本文選題：高壓氧 + 不同介入時間　； 參考：《河北醫(yī)科大學(xué)》2014年碩士論文

【摘要】：目的：高壓氧治療（Hyperbaric oxygen therapy，HBOT）定義為在超過1個標(biāo)準(zhǔn)大氣壓（Atmospheric pressure）的高氣壓艙內(nèi)，患者通過呼吸與艙內(nèi)壓力一致的純氧或混合氧，增加機體內(nèi)氧含量以達到治療疾病的物理治療方法。腦出血（Intracerebral hemorrhage，ICH）是指原發(fā)的非外界暴力引起的腦實質(zhì)內(nèi)的出血，在急性腦血管疾病的發(fā)病中約占20%-30%，發(fā)病后急性期內(nèi)的患者有較高的病死率約為30%-40%。手術(shù)減壓治療已成為公認(rèn)的挽救腦出血急性期患者生命的重要治療方法，但目前尚未證明任何藥物或手術(shù)治療對腦出血的患者有明確有效的治療效果。腦出血后發(fā)生的一連串由原發(fā)性損害及繼發(fā)性損害引起腦水腫，是腦出血后最主要的繼發(fā)性病理生理過程，常引起神經(jīng)損傷的再次惡化，導(dǎo)致死亡率增加，因此減輕腦水腫已成為臨床上治療腦出血的主要目標(biāo)。臨床及基礎(chǔ)研究顯示腦出血后介入高壓氧治療可減輕腦水腫，促進患者受損的神經(jīng)功能得到改善，但目前并無大量臨床及基礎(chǔ)研究數(shù)據(jù)的支持。 由四聚體結(jié)構(gòu)組成的水通道蛋白(Aquaporins，AQPs)是具有維持細胞內(nèi)外水平衡的一種轉(zhuǎn)運膜蛋白，其主要通過改變細胞膜對水分子通透能力發(fā)揮作用。在中樞神經(jīng)系統(tǒng)(Central nervous system，CNS)中水通道蛋白4主要分布在星形膠質(zhì)細胞和室管膜細胞的細胞膜上，其次它也大量表達在下丘腦的室旁核、視上核及口渴中樞所在的區(qū)域。研究發(fā)現(xiàn)，AQP4表達水平的升高，可以使血腦屏障對水分子的通透性增加，參與了因血腦屏障破壞而導(dǎo)致腦組織水腫產(chǎn)生的過程。有基礎(chǔ)研究顯示，高壓氧治療可以降低腦出血后的腦水腫的程度，可能與其降低出血灶周圍AQP4含量有關(guān)。 本課題組的前期研究顯示腦出血大鼠在2.0絕對大氣壓（Atmosphereabsolute，ATA）的壓力下行高壓氧治療的療效最好。本實驗的腦出血大鼠的模型采用膠原酶誘導(dǎo)法建立，高壓氧治療壓力采用2.0ATA，研究不同時間點介入高壓氧治療對腦水含量及AQP4變化的影響，探討腦出血后何時介入高壓氧治療效果最佳。 方法： 1動物分組：將185只Wista大鼠隨機分為正常組（Normal）5只、假手術(shù)組（Sham）60只、腦出血對照組（Control）60只和高壓氧治療組（HBO）60只。高壓氧治療組，按不同的高壓氧治療介入時間分為6h介入組（HBO+6h）、1d介入組（HBO+1d）、2d介入組（HBO+2d）和3d介入組（HBO+3d）4個亞組，每組15只，再按不同的治療次數(shù)分為高壓氧治療后1d、3d、5d組，每個時間點各5只，制模成功后按不同的介入時間放入高壓氧艙內(nèi)進行治療，高壓氧組進行吸氧治療，1次/d，各HBO治療組大鼠分別于高壓氧治療結(jié)束24小時后相應(yīng)時間點處死。假手術(shù)組、腦出血對照組分組與HBO治療組相同。正常組、假手術(shù)組和腦出血對照組不進行任何治療，與HBO治療組大鼠在相同時間點處死。 2大鼠腦出血模型的制備：選用大鼠尾殼核內(nèi)定位注射Ⅶ型膠原酶法造模型。 3神經(jīng)功能的評定：在大鼠腦出血模型制備6h后，采用LongaFZ評分法，對腦出血后的大鼠進行行為學(xué)評分：0分，無任何明顯體征；1分，不能完全伸展進針對側(cè)肢體（左側(cè)）；2分，進針對側(cè)肢體癱瘓，向進針對側(cè)轉(zhuǎn)圈，有追尾現(xiàn)象；3分，不能站立向進針對側(cè)傾倒；4分，有意識障礙。2分以上認(rèn)為造模成功。 4高壓氧治療：高壓氧治療組大鼠于術(shù)后6h評分確定造模成功后于相應(yīng)的介入時間進艙治療。將動物放置于特制的木箱中，木箱置于高壓氧艙內(nèi)，壓力設(shè)定在2.0ATA，30分鐘加壓時間,達到穩(wěn)壓前的5分鐘采用直排式給氧，氧流量設(shè)定為10L/min（穩(wěn)壓時氧濃度可達90%），穩(wěn)壓吸氧60分鐘，停止吸氧，開始減壓，速率約為0.01Mpa/min，1次/d。 5腦出血后出血灶周圍腦組織的水含量應(yīng)用干濕比重法檢測，血腫周圍腦組織中AQP4的表達量則利用免疫組織化學(xué)法檢測。 結(jié)果：出血灶周圍腦水含量測定的結(jié)果：各時間點的假手術(shù)組大鼠腦組織的水含量雖較正常組大鼠（73.49±0.89%）有升高的趨勢，但差異無明顯統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。而對照組和高壓氧治療組各時間點大鼠出血灶周圍腦組織水含量均高于正常組及假手術(shù)組大鼠腦水含量，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。對照組可觀察到腦出血后大鼠血腫周圍的腦組織水含量在腦出血后第1天開始升高，3天達到高峰，之后逐漸下降。高壓氧治療組各時間點腦水含量均較對照組各時間點減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。高壓氧治療組之間的比較：HBO+6h在高壓氧治療1d后，腦組織水含量明顯降低，且這種差異一直延續(xù)到高壓氧治療3d、5d后，，與HBO+1d、HBO+2d或HBO+3d比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）；HBO+1d在高壓氧治療1d后，腦組織水含量降低，并持續(xù)到高壓氧治療3d和5d后，與HBO+2d或HBO+3d比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）；但HBO+2d與HBO+3d比較腦組織水含量減輕不明顯（P＞0.05）。 2出血灶周圍AQP4表達的結(jié)果：假手術(shù)組大鼠腦組織中反映AQP4表達水平的OD值于各時間點雖較正常組大鼠（0.076±0.011）有升高趨勢，但差異無明顯統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。而對照組和高壓氧治療組各時間點大鼠出血灶周圍反映AQP4表達水平的OD值均高于正常組及假手術(shù)組，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。由對照組可觀察到腦出血后大鼠出血灶周圍腦組織中AQP4的含量在腦出血后1天開始升高，3天達到高峰，之后逐漸下降。高壓氧治療組各組大鼠出血灶周圍腦組織中AQP4的含量均較對照組減少，差異有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）。高壓氧治療組之間比較：HBO+6h在高壓氧治療1天后，AQP4表達明顯減少，且這種差異一直持續(xù)到高壓氧治療3d、5d后，與HBO+1d、HBO+2d或HBO+3d比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）；HBO+1d在高壓氧治療1天后，AQP4表達減少，并持續(xù)到高壓氧治療3d、5d后，與HBO+2d或HBO+3比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P0.05）；但HBO+2d與HBO+3d比較AQP4表達的減少不明顯，差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05）。 結(jié)論：通過尾殼核內(nèi)注入膠原酶法建立腦出血大鼠模型，觀察不同高壓氧介入治療時間對腦出血大鼠出血灶周圍腦組織水含量及AQP4表達水平的變化。驗證了腦出血后出血灶周圍腦水含量的變化與AQP4表達水平的變化相一致，同時說明高壓氧在腦出血的輔助治療中，特別是對腦出血后繼發(fā)性腦水腫的治療療效是肯定的，且早期介入高壓氧治療可明顯減輕腦水腫的程度，其機制可能與抑制了出血灶周圍AQP4的表達水平相關(guān)。
[Abstract]:Objective : Hyperbaric oxygen therapy ( HBOT ) is defined as the physical therapy for the treatment of cerebral hemorrhage .

