發(fā)布時間：2018-11-17 15:53

【摘要】：背景肝細胞生長因子(Hepatocyte growth factor,HGF)是目前研究的比較熱門的一種獨立的促血管生成因子,近十余來年的研究表明,它有較強的促進血管的生長作用,但是又不會引起組織內(nèi)的細胞水腫以及血管腫脹,通透性增加,甚至人體低血壓等嚴(yán)重的現(xiàn)象,非常適用于中樞神經(jīng)系統(tǒng),而且其促成機體形成的血管大多數(shù)是動脈,但具體機制尚不明確[1]。目前Ad-HGF(Adenovirus-Hepatocyte growth factor)已進入臨床Ⅱ期心肌缺血以及骨骼肌缺血的治療,并且獲得諸多好評[2-3]。目前,與HGF關(guān)系比較密切并具有確切相互作用的是TGF-β1(Transforming Growth factor-β1)。TGF-β1也是一種目前研究的比較多的多效能的活性因子,并多與HGF共同研究,以確定其相互關(guān)系,以及在機體中的作用。TGF-β1的激活通道多,信號通路廣泛,其效果通常與上下通路相關(guān)的較多。因此,腦損傷后TGFβ1信號的生物學(xué)效應(yīng)可能受傷害類型和時間的影響。它具有多重生物學(xué)效應(yīng),其效果因細胞種類而變化。[4]我們前期臨床研究也發(fā)現(xiàn)HGF和TGF-β1之間存在動態(tài)互逆平衡關(guān)系,隨年齡增長和動脈硬化程度不同HGF、TGF-β1變化趨勢不同[5]。為闡明這些問題,本實驗通過將Ad-HGF注入增齡及老齡腦動脈粥樣硬化模型大鼠蛛網(wǎng)膜下腔后,研究HGF TGF-β1平衡與增齡和動脈粥樣硬化的關(guān)系。目的研究攜帶人肝細胞生長因子基因的重組腺病毒(Ad-HGF)注入增齡及老齡腦動脈粥樣硬化模型大鼠蛛網(wǎng)膜下腔后,HGF TGF-β1平衡與增齡和動脈粥樣硬化的關(guān)系。方法正常SD大鼠160只,其中增齡組(1月、6月、12月、1月Ad-HGF組、6月Ad-HGF組、12月Ad-HGF組)、造模組(模型組、模型Ad-HGF組)各20只,分別于第10d、20d、30d抽取腦脊液,用ELISA試劑盒測定HGF和TGF-β1的濃度;應(yīng)用WESTERN BLOT檢測各組大鼠不同時間腦組織HGF和TGF-β1的濃度。免疫組化法檢測腦組織中HGF、TGF-β1蛋白表達情況。結(jié)果1.在未注入Ad-HGF組大鼠腦脊液中均未檢測到HGF,注入Ad-HGF組均可在腦脊液中可檢測到HGF濃度。用統(tǒng)計學(xué)中的方差分析中的Dunnett’S T3法組間多重比較,未注入Ad-HGF組中抽取的腦脊液中的HGF濃度值均低于注入Ad-HGF組腦脊液,差異均有顯著性意義(P均0.05),且三個打入Ad-HGF年齡組中的腦脊液HGF濃度值隨年齡增加而降低,在腦脊液中的HGF濃度值未注入Ad-HGF三個年齡組組間比較差異無顯著性意義,注入Ad-HGF組組間比較差異無顯著性意義(P均0.05)。各組內(nèi)不同時間之間比較,經(jīng)one wayANOVA分析,HGF的濃度值在三個未注藥年齡組和未注藥模型組腦脊液隨時間變化無差異,三個注入Ad-HGF年齡組以及注藥的模型組中腦脊液HGF濃度值隨時間變化有差異,經(jīng)LSD法組間多重比較TGF-β1濃度隨時間增加而降低。2.用統(tǒng)計學(xué)中的方差分析中的Dunnett’S T3法進行組間的多重比較,注入Ad-HGF組的腦脊液中的TGF-β1濃度值均高于正常組和模型組,差異均有顯著性意義(P均0.05),注入Ad-HGF的三個年齡組腦脊液中的TGF-β1濃度值隨年齡增加而增加。各組內(nèi)不同時間之間比較,經(jīng)one wayANOVA分析,TGF-β1的濃度值在三個未注藥年齡組和未注藥模型組腦脊液隨時間變化無差異,三個注入Ad-HGF年齡組以及注藥的模型組中腦脊液TGF-β1濃度值隨時間變化有差異,經(jīng)LSD法組間多重比較TGF-β1濃度第20d組低于第10d和第30d組。3.三個未注藥年齡組和未注藥模型組大鼠腦組織中均只表達較少的HGF,注入Ad-HGF組,無論是三個年齡組或者模型組,腦組織均可見HGF表達增多,在同一時間點注入Ad-HGF的三個年齡組或者模型組組均較三個未注藥年齡組和未注藥模型組HGF OD值有明顯的增加。