發(fā)布時間：2018-04-09 20:23

  本文選題：膠質(zhì)母細(xì)胞瘤　切入點(diǎn)：自噬　出處：《南方醫(yī)科大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)中最常見的原發(fā)惡性腫瘤,約占所有顱內(nèi)原發(fā)惡性腫瘤的70%。在膠質(zhì)瘤的WHO分型中,Ⅳ型膠質(zhì)瘤,即膠質(zhì)母細(xì)胞瘤(GlioblastomaMultiforme,GBM)惡性程度最高,具有相當(dāng)高的復(fù)發(fā)率和致死性。目前臨床上針對GBM普遍采用包含最大安全范圍手術(shù)切除+替莫唑胺(temozolomide,TMZ)化療+放療的綜合治療方案(STUPP方案),但GBM患者預(yù)后仍很差,平均中位生存期只有15個月左右,2年生存率為27%。GBM在經(jīng)過標(biāo)準(zhǔn)方案治療后仍然復(fù)發(fā)并向周圍組織侵襲是導(dǎo)致患者預(yù)后差的主要原因之一。GBM在其進(jìn)展過程中出現(xiàn)的局部缺血缺氧及化療藥物TMZ的刺激作用等可誘導(dǎo)腫瘤細(xì)胞發(fā)生自噬,從而促進(jìn)腫瘤細(xì)胞的生存。另外上皮細(xì)胞間充質(zhì)轉(zhuǎn)化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)被認(rèn)為是上皮細(xì)胞來源的惡性腫瘤(包括GBM)細(xì)胞獲得遷移和侵襲能力的重要生物學(xué)過程。在本研究前期實(shí)驗(yàn)中,我們已證實(shí)TMZ可誘導(dǎo)GBM發(fā)生自噬,并進(jìn)而誘導(dǎo)GBM發(fā)生EMT,獲得遷移和侵襲能力。另外,我們發(fā)現(xiàn)TMZ可以顯著上調(diào)微管微絲交連蛋白(microtubule-actin crosslinking factor 1,MACF1,也稱之為ACF7)的表達(dá)水平,而MACF1已在小鼠上皮組織中被證實(shí)與細(xì)胞遷移相關(guān)。因此,我們提出假說,TMZ等刺激作用通過誘導(dǎo)GBM發(fā)生自噬,進(jìn)而誘導(dǎo)其MACF1表達(dá)水平上調(diào),從而導(dǎo)致GBM發(fā)生EMT并獲得遷移和侵襲能力。在本研究中,我們在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞系U87和U251細(xì)胞上對此假說進(jìn)行了探索。第一章MACF1在膠質(zhì)母細(xì)胞瘤中的生物功能的初步研究方法:分別應(yīng)用siRNA干擾序列和慢病毒載體干擾U87和U251中MACF1的表達(dá),并用RT-PCR和Western Blot檢測干擾效率。通過細(xì)胞計(jì)數(shù)、CCK8實(shí)驗(yàn)、細(xì)胞形態(tài)觀察、劃痕實(shí)驗(yàn)、Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)、Boyden小室侵襲實(shí)驗(yàn)、Western Blot和免疫熒光等實(shí)驗(yàn),檢測干擾MACF1后的U87和U251細(xì)胞的細(xì)胞表型和功能上的差異。結(jié)果:干擾U87和U251中MACF1的表達(dá)后,細(xì)胞增殖無明顯差異(P0.05);細(xì)胞胞體長徑變短,細(xì)胞凸起減少變短;細(xì)胞遷移能力下調(diào)(P0.001),侵襲能力下調(diào)(P0.05);在EMT相關(guān)蛋白中,上皮細(xì)胞表型標(biāo)記物表達(dá)上調(diào),間質(zhì)細(xì)胞表型標(biāo)記物表達(dá)下調(diào),EMT轉(zhuǎn)錄因子表達(dá)下調(diào)。第二章自噬誘導(dǎo)U87細(xì)胞MACF1表達(dá)水平上調(diào)方法:分別用含雷帕霉素(rapamycin,RAPA,自噬誘導(dǎo)劑)和TMZ和氯喹(chloroquine,CQ,自噬抑制劑)的完全培養(yǎng)基持續(xù)作用于U87細(xì)胞,通過Western Blot檢測各組MACF1表達(dá)水平。結(jié)果:RAPA和TMZ持續(xù)刺激U87細(xì)胞后,MACF1表達(dá)水平明顯上調(diào)(P0.01)。通過CQ抑制自噬以后再用RAPA和TMZ刺激U87細(xì)胞,其MACF1表達(dá)水平相比未抑制自噬的細(xì)胞明顯下調(diào)(P0.05),證實(shí)通過在U87膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞中誘導(dǎo)自噬流水平上調(diào)可誘導(dǎo)MACF1表達(dá)水平上調(diào)。第三章MACF1在自噬促進(jìn)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤遷移和侵襲中的作用方法:應(yīng)用慢病毒載體穩(wěn)定干擾U87中MACF1的表達(dá)后,對U87細(xì)胞用RAPA誘導(dǎo)自噬流水平上調(diào),并采用Transwell小室遷移實(shí)驗(yàn)、Boyden小室侵襲實(shí)驗(yàn)檢測對干擾MACF1后的U87細(xì)胞誘導(dǎo)自噬流水平上調(diào)后其細(xì)胞遷移和侵襲的差異。結(jié)果:對未干擾MACF1表達(dá)的正常對照組U87細(xì)胞用RAPA誘導(dǎo)自噬流水平上調(diào)后,其細(xì)胞遷移能力和侵襲能力對比應(yīng)用正常培養(yǎng)基的細(xì)胞明顯上調(diào)(P0.01);對干擾MACF1表達(dá)的U87細(xì)胞用RAPA誘導(dǎo)自噬流水平上調(diào)后,其細(xì)胞遷移能力和侵襲能力對比未干擾MACF1表達(dá)的正常對照組明顯下調(diào)(P0.001),證實(shí)MACF1在RAPA誘導(dǎo)U87細(xì)胞自噬流水平上調(diào)后促進(jìn)其遷移和侵襲的過程中起重要作用。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：南方醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R739.4

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本文編號：1727997