發(fā)布時間：2018-02-24 06:07

  本文關(guān)鍵詞： 多發(fā)性硬化 濾泡輔助性T細(xì)胞 B細(xì)胞 實驗性自身免疫性腦脊髓炎　出處：《第四軍醫(yī)大學(xué)》2014年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

【摘要】：研究背景 多發(fā)性硬化（multiple sclerosis, MS）是一種以中樞神經(jīng)系統(tǒng)（central nervoussystem, CNS）白質(zhì)炎性脫髓鞘為病變特征的自身免疫性疾病，確切病因和發(fā)病機制尚不明確。傳統(tǒng)的免疫學(xué)觀點認(rèn)為細(xì)胞免疫在該病的發(fā)生中具有關(guān)鍵作用，但近年來B細(xì)胞介導(dǎo)的體液免疫逐漸成為MS研究的熱點，，來自動物實驗、尸檢研究、外周血和腦脊液（cerebrospinal fluid, CSF）細(xì)胞分析、以及臨床B細(xì)胞去除治療的諸多證據(jù)均支持了B細(xì)胞免疫及抗體在MS發(fā)病中的重要作用，但在MS中B細(xì)胞是如何活化及其調(diào)控機制尚不完全清楚。新近研究表明，濾泡輔助性T細(xì)胞（T follicularhelper cells, Tfh）是一群表型為CD4+CXCR5+的T細(xì)胞亞群，可輔助B細(xì)胞活化、增殖、分化并形成生發(fā)中心（germinal center, GC）。Tfh細(xì)胞作為B細(xì)胞活化的真正輔助者，其發(fā)現(xiàn)被認(rèn)為是T-B細(xì)胞協(xié)作研究的重大突破[1]，疾病狀態(tài)下Tfh細(xì)胞的功能變化已成為當(dāng)前相關(guān)研究的熱點之一。實驗性自身免疫性腦脊髓炎（experimentalautoimmune encephalomyelitis, EAE）作為MS的經(jīng)典動物模型，Tfh細(xì)胞及與B細(xì)胞相互作用對該自身免疫性疾病的影響如何同樣有待深入探討。 目的 建立并評估EAE小鼠模型；觀察EAE小鼠脾臟生發(fā)中心以及脊髓異位淋巴濾泡樣結(jié)構(gòu)的形成；探討Tfh細(xì)胞、B細(xì)胞及其細(xì)胞亞群在不同病程時期EAE小鼠外周免疫器官和病變靶器官中的比率變化，以期提供Tfh細(xì)胞參與EAE疾病過程的初步證據(jù)。 方法 用髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白35-55（myelin oligodendroglia glycol protein,MOG35-55）多肽誘導(dǎo)C57BL/6小鼠，建立EAE動物模型；用蘇木素-伊紅（hematoxylinand eosin, HE）染色和勞克堅牢藍(lán)（Luxol fast blue, LFB）染色評估EAE發(fā)病小鼠脊髓組織中的病理學(xué)改變；利用多重免疫熒光染色方法觀察EAE小鼠脾臟中生發(fā)中心的形成以及免疫細(xì)胞的位置變化，在脊髓組織中尋找異位淋巴濾泡樣結(jié)構(gòu)；借助流式細(xì)胞檢測方法觀察不同病程時期EAE小鼠脾臟、淋巴結(jié)及脊髓中Tfh細(xì)胞與B細(xì)胞及其細(xì)胞亞群的比率變化，探討其與EAE疾病變化的關(guān)系。 結(jié)果 MOG35-55多肽免疫小鼠最早于免疫后第11天開始起病，發(fā)病主要集中在免疫后第12-16天，于發(fā)病后4.25±0.74天達(dá)到疾病高峰，總體發(fā)病率在90%左右�；疾⌒∈笾饕憩F(xiàn)為不同程度的肢體癱瘓，并以雙后肢為主。HE染色顯示在EAE小鼠脊髓組織切片中有大量炎癥細(xì)胞浸潤，主要分布在血管周圍和脊膜處。LFB染色顯示在EAE小鼠脊髓炎性病灶內(nèi)可見多個髓鞘脫失區(qū)。多重免疫熒光染色發(fā)現(xiàn)EAE小鼠脾臟中生發(fā)中心形成并伴有T細(xì)胞、B細(xì)胞、濾泡樹突狀細(xì)胞（follicular dendriticcells, FDC）的位置變化；在EAE小鼠脊髓組織中發(fā)現(xiàn)了異位的淋巴濾泡樣結(jié)構(gòu)。與此同時，我們在EAE小鼠脾臟和脊髓組織中觀察到了大量的CD4+CXCR5+ICOS+和CD4+CXCR5+PD-1+Tfh細(xì)胞。流式細(xì)胞術(shù)檢測顯示，在EAE發(fā)病前期、高峰期、緩解期以及慢性持續(xù)期小鼠脾臟、淋巴結(jié)和脊髓組織中Tfh細(xì)胞比率均顯著增高，與正常對照組比較有統(tǒng)計學(xué)意義（P 0.05），其中尤以疾病高峰期的升高幅度最大。Tfh細(xì)胞亞型分析顯示，在EAE小鼠病程中，Th1樣Tfh細(xì)胞比率下降，而Th2樣、Th17樣Tfh細(xì)胞比率升高。與Tfh細(xì)胞變化趨勢相似，在EAE病程的對應(yīng)時間點，患病小鼠脾臟、淋巴結(jié)以及脊髓組織中的B細(xì)胞亞型均較正常對照組顯著升高（P 0.05）。 結(jié)論 EAE導(dǎo)致了小鼠脾臟中生發(fā)中心的形成，同時伴隨不同類型免疫細(xì)胞的位置遷移，并在EAE病變靶器官脊髓組織中形成了異位的淋巴濾泡樣結(jié)構(gòu)，且EAE不同病程時期小鼠外周免疫器官和病變靶器官中Tfh細(xì)胞及B細(xì)胞亞型比率始終處于較高水平，這些結(jié)果為Tfh細(xì)胞參與EAE疾病過程提供了初步的實驗證據(jù)。
[Abstract]:......
【學(xué)位授予單位】：第四軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2014
【分類號】：R744.51

【共引文獻(xiàn)】

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8 劉

本文編號：1529149