用統(tǒng)計學(xué)中的方差分析中的Dunnett’S T3法進行組間多重比較,三個打入Ad-HGF年齡組HGF OD值隨年齡增加而降低。在同一時間點經(jīng)LSD法組間多重比較,第20d組高于第10d和第30d組。4.三個未注藥年齡組大鼠腦組織中均只表達較少的TGF-β1,但在未注藥的模型組的大鼠的腦組織當(dāng)中TGF-β1的表達明顯增加。三個注入Ad-HGF年齡組及注入Ad-HGF的模型組,腦組織均可見TGF-β1表達減少。用統(tǒng)計學(xué)中的方差分析中的Dunnett’S T3法進行組間多重比較,三個未注藥年齡組以及三個注入Ad-HGF年齡組的TGF-β1的OD值均隨年齡的增加而逐漸增加。各組內(nèi)不同時間之間比較,經(jīng)one way ANOVA分析,未注藥的三個年齡組及模型組大鼠腦組織中TGF-β1的OD值隨時間變化無差異,注入Ad-HGF的三個年齡組及模型組的腦組織中TGF-β1 OD值隨時間變化有差異,經(jīng)LSD法組間多重比較,第20d組低于第10d和第30d組(P均0.05)。5.三個未注藥年齡組和未注藥模型組大鼠腦組織中均只表達較少的HGF,注入Ad-HGF組,無論是三個年齡組或者模型組,腦組織均可見HGF表達增多,在同一時間點打入Ad-HGF的三個年齡組或者模型組組均較三個未注藥年齡組和未注藥模型組HGF MOD值有明顯的增加。用統(tǒng)計學(xué)中的方差分析中的Dunnett’S T3法進行組間多重比較,三個注入Ad-HGF年齡組HGF MOD值隨年齡增加而降低。在同一時間點經(jīng)LSD法組間多重比較,第20d組高于第10d和第30d組。6.三個未注藥年齡組大鼠腦組織中均只表達較少的TGF-β1,但在未注藥的模型組的大鼠的腦組織當(dāng)中TGF-β1的表達明顯增加。三個注入Ad-HGF年齡組及注入Ad-HGF的模型組,腦組織均可見TGF-β1表達減少。用統(tǒng)計學(xué)中的方差分析中的Dunnett’S T3法進行組間多重比較,三個未注藥年齡組以及三個注入Ad-HGF年齡組的TGF-β1的MOD值均隨年齡的增加而逐漸增加。各組內(nèi)不同時間之間比較,經(jīng)one way ANOVA分析,未注藥的三個年齡組及模型組大鼠腦組織中TGF-β1的MOD值隨時間變化無差異,注入Ad-HGF的三個年齡組及模型組的腦組織中TGF-β1 MOD值隨時間變化有差異,經(jīng)LSD法組間多重比較,第20d組低于第10d和第30d組(P均0.05)。7.未注射Ad-HGF組腦脊液中未檢測到HGF,Ad-HGF組在不同時間均可檢測到人HGF。隨著年齡增長腦脊液及腦組織中HGF含量逐漸降低,TGF-β1含量逐漸增加。動脈硬化組腦脊液及腦組織比之非動脈硬化組,隨著動脈硬化程度增加,其HGF含量逐漸增加,TGF-β1含量逐漸降低(P0.05)。結(jié)論HGF、TGF-β1水平隨腦動脈硬化程度呈動態(tài)互逆平衡。HGF、TGF-β1水平隨年齡變化呈動態(tài)互逆平衡。
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【學(xué)位授予單位】：新鄉(xiāng)醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R743.3

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 申冠洋;宋志秀;常利;李彤;;肝細胞生長因子、TGF-β1與腦動脈粥樣硬化程度的關(guān)系[J];中國動脈硬化雜志;2014年03期

2 楊志華;趙曼;哈小琴;;肝細胞生長因子對中樞神經(jīng)系統(tǒng)保護作用的研究進展[J];神經(jīng)損傷與功能重建;2012年01期

3 李彤;袁彬;鄒飛;;轉(zhuǎn)化生長因子-β1對新生大鼠星形膠質(zhì)細胞結(jié)締組織生長因子表達的影響[J];鄭州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2008年01期

4 哈小琴,王瀾,吳彬,呂同德,勞妙芬,吳祖澤;攜帶人肝細胞生長因子基因重組腺病毒的構(gòu)建與制備[J];藥物生物技術(shù);2005年02期

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本文編號：2338364