本文選題：帕金森病 + 經(jīng)顱超聲　； 參考：《第四軍醫(yī)大學(xué)》2017年博士論文

【摘要】：背景及目的帕金森病(Parkinson’s disease,PD)是主要累及中老年人一種的嚴重神經(jīng)退行性疾病,其主要的病理改變是中腦黑質(zhì)區(qū)(Substantia nigra,SN)多巴胺(Dopamine,DA)能神經(jīng)元進行性變性缺失。研究發(fā)現(xiàn)90%左右的PD患者SN區(qū)會出現(xiàn)特征性的黑質(zhì)區(qū)片狀高回聲信號(Substantia nigra hyperechogenicity,SNH)。本研究采用6-羥基多巴胺(6-hydroxydopamine,6-OHDA)制備大鼠PD模型,待成模后行經(jīng)顱超聲(Transcranial sonography,TCS)探查觀察該PD大鼠模型是否會出現(xiàn)SNH,之后取腦組織SN區(qū)冰凍切片進行特異性鐵染色及免疫熒光染色等方法,將病理染色結(jié)果與超聲圖像對照觀察來研究PD模型大鼠SNH的形成機制,為明確PD疾病的發(fā)生發(fā)展提供實驗基礎(chǔ)。方法1.偏側(cè)SN區(qū)立體定位注射神經(jīng)毒劑6-OHDA來制備PD大鼠模型,待成模后行TCS探查觀察PD模型大鼠SN區(qū)回聲表現(xiàn),之后取腦冰凍切片行免疫組化染色以及Western-Blot實驗檢測PD模型大鼠是否出現(xiàn)PD特征性病理改變,即SN區(qū)DA能神經(jīng)元變性壞死,驗證PD模型造模是否成功。2.將PD模型大鼠SN區(qū)冰凍切片進行特異性鐵染色,免疫熒光染色觀察PD模型大鼠SN區(qū)腦組織的病理改變,與獲得的超聲圖像對照觀察來研究SNH的形成機制。將PD模型大鼠SN區(qū)腦組織鐵含量進行測定來探討SNH的形成與鐵的關(guān)系。3.用鐵鰲合劑去鐵酮(Deferiprone,DFP)干預(yù)PD模型大鼠,DFP采取灌胃給藥。行TCS探查觀察DFP對PD模型大鼠SN區(qū)回聲信號的影響,之后進行SN區(qū)鐵含量測定、特異性鐵染色以及免疫熒光染色觀察DFP對PD模型大鼠SN區(qū)病理改變的影響。4.用小膠質(zhì)細胞增生抑制劑Nitidine干預(yù)PD模型大鼠,Nitidine采取腹腔注射給藥。行TCS探查觀察Nitidine對PD模型大鼠SN區(qū)回聲信號的影響,之后進行SN區(qū)鐵含量測定、特異性鐵染色觀察Nitidine對PD模型大鼠SN區(qū)鐵沉積的影響。結(jié)果1.PD模型組大鼠SN區(qū)存活的DA能神經(jīng)元數(shù)量為24±4%,顯著低于假手術(shù)組的97±2%(P0.01)。PD模型組大鼠SN區(qū)的DA能神經(jīng)元標志蛋白TH蛋白表達顯著減少(P0.01),以上結(jié)果說明6-OHDA誘導(dǎo)的PD大鼠模型建模成功。超聲探查PD模型組大鼠6-OHDA注射側(cè)SN區(qū)出現(xiàn)明顯的大面積片狀高回聲信號,面積為2.40±0.56 mm~2,假手術(shù)組大鼠SN區(qū)未出現(xiàn)明顯異�；芈�,僅有部分假手術(shù)組大鼠出現(xiàn)點條狀針道回聲(P0.01)。2.PD模型組大鼠高回聲出現(xiàn)的SN區(qū)域大量鐵離子沉積,且鐵離子沉積部位均伴隨大量細胞核聚集,假手術(shù)組大鼠的相應(yīng)位置未出現(xiàn)鐵離子沉積,細胞核的排列與周圍組織相比也無明顯不同。PD模型組大鼠SN區(qū)鐵含量為22.50±0.46 ng/mg,顯著高于假手術(shù)組同側(cè)SN區(qū)的鐵含量14.20±1.14 ng/mg(P0.05)。PD模型組大鼠SN區(qū)有大量小膠質(zhì)細胞和星形膠質(zhì)細胞增生。3.DFP干預(yù)組大鼠SN區(qū)出現(xiàn)小片狀或散點狀稍高回聲信號,面積為1.92±0.38mm~2,顯著小于PD模型組大鼠的2.92±0.92 mm~2(P0.05)。DFP干預(yù)組大鼠SN區(qū)鐵離子沉積及鐵含量顯著低于PD模型組大鼠(P0.05),且小膠質(zhì)細胞增生和星形膠質(zhì)細胞增生也顯著少于PD模型組大鼠(P0.05)。DFP干預(yù)組大鼠SN區(qū)的存活的DA能神經(jīng)元為59±19%,顯著高于PD模型組大鼠的21±5%(P0.01)。4.Nitidine干預(yù)組大鼠SN區(qū)出現(xiàn)了小片狀稍高回聲信號,面積為1.73±0.20mm~2,顯著小于PD組大鼠的2.46±0.40 mm~2(P0.05)。Nitidine干預(yù)組大鼠與PD模型組大鼠相比,鐵離子沉積顯著減少(P0.01),SN區(qū)鐵含量也顯著降低(P0.05)。結(jié)論鐵沉積、小膠質(zhì)細胞和星形膠質(zhì)細胞的增生都參與了PD模型大鼠SNH的形成。DFP可以顯著抑制SNH形成,染色實驗結(jié)果證實DFP抑制了SN區(qū)鐵離子沉積和兩種膠質(zhì)細胞的增生,進一步證實了SNH的形成與鐵沉積和兩種膠質(zhì)細胞增生相關(guān)。DFP通過排除鐵和抑制兩種膠質(zhì)細胞增生保護DA能神經(jīng)元,因此DFP有神經(jīng)保護作用。鐵沉積越多,SNH越大,SN區(qū)DA能神經(jīng)元壞死也越嚴重,提示鐵沉積和SNH面積與PD疾病的嚴重性可能相關(guān)。用小膠質(zhì)細胞增生抑制劑Nitidine干預(yù)PD模型大鼠后,SNH的面積減小,SN區(qū)鐵含量降低,鐵離子沉積也減少,說明SNH形成過程中沉積的鐵離子可能來源于小膠質(zhì)細胞。
[Abstract]:BACKGROUND & OBJECTIVE Parkinson ' s disease ( PD ) is a kind of severe neurodegenerative disease mainly involved in the middle - aged and old people . Its main pathological changes are the degeneration of dopaminergic neurons in the middle - aged and old people . In this study , we investigated the effect of SNH on the SN area of the PD model rats by using 6 - hydroxydopamine ( 6 - hydroxydopamine , 6 - ODA ) . The effect of the formation mechanism of SNH on the SN area of the PD model rats was investigated . The results showed that the number of neurons in SN area of PD model was 24 鹵 4 % , which was significantly lower than that in sham operation group . The results showed that DFP inhibited the deposition of iron ions and the proliferation of both glial cells in SN area , and confirmed that the formation of SNH was related to iron deposition and proliferation of two kinds of glial cells . DFP had neuroprotection . The more iron was deposited , the greater the SNH area , the greater the area of SNH and the severity of PD disease .

【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R742.5;R-332
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本文編號：1814575