本文選題：植酸 + 帕金森病�。� 參考：《青島大學(xué)》2016年碩士論文

【摘要】：目的:研究植酸(Phytic acid,PA)對1-甲基-4-苯基-1,2,3,6-四氫吡啶(MPTP)誘導(dǎo)的帕金森病人神經(jīng)母細(xì)胞瘤SH-SY5Y細(xì)胞模型中細(xì)胞活力、胞漿內(nèi)游離鈣離子濃度變化、多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白DAT含量、β-鏈蛋白(β-catenin)和糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)表達(dá)、突觸囊泡循環(huán)的影響。探討植酸通過Wnt/β-catenin信號通路和突觸囊泡循環(huán)作用對MPTP誘導(dǎo)的帕金森細(xì)胞模型多巴胺能神經(jīng)元的可能的保護(hù)作用機(jī)制。方法:通過體外培養(yǎng)SH-SY5Y細(xì)胞,經(jīng)PA預(yù)處理,MPTP誘導(dǎo)細(xì)胞建立帕金森病細(xì)胞模型,通過MTT比色法檢測細(xì)胞活性以分析PA的神經(jīng)保護(hù)作用,用鈣離子熒光探針Fura-2/AM測定PA對胞漿內(nèi)游離鈣離子濃度變化的影響,用蛋白質(zhì)免疫印跡法(Western blot)檢測多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白DAT的表達(dá),通過實時熒光定量PCR和細(xì)胞免疫熒光分析β-catenin和GSK-3β的表達(dá),用FM1-43探針通過突觸囊泡循環(huán)作用分析PA預(yù)處理對細(xì)胞的影響。結(jié)果:MTT結(jié)果表明,PA預(yù)處理能夠劑量依賴性的減弱MPTP誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡和細(xì)胞損傷;通過Fura-2/AM熒光探針檢測表明PA能夠減少MPTP誘導(dǎo)的胞內(nèi)游離鈣離子水平的增加;Western blot分析顯示,PA可以使多巴胺轉(zhuǎn)運蛋白(DAT)表達(dá)量顯著上調(diào);實時熒光定量PCR和細(xì)胞免疫熒光結(jié)果表明,PA能夠激活SH-SY5Y細(xì)胞內(nèi)Wnt/β-catenin信號通路的標(biāo)志物的表達(dá)水平。此外,通過FM1-43探針檢測表明,與MPTP誘導(dǎo)的熒光強(qiáng)度減弱相比,PA使標(biāo)記囊泡作用的熒光強(qiáng)度增強(qiáng),多巴胺能神經(jīng)元數(shù)量增多。結(jié)論:50、150、300?mol/L植酸能夠?qū)PTP誘導(dǎo)的多巴胺能神經(jīng)元損傷起到神經(jīng)保護(hù)作用,其機(jī)制可能與激活突觸囊泡循環(huán)和Wnt/β-catenin信號通路相關(guān)聯(lián)有關(guān),為PD的預(yù)防和治療開辟了新的方向。
[Abstract]:Objective: to study the effects of phytic acididopa on the cytoplasmic free calcium concentration and cell viability in Parkinson's neuroblastoma (SH-SY5Y) cells induced by 1-methyl-4-phenyl-1-trihydropyridine (MPTP).The content of dopamine transporter DAT, the expression of 尾 -catenin and glycogen synthase kinase 3 尾 -GSK-3 尾, and the effect of synaptic vesicle circulation.To investigate the possible protective mechanism of phytic acid on dopaminergic neurons induced by MPTP in Parkinson's cell model through Wnt/ 尾 -catenin signaling pathway and synaptic vesicle circulation.Methods: SH-SY5Y cells were cultured in vitro and induced by PA. The cell model of Parkinson's disease was established. The cell activity was measured by MTT colorimetry to analyze the neuroprotective effect of PA.The effect of PA on intracellular free calcium concentration was measured by Fura-2/AM and the expression of dopamine transporter DAT was detected by Western blotting.The expression of 尾 -catenin and GSK-3 尾 was analyzed by real-time fluorescence quantitative PCR and cellular immunofluorescence. The effect of PA pretreatment on the cells was analyzed by using FM1-43 probe through synaptic vesicle circulation.Results the cell apoptosis and cell damage induced by MPTP could be attenuated in a dose-dependent manner.Fura-2/AM fluorescence probe assay showed that PA could reduce the increase of intracellular free calcium level induced by MPTP. Western blot analysis showed that PA could significantly up-regulate the expression of dopamine transporter.The results of real-time fluorescence quantitative PCR and cellular immunofluorescence showed that SH-SY5Y could activate the expression of Wnt/ 尾 -catenin markers in SH-SY5Y cells.In addition, FM1-43 probe detection showed that the fluorescence intensity of labeled vesicles was enhanced and the number of dopaminergic neurons increased compared with the decrease of fluorescence intensity induced by MPTP.Conclusion phytic acid can protect dopaminergic neurons from injury induced by MPTP. The mechanism may be related to the activation of synaptic vesicle circulation and Wnt/ 尾 -catenin signaling pathway, which opens a new direction for the prevention and treatment of PD.
【學(xué)位授予單位】：青島大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R742.5

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本文編號：1736006