本文選題：CO中毒　切入點：凋亡　出處：《西南醫(yī)科大學》2017年碩士論文

【摘要】：目的:檢測急性一氧化碳中毒后不同時間點大鼠海馬神經(jīng)元活化蛋白-1(AP-1)及血紅素加氧酶-1(HO-1)的表達變化,探討AP-1及HO-1兩種蛋白在急性一氧化碳中毒后導致遲發(fā)性腦病的作用及機制,為研究DEACMP提供實驗基礎。方法:篩選156只雄性健康合格的SD大鼠,通過隨機數(shù)字表抽取的方法將它們分成三組:DEACMP組(CO組)、空氣對照組(AC組)、空白對照組(BC組),其中CO組和AC組各有60只,BC組36只,三組大鼠再按照中毒后1d、3d、1W、2W、3W、4W六個時間點平均分為六個亞組,CO組、AC組各亞組10只,BC組各亞組6只。DEACMP組使用腹腔多次間隔注射一氧化碳的方法制備DEACMP模型,空氣對照組采用相同的方法注射等體積的空氣,對空白對照組不進行任何干預。應用Morris水迷宮實驗,即包括定位航行實驗和空間探索實驗兩部分,分別檢測三組大鼠染毒前、染毒后1W、2W、3W、4W的平均逃避潛伏期和平臺象限運動時間的長短,從而客觀分析各組大鼠的學習記憶和定位認知能力。采用HE染色觀察大鼠海馬CAl區(qū)病理變化,應用免疫組化SP法檢測大鼠海馬CAl區(qū)AP-1及HO-1的表達情況,采用Western-blot法半定量分析海馬區(qū)AP-1的表達水平,采用TUNEL染色法計數(shù)海馬CAl區(qū)凋亡神經(jīng)元。結(jié)果:1、DEACMP大鼠模型的建立:CO組大鼠染毒后出現(xiàn)煩躁、撞籠、呼吸急促、拒食少動、嗜睡等各種急性一氧化碳中毒的臨床癥狀,口唇、趾端以及皮膚黏膜呈現(xiàn)出典型的櫻桃紅色,中毒嚴重的部分大鼠可出現(xiàn)昏迷、抽搐甚至死亡。AC組、BC組大鼠沒有出現(xiàn)明顯異�；顒�。2、morris水迷宮實驗:1)定位航行(平均逃避潛伏期):co組、ac組以及bc大鼠的平均逃避潛伏期在染毒前及染毒后1w差異沒有統(tǒng)計學意義(p0.05);co組染毒后2w(21.26±3.22)、3w(23.17±3.92)、4w(22.53±2.84)平均逃避潛伏期延長,與ac組、bc組比較差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。2)空間探索(平臺象限運動時間):三組大鼠的平臺象限運動時間在染毒前及染毒后1w差異沒有統(tǒng)計學意義(p0.05);co組的平臺象限運動時間在染毒后2w(31.12±2.05)、3w(28.03±3.30)、4w(21.37±2.76)逐漸縮短,與ac組、bc組比較差異有統(tǒng)計學意義(p0.05)。3、he染色情況:ac組、bc組各時間點海馬cal區(qū)細胞形態(tài)正常,細胞排列整齊,細胞膜完全,邊界清楚;co組大鼠海馬cal區(qū)神經(jīng)元數(shù)量減少、排列極為不規(guī)整、相互之間間隙增大,細胞核出現(xiàn)深染、不同程度固縮及碎裂。4、免疫組化結(jié)果:1)ap-1:ac組及bc組各亞組的ap-1蛋白表達較少,且差異沒有統(tǒng)計學意義(p0.05),co組各時間點表達的ap-1蛋白(分別為3.5±0.51、7.92±0.88、6.4±1.17、5.25±1.01、4.36±1.32、3.74±0.69)均高于ac組及bc組,3d達峰值,且與組內(nèi)1d、1w、2w、3w、4w比較差異均有統(tǒng)計學意義(p0.05)。2)ho-1:ac組及bc組各亞組的ho-1蛋白表達較少,且差異沒有統(tǒng)計學意義(p0.05),co組各時間點表達的ho-1蛋白(分別為3.65±0.43、9.06±0.86、6.86±0.57、5.00±0.77、4.2±0.72、3.72±0.59)均高于ac組及bc組,3d達峰值,且與組內(nèi)1d、1w、2w、3w、4w比較差異均有統(tǒng)計學意義(p0.05)。5、ap-1的western-blot結(jié)果:在ac組、bc組大鼠海馬區(qū)有少量表達,co組大鼠海馬的ap-1蛋白在1d(0.93±0.07)時增多,3d時(1.71±0.10)達高峰,1W(1.45±0.10)開始下降,至4W時(0.65±0.10)表達仍高于AC組(0.39±0.04)和BC組(0.50±0.07)。CO組各時間點AP-1蛋白的表達趨勢與免疫組化結(jié)果一致。6、TUNEL染色結(jié)果:AC組、BC組各亞組大鼠海馬CAl區(qū)神經(jīng)元有少許凋亡細胞,CO組凋亡神經(jīng)元明顯高于AC組、BC組,凋亡指數(shù)(分別為7.49±0.65、15.63±1.14、20±1.56、18.22±1.00、12.41±1.19、7.86±1.01)呈逐漸增高,于染毒后1W達峰值,之后逐漸下降的趨勢,且染毒后1W、2W分別與組內(nèi)其余各時間點比較,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。結(jié)論:1、多次間隔腹腔注射CO的方法是建立DEACMP模型的理想方法,具有操作簡單安全、所需CO劑量少、染毒劑量深度容易控制等優(yōu)點。2、通過Morris水迷宮客觀反應大鼠的認知能力,結(jié)合大鼠的行為變化和血液中的Hb CO水平綜合判斷CO組大鼠是否發(fā)生了遲發(fā)性腦病。3、AP-1可能通過參與調(diào)節(jié)凋亡相關靶基因HO-1的表達,引起一氧化碳中毒后神經(jīng)元的凋亡,從而推助遲發(fā)性腦病的發(fā)生。
[Abstract]:Objective : To investigate the expression of activated protein - 1 ( AP - 1 ) and heme oxygenase - 1 ( HO - 1 ) in hippocampus of rats after acute carbon monoxide poisoning . There was no significant difference between the two groups ( P < 0.05 ) . There was no significant difference between the two groups ( P < 0.05 ) . The expression of AP - 1 protein in the group of co - group was 3 . 5 鹵 0 . 51 , 7 . 92 鹵 0 . 88 , 6 . 4 鹵 1.17 , 5 . 25 鹵 1.01 , 4 . 36 鹵 1 . 32 , 3 . 74 鹵 0.69 .

【學位授予單位】：西南醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R595.1;R747.9

【參考文獻】

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本文編號：1682017