本文選題：膠質母細胞瘤　切入點：自噬　出處：《南方醫(yī)科大學》2017年碩士論文

【摘要】：膠質瘤是中樞神經系統(tǒng)中最常見的原發(fā)惡性腫瘤,約占所有顱內原發(fā)惡性腫瘤的70%。在膠質瘤的WHO分型中,Ⅳ型膠質瘤,即膠質母細胞瘤(GlioblastomaMultiforme,GBM)惡性程度最高,具有相當高的復發(fā)率和致死性。目前臨床上針對GBM普遍采用包含最大安全范圍手術切除+替莫唑胺(temozolomide,TMZ)化療+放療的綜合治療方案(STUPP方案),但GBM患者預后仍很差,平均中位生存期只有15個月左右,2年生存率為27%。GBM在經過標準方案治療后仍然復發(fā)并向周圍組織侵襲是導致患者預后差的主要原因之一。GBM在其進展過程中出現(xiàn)的局部缺血缺氧及化療藥物TMZ的刺激作用等可誘導腫瘤細胞發(fā)生自噬,從而促進腫瘤細胞的生存。另外上皮細胞間充質轉化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)被認為是上皮細胞來源的惡性腫瘤(包括GBM)細胞獲得遷移和侵襲能力的重要生物學過程。在本研究前期實驗中,我們已證實TMZ可誘導GBM發(fā)生自噬,并進而誘導GBM發(fā)生EMT,獲得遷移和侵襲能力。另外,我們發(fā)現(xiàn)TMZ可以顯著上調微管微絲交連蛋白(microtubule-actin crosslinking factor 1,MACF1,也稱之為ACF7)的表達水平,而MACF1已在小鼠上皮組織中被證實與細胞遷移相關。因此,我們提出假說,TMZ等刺激作用通過誘導GBM發(fā)生自噬,進而誘導其MACF1表達水平上調,從而導致GBM發(fā)生EMT并獲得遷移和侵襲能力。在本研究中,我們在膠質母細胞瘤細胞系U87和U251細胞上對此假說進行了探索。第一章MACF1在膠質母細胞瘤中的生物功能的初步研究方法:分別應用siRNA干擾序列和慢病毒載體干擾U87和U251中MACF1的表達,并用RT-PCR和Western Blot檢測干擾效率。通過細胞計數(shù)、CCK8實驗、細胞形態(tài)觀察、劃痕實驗、Transwell小室遷移實驗、Boyden小室侵襲實驗、Western Blot和免疫熒光等實驗,檢測干擾MACF1后的U87和U251細胞的細胞表型和功能上的差異。結果:干擾U87和U251中MACF1的表達后,細胞增殖無明顯差異(P0.05);細胞胞體長徑變短,細胞凸起減少變短;細胞遷移能力下調(P0.001),侵襲能力下調(P0.05);在EMT相關蛋白中,上皮細胞表型標記物表達上調,間質細胞表型標記物表達下調,EMT轉錄因子表達下調。第二章自噬誘導U87細胞MACF1表達水平上調方法:分別用含雷帕霉素(rapamycin,RAPA,自噬誘導劑)和TMZ和氯喹(chloroquine,CQ,自噬抑制劑)的完全培養(yǎng)基持續(xù)作用于U87細胞,通過Western Blot檢測各組MACF1表達水平。結果:RAPA和TMZ持續(xù)刺激U87細胞后,MACF1表達水平明顯上調(P0.01)。通過CQ抑制自噬以后再用RAPA和TMZ刺激U87細胞,其MACF1表達水平相比未抑制自噬的細胞明顯下調(P0.05),證實通過在U87膠質母細胞瘤細胞中誘導自噬流水平上調可誘導MACF1表達水平上調。第三章MACF1在自噬促進膠質母細胞瘤遷移和侵襲中的作用方法:應用慢病毒載體穩(wěn)定干擾U87中MACF1的表達后,對U87細胞用RAPA誘導自噬流水平上調,并采用Transwell小室遷移實驗、Boyden小室侵襲實驗檢測對干擾MACF1后的U87細胞誘導自噬流水平上調后其細胞遷移和侵襲的差異。結果:對未干擾MACF1表達的正常對照組U87細胞用RAPA誘導自噬流水平上調后,其細胞遷移能力和侵襲能力對比應用正常培養(yǎng)基的細胞明顯上調(P0.01);對干擾MACF1表達的U87細胞用RAPA誘導自噬流水平上調后,其細胞遷移能力和侵襲能力對比未干擾MACF1表達的正常對照組明顯下調(P0.001),證實MACF1在RAPA誘導U87細胞自噬流水平上調后促進其遷移和侵襲的過程中起重要作用。
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【學位授予單位】：南方醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R739.4

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本文編號：1727997