Aquaporins ( AQPs ) , which are composed of tetrameric structures , are a kind of transport membrane protein which maintains the water balance inside and outside the cell . The water channel protein 4 in the central nervous system ( CNS ) is mainly distributed on the cell membrane of astrocytes and dymal cells .

The results showed that the effect of hyperbaric oxygen therapy on cerebral hemorrhage in rats with intracerebral hemorrhage was the best . The model of intracerebral hemorrhage rats was established by collagenase method . The effect of hyperbaric oxygen therapy on the contents of cerebral water and AQP4 was studied at different time points .

Method :

Group of HBO + 1d , HBO + 1d , HBO + 2d and HBO + 3d were divided into two groups : HBO + 6h , HBO + 1d , HBO + 2d and HBO + 3d .

2 . Preparation of rat model of intracerebral hemorrhage : A rat tail shell was used to locate the model of collagenase type VII injection .

( 3 ) Evaluation of neurological function : After 6 hours of rat intracerebral hemorrhage model , Longaz scoring method was used to score the behavioral score of rats following intracerebral hemorrhage : 0 , no obvious signs ;
1 minute , not fully extended into the contralateral limb ( left ) ;
2 points , the entry to the side limb paralysis , the forward to the side turn , has the tail phenomenon ;
3 points , unable to stand to the entrance to the side dumping ;
4 points , conscious obstacle . Above thought to be successful .

4 Hyperbaric oxygen therapy : After 6 hours after operation of hyperbaric oxygen therapy group , the rats were treated with the corresponding intervention time . The animals were placed in special wooden cases . The wooden cases were placed in the hyperbaric oxygen chamber . The pressure was set at 2.0ATA and 30 minutes . The pressure was set to 10L / min ( the oxygen concentration can reach 90 % when the pressure is regulated ) , the oxygen flow is regulated for 60 minutes , oxygen inhalation is stopped , the pressure is started , and the rate is about 0.01 Mpa / min and 1 time / d .

The water content of brain tissue surrounding the hemorrhage after intracerebral hemorrhage was detected by dry - wet specific gravity method . AQP4 expression in brain tissue around hematoma was detected by immunohistochemical method .

Results : The water content in brain tissue of rats in sham operation group was higher than that in normal group ( 73.49 鹵 0.89 % ) , but the difference was not statistically significant ( P > 0.05 ) .
HBO + 1d decreased in brain tissue after treatment with hyperbaric oxygen ( HBO + 1d ) and lasted for 3 days and 5 days after hyperbaric oxygen therapy ( P0.05 ) .
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本文編號：2002085