發(fā)布時間：2018-03-22 16:27

  本文選題：伯氏瘧原蟲ANKA株　切入點：熒光素酶　出處：《中國病原生物學雜志》2017年02期 　論文類型：期刊論文

【摘要】：目的構(gòu)建表達Luciferase的伯氏瘧原蟲ANKA株(Plasmodium berghei ANKA),感染昆明小鼠并于實驗?zāi)X型瘧發(fā)生時對小鼠進行活體成像,建立實驗?zāi)X型瘧活體成像平臺,為腦型瘧發(fā)病機理及瘧疾疫苗和藥物評價研究奠定基礎(chǔ)。方法大量制備重組質(zhì)粒pl0027并酶切使其線性化。復蘇凍存原蟲并于體外培養(yǎng)富集成熟裂殖體。收集成熟裂殖體與線性化的質(zhì)�；靹蚝筮M行電轉(zhuǎn)化,對構(gòu)建的蟲株進行藥物篩選;提取瘧原蟲基因組,進行PCR鑒定。構(gòu)建的伯氏瘧原蟲ANKA-Luciferase瘧原蟲采用常規(guī)方法感染昆明小鼠,當小鼠于感染6d后出現(xiàn)偏癱、昏迷及視網(wǎng)膜病變等典型腦型瘧癥狀時,采用活體成像技術(shù)觀察瘧原蟲增殖及分布情況;解剖分離感染小鼠各臟器組織并成像,觀察瘧原蟲在各器官組織粘附情況。結(jié)果 PCR檢測兩端插入序列及Luciferase序列均能獲得預(yù)期片段,提示重組質(zhì)粒成功整合入伯氏瘧原蟲ANKA基因組內(nèi)。活體成像觀察感染小鼠在小鼠腦型瘧發(fā)生時體內(nèi)原蟲水平較高,且隨血流呈全身性分布;器官成像觀察原蟲在小鼠各重要臟器均有粘附,特別是腦部聚集了大量的感染瘧原蟲的紅細胞。結(jié)論成功構(gòu)建了伯氏瘧原蟲ANKA-Luciferase瘧原蟲,并利用此原蟲感染小鼠建立了實驗?zāi)X型瘧活體成像平臺。
[Abstract]:Objective to construct ANKA strain of Plasmodium berghei Luciferase expression (Plasmodium berghei ANKA), for in vivo imaging of mice and Kunming mice infected on experimental cerebral malaria occurs, the establishment of experimental cerebral malaria in vivo imaging platform, lay the foundation for the evaluation of cerebral malaria pathogenesis and malaria vaccines and drugs. Methods preparation of recombinant plasmid pl0027 and restriction enzyme to linearize the cryopreservation and recovery of protozoa. In vitro enrichment mature schizont. Mature schizonts collected and split plasmid linearized mixed electric conversion, drug screening of strains; extracting the Plasmodium falciparum genome, identified by PCR. The construction of Plasmodium berghei ANKA-Luciferase using conventional methods of Kunming mice infected mice after infection with 6D, when the emergence of hemiplegia, coma and retinopathy and other typical symptoms of cerebral malaria, using in vivo imaging observation of Plasmodium. Reproduction and distribution; dissection of infected mice in each organ and imaging observation of Plasmodium in different organs tissue adhesion. The result of PCR detection and Luciferase sequences were inserted into both ends can be expected, suggesting that the recombinant plasmid was successfully integrated into the genome of Plasmodium berghei ANKA. Imaging observation of infected mice in mouse cerebral malaria when the level of the body and blood flow with high parasitemia, a systemic organ distribution; imaging observation of protozoa in mouse organs have important adhesion, especially in the brain has gathered a large number of infected red blood cells. Conclusion the successful construction of Plasmodium berghei ANKA-Luciferase, and using the parasitemia in infected mice established experimental cerebral malaria in vivo imaging platform.

【作者單位】： 第三軍醫(yī)大學基礎(chǔ)醫(yī)學部病原生物學教研室;
【基金】：國家自然科學基金項目(No.81301456) 重慶市自然科學基金項目(No.cstc2012jjA10048)
【分類號】：R531.3

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本文編號：1649451