檢測凋亡細(xì)胞數(shù),電鏡觀察CA1區(qū)神經(jīng)元細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)。使用Pearson檢驗進行相關(guān)性分析。 結(jié)果：實驗組大鼠GRP78在第1、6、24、48和72h都明顯升高,24小時表達(dá)最高。建模后1h,CHOP就明顯升高在第6h、24h和48h升高趨勢更為明顯,峰值出現(xiàn)在24h。caspase-12mRNA在建模后1h、6h和24h明顯升高,峰值出現(xiàn)在24h。凋亡細(xì)胞數(shù)在出血后1小時無明顯變化,6h開始升高,24h達(dá)高峰,48小時仍高于正常,72小時恢復(fù)正常。電鏡觀察神經(jīng)元細(xì)胞見：1小時核內(nèi)異染質(zhì)增多,3小時核內(nèi)異染質(zhì)明顯增多,6小時組可見胞漿比例失調(diào),水腫明顯。24小時組可見處于凋亡時的改變,細(xì)胞核內(nèi)異染質(zhì)增多,核皺縮、變小,沿核膜可見齒狀突起,核內(nèi)異染質(zhì)增多,染色質(zhì)發(fā)生了質(zhì)的變化。48小時時間段組還可看到細(xì)胞處于缺血缺氧的改變,神經(jīng)元細(xì)胞明顯水腫,胞漿空殼。72小時可以看到明顯的內(nèi)質(zhì)網(wǎng)擴張。CA1區(qū)凋亡細(xì)胞數(shù)與GRP78、CHOP和caspase-12mRNA都呈正相關(guān)。 結(jié)論：在SAH后,顱內(nèi)神經(jīng)元細(xì)胞內(nèi)發(fā)生了未折疊蛋白反應(yīng)和內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激,繼而激活了內(nèi)質(zhì)網(wǎng)應(yīng)激誘導(dǎo)的凋亡途徑造成神經(jīng)元細(xì)胞凋亡。在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)誘導(dǎo)的凋亡途徑的常見三條通路中,CHOP通路和caspase通路參與了神經(jīng)元細(xì)胞凋亡。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：華中科技大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R743.35

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本文編號：2369254