本文關(guān)鍵詞：左乙拉西坦對顳葉癲癇大鼠c-fos與Calretinin表達(dá)的影響　出處：《河南大學(xué)》2015年碩士論文　論文類型：學(xué)位論文

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【摘要】：背景癲癇是一種神經(jīng)系統(tǒng)慢性疾病,影響人群廣泛且其發(fā)病率逐年增加。顳葉癲癇(Temporal lobe epilepsy,TLE)是最常見的難治性癲癇,其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜且尚未闡明確切病因。目前TLE治療手段有限,只有手術(shù)治療可以根治癲癇,但抗癲癇藥物(Antiepileptic drugs,ADE)是目前控制癲癇發(fā)作的主要手段。左乙拉西坦(Levetiracetam,LEV)作為新型抗癲癇藥物的代表,比傳統(tǒng)ADE更安全。隨機(jī)對照試驗的薈萃分析證明左乙拉西坦對各類型癲癇(包括癲癇持續(xù)狀態(tài)(SE))均可一線用藥,對成人、兒童、嬰幼兒甚至孕婦的安全性均較高。有效的生物標(biāo)志物,對疾病診斷、病程進(jìn)展、藥物的治療的結(jié)果預(yù)測,以及避免藥物副作用的識別是在醫(yī)學(xué)興趣的新興領(lǐng)域。即早基因(immediate early genes,IEGs)是一類通過第二信使誘導(dǎo)對外界刺激能夠快速應(yīng)答原癌基因家族的基因。即早基因(IEGs)c-fos是中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)神經(jīng)元激活活化間接的標(biāo)記之一。即早基因表達(dá)變化情況在神經(jīng)細(xì)胞損壞、死亡、缺血再灌注等方面都有重要意義。鈣離子(Ca2+)、鈣結(jié)合蛋白是維持腦細(xì)胞正常生理重要因子之一,鈣結(jié)合蛋白通過調(diào)節(jié)眾多的Ca2+依賴酶和參與了有關(guān)的細(xì)胞功能。鈣結(jié)合蛋白在神經(jīng)細(xì)胞中有保護(hù)作用,鈣結(jié)合蛋白表達(dá)變化可反應(yīng)腦組織病變部位和程度。目的研究現(xiàn)公認(rèn)的顳葉癲癇模型(氯化鋰-匹羅卡品大鼠模型),使用SD(Sprague Dawley)大鼠構(gòu)建該模型,并對該模型中抗癲癇藥物左乙拉西坦(LEV)作用后大鼠的大腦海馬組織中即早基因c-fos和鈣結(jié)合蛋白Calretinin表達(dá)改變情況進(jìn)行研究分析,為進(jìn)一步明確顳葉癲癇的發(fā)病機(jī)制和病理生理改變,以期指導(dǎo)癲癇的診斷和臨床治療。方法建立SD大鼠顳葉癲癇急性(EP3d)、慢性(EP3d)模型,根據(jù)隨機(jī)數(shù)字表分組為對照組(Control組)、模型組(EP組)和藥物組(LEV組),對大鼠行為學(xué)表現(xiàn)、HE染色、Fluoro-Jade B染色以驗證模型構(gòu)建成功;對c-fos和Calretinin在海馬組織的表達(dá)在基因水平(Real-time RCR實驗)、蛋白水平(Western blot實驗)和組織水平(免疫組化和免疫熒光實驗)進(jìn)行檢驗,并用SPSS 21.0進(jìn)行單因素ANOVA分析和作圖以明確c-fos和Calretinin在EP組和LEV組的表達(dá)變化。結(jié)果共有156只大鼠,其中15只為Control組,其他使用毛果蕓香堿構(gòu)建癲癇模型,成功構(gòu)建122只,建模成功率為86.5%。HE染色顯示海馬區(qū)細(xì)胞損傷,Fluoro-Jade B染色顯示EP組有大量Fluoro-Jade B(+)細(xì)胞聚集,且損傷程度與時間正相關(guān)。LEV組HE染色、Fluoro-Jade B染色亦出現(xiàn)海馬區(qū)損傷,但和EP組比較,損傷程度稍輕。c-fos在基因、蛋白和組織水平上分別檢測,可見對照組c-fos表達(dá)量低,EP組在EP急性期(4h、6h)表達(dá)量猛增,在慢性期又恢復(fù)正常。LEV組在EP急性期(4h、6h)表達(dá)量有所增高,但之比于EP組,LEV組c-fos表達(dá)量是降低,組間比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。對照組Calretinin高表達(dá),EP組在癲癇慢性期(7d、14d、28d)表達(dá)量迅速降低,EP急性期下降不明顯。而LEV組Calretinin在慢性期(7d、14d、28d)表達(dá)量有所下降,比EP組表達(dá)量有所增高,且組間比較有統(tǒng)計學(xué)意義(P0.05)。即早基因c-fos和鈣結(jié)合蛋白Calretinin通過免疫熒光雙標(biāo)記實驗驗證二者之間無共定位關(guān)系。結(jié)論1.成功構(gòu)建顳葉癲癇大鼠模型。2.顳葉癲癇大鼠海馬組織中即早基因c-fos在癲癇急性期(4h、6h)高表達(dá),鈣結(jié)合蛋白Calretinin在EP慢性期(14d、28d)表達(dá)量下降明顯。3.左乙拉西坦可一定程度降低即早基因c-fos在癲癇急性期(4h、6h)高表達(dá),但和Control組相比,c-fos的表達(dá)量仍增高。左乙拉西坦可一定程度增高鈣結(jié)合蛋白Calretinin在癲癇慢性期表達(dá)量。但和Control組相比,Calretinin的表達(dá)量仍有所下降。4.左乙拉西坦(LEV)可降低大鼠腦細(xì)胞損傷。5.即早基因c-fos和鈣結(jié)合蛋白Calretinin在癲癇大鼠大腦中無共定位關(guān)系。
[Abstract]:Background epilepsy is a chronic disease of the nervous system, affecting population wide and its incidence increased year by year. Temporal lobe epilepsy (Temporal lobe, epilepsy, TLE) is the most common type of refractory epilepsy, its pathogenesis is complicated and has not yet been clarified. At present the exact cause of TLE treatment is limited, only surgery can cure epilepsy, but anti epileptic drugs (Antiepileptic, drugs, ADE) is currently the primary means of control of epilepsy. Levetiracetam (Levetiracetam, LEV) as the representative of new antiepileptic drugs, more secure than traditional ADE. The meta-analysis of randomized controlled trials that levetiracetam on various types of epilepsy (including status epilepticus (SE)) children can be a first-line drug, for adults, higher safety of infants and even pregnant women. Effective biomarkers, the progression of disease diagnosis, drug treatment, the prediction results, and avoid the side effects of drugs The recognition is in the emerging field of medical interest. Early gene (immediate early genes, IEGs) is a second messenger induced rapid response to external stimuli to proto oