本文關鍵詞： 增殖抑制基因 膠質瘤 侵襲 Rho相關激酶類　出處：《寧夏醫(yī)科大學》2017年碩士論文　論文類型：學位論文

【摘要】：目的研究大鼠增殖抑制基因(rat hyperplasia suppressor gene,rHSG)過表達對C6膠質瘤細胞侵襲的影響,并研究其可能的調節(jié)機制。方法:用攜帶r H S G基因序列的重組腺病毒Adv-rHSG-GFP感染C6膠質瘤細胞,同時設置Adv-GFP感染的陰性對照組以及僅PBS處理的空白對照組。采用實時熒光定量PCR和蛋白質印跡法檢測各組細胞中rHSG的表達變化。然后,采用細胞劃痕愈合實驗和Transwell遷移及侵襲實驗分別檢測rHSG過表達對C6膠質瘤細胞遷移和侵襲的影響,細胞免疫熒光法和細胞黏附實驗分別分析rHSG過表達后C6細胞骨架形成和黏附能力的變化,實時熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR)和蛋白質印跡法(Western Blot)測定各組細胞中Rho/Rock信號通路關鍵分子Ras同源基因家族成員A(Ras homolog gene family,member A,RhoA)、Ras相關的C3肉毒底物1(Ras-related C3 botulinum toxin substrate 1,Rac1)、細胞分裂周期蛋白42(cell division cycle 42,Cdc42)、Rho相關卷曲螺旋形成蛋白激酶1(Rho associated coiled-coil forming protein kinase 1,Rock1)和Rock2的表達水平。。結果1、Adv--GFP、Adv-rHSG-GFP分別感染C6膠質瘤細胞48 h、72 h后,利用RT-PCR及Western Blot檢測發(fā)現(xiàn):與Adv-GFP組及PBS組相比,Adv-rHSG-GFP組中C6膠質瘤細胞rHSG的mRNA、蛋白表達水平均明顯升高(P值均0.01);Adv-GFP組與PBS組相比,兩組之間mrna、蛋白均無明顯差異(p0.05)。2、劃痕愈合實驗發(fā)現(xiàn):在劃痕30h后,adv-rhsg-gfp組分別與adv-gfp組及pbs組相比,c6膠質瘤細胞的劃痕愈合率明顯下降(p值均0.01);adv-gfp組與pbs組相比,c6膠質瘤細胞在兩組之間的劃痕愈合率無明顯差異(p0.05)。3、transwell實驗發(fā)現(xiàn):c6膠質瘤細胞在transwell上室培養(yǎng)24h后,adv-rhsg-gfp組分別與adv-gfp組及pbs組相比,遷移、侵襲至下室的細胞數(shù)均明顯減少(p值均0.01)。adv-gfp組與pbs組相比,兩組遷移、侵襲的細胞數(shù)之間均無明顯差異(p0.05)。4、細胞黏附實驗發(fā)現(xiàn):在黏附不同時間(30、60、90和120min),與adv-gfp組及pbs組相比,c6膠質瘤細胞在adv-rhsg-gfp組的黏附細胞數(shù)均明顯減少(p值均0.05),且隨著時間的延長,差異逐漸縮小。adv-gfp組與pbs組相比,兩組之間黏附細胞數(shù)均無明顯差異(p0.05)。5、細胞免疫熒光實驗發(fā)現(xiàn):重組腺病毒adv-rhsg-gfp感染48h后,adv-gfp組與pbs組的c6膠質瘤細胞形態(tài)未發(fā)生明顯變化,多呈長梭形或星形,伸出較多軸突,呈線狀偽足,偽足多向兩端伸展且成軸向排列;而adv-rhsg-gfp組的c6膠質瘤細胞骨架發(fā)生明顯調整,絲狀偽足縮短,部分成片狀且排列雜亂。6、實時熒光定量pcr及蛋白質印記實驗發(fā)現(xiàn):重組腺病毒adv-rhsg-gfp感染48h和72h后,與adv-gfp組及pbs組相比,adv-rhsg-gfp組c6膠質瘤細胞rho/rock信號通路中關鍵分子rhoa、rac1、cdc42、rock1和rock2的mrna及蛋白表達水平均明顯降低(p值均0.05);adv-gfp組與pbs組相比,兩組之間各分子mrna及蛋白表達均無明顯差異(p0.05)。結論1、病毒感染成功,重組腺病毒adv-rhsg-gfp感染48h和72h時,rhsg在c6膠質瘤細胞中成過表達狀態(tài)。2、當rhsg在c6膠質瘤細胞中表達增高時,細胞的遷移、侵襲、黏附能力均受到明顯抑制。3、rHSG過表達抑制C6膠質瘤細胞的骨架形成,促使細胞絲狀偽足縮短且重新排列。4、rHSG過表達促使C6膠質瘤細胞中Rho/rock信號通路關鍵分子mRNA及蛋白表達水平降低,說明rHSG可能是通過阻礙Rho/rock信號通路抑制C6膠質瘤細胞的侵襲。
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【學位授予單位】：寧夏醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R739.41

【參考文獻】

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1 高鵬;蔣樹財;郭暉;楊強;方志豪;趙巍;沈冰;;大鼠增殖抑制基因抑制大鼠膠質瘤細胞的增殖及其機制[J];第三軍醫(yī)大學學報;2014年04期

2 王占偉;郝文炯;趙巍;張斌;孫濤;沈冰;;腺病毒介導的大鼠增殖抑制基因抑制大鼠膠質瘤的生長[J];腫瘤;2012年09期

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本文編號：1506858