本文選題：視神經(jīng)脊髓炎譜系疾病　切入點(diǎn)：TACI受體融合蛋白　出處：《第二軍醫(yī)大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：研究目的:視神經(jīng)脊髓炎譜系疾病(neuromyelitis optica spectrum disorders,NMOSD)是神經(jīng)病學(xué)領(lǐng)域近10年來臨床診治更新和進(jìn)展最迅速的疾病之一,是水通道蛋白4(aquaporin 4,AQP4)抗體陽性率較高的一組神經(jīng)系統(tǒng)自身免疫性脫髓鞘疾病。NMOSD是中樞神經(jīng)系統(tǒng)脫髓鞘疾病的一類典型疾病,該類疾病在中青年女性中多發(fā),發(fā)病往往癥狀劇烈,帶來四肢麻木、視力下降等癥狀,嚴(yán)重者甚至出現(xiàn)橫斷性截癱,嚴(yán)重影響患者生活質(zhì)量。目前對(duì)于NMOSD的治療尚無針對(duì)發(fā)病根本的有效治療手段,目前主要治療藥物包括糖皮質(zhì)激素、硫唑嘌呤和嗎替麥考酚酯等,但仍存在部分問題,首先并非每名患者對(duì)藥物有敏感性,其次長(zhǎng)期用藥還會(huì)伴隨藥物帶來的副作用。隨著對(duì)NMOSD研究的開展,B細(xì)胞在其發(fā)病過程中起到的作用逐漸得到了重視。本研究希望通過利用目前最新開發(fā)的B淋巴細(xì)胞刺激因子(B lymphocyte stimulator,BLyS)和增殖誘導(dǎo)配體(a proliferation-inducing ligand,APRIL)抑制劑TACI受體融合蛋白(TACI-Ig),對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(Experimental Autoimmune Encephalomyelitis,EAE)開展治療實(shí)驗(yàn),以探究基于B細(xì)胞為治療主體的實(shí)驗(yàn)方案在NMOSD為代表的脫髓鞘疾病中的有效性,為臨床應(yīng)用提供理論依據(jù)和支持。研究方法:本研究首先在臨床上收集診斷為NMOSD的患者,根據(jù)收集血樣的時(shí)間及患者癥狀將患者分為急性期和緩解期兩組,同時(shí)收集年齡及性別分布與疾病組一致的正常人外周血血清,檢測(cè)三組血清中BlyS和APRIL表達(dá)水平。其次將體外實(shí)驗(yàn)與在體實(shí)驗(yàn)相結(jié)合,先通過MOG35-55誘導(dǎo)EAE模型產(chǎn)生,腹腔注射不同劑量的TACI-Ig進(jìn)行治療,記錄每日EAE小鼠臨床評(píng)分變化,從行為學(xué)評(píng)分角度評(píng)價(jià)TACI-Ig治療效果。治療結(jié)束后將動(dòng)物處死,在炎癥高峰期(第25天)取脾,通過流式染色技術(shù)分析外周免疫系統(tǒng)內(nèi)B細(xì)胞各個(gè)亞群的分化;在炎癥消退期(第35天)取脊髓腰膨大處,行HE和LFB染色等組織病理學(xué)實(shí)驗(yàn),分析治療后中樞神經(jīng)系統(tǒng)(central nervous system,CNS)脫髓鞘和炎癥浸潤(rùn)的變化。最后體外驗(yàn)證TACI-Ig體外對(duì)T、B細(xì)胞增殖、凋亡以及亞型分化的影響,以提供TACI-Ig對(duì)正常T、B細(xì)胞的安全性證據(jù)。研究結(jié)果:首先通過收集的NMOSD患者外周血清檢測(cè)中發(fā)現(xiàn),患者外周血中BLyS和APRIL較健康對(duì)照組明顯升高。體內(nèi)實(shí)驗(yàn)證實(shí),TACI-Ig可顯著地降低EAE臨床評(píng)分,減輕中樞神經(jīng)系統(tǒng)炎癥浸潤(rùn)和髓鞘脫失,同時(shí)抑制EAE小鼠體內(nèi)活化B細(xì)胞增生。最后,通過體外分選CD4+T細(xì)胞和CD19+B細(xì)胞與TACI-Ig共培養(yǎng),證實(shí)低濃度藥物(0nM-100nM)不影響兩者的增殖和凋亡,高濃度(100nM-1000nM)時(shí)會(huì)抑制兩種細(xì)胞的增殖。TACI-Ig可顯著地降低在LPS炎癥刺激下B細(xì)胞的過度活化和增殖,而不影響T細(xì)胞各亞群的分化。研究結(jié)論:通過上述兩部分的實(shí)驗(yàn)研究,本課題評(píng)估了TACI-Ig對(duì)EAE的治療作用。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示TACI-Ig可明顯改善EAE行為學(xué)評(píng)分,抑制CNS脫髓鞘和炎癥浸潤(rùn),流式分析結(jié)果更證實(shí)了TACI-Ig是通過抑制B細(xì)胞在體內(nèi)的異常增殖發(fā)揮治療作用,同時(shí)在一定的安全濃度范圍內(nèi)不影響T、B淋巴細(xì)胞的正常增殖和分化。最后我們對(duì)NMOSD患者外周血BlyS和APRIL的檢測(cè)中更是發(fā)現(xiàn),這兩個(gè)TACI-Ig的治療靶點(diǎn)分子在NMOSD患者,特別是急性期的患者中明顯升高,提示下一步將TACI-Ig應(yīng)用到NMOSD的治療中是具有很大潛力和發(fā)展空間的。
[Abstract]:Objective : To study the effect of B - cell therapy on the development of NMOSD and to evaluate the therapeutic effect of TACI - Ig . The results show that the treatment of NMOSD is a typical disease in the central nervous system . The effects of TACI - Ig on T , B cell proliferation , apoptosis and subtype differentiation were studied in vitro . The results showed that TACI - Ig could significantly decrease the proliferation and proliferation of T and B cells in vitro .

【學(xué)位授予單位】：第二軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R744.5
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本文編號(hào)：1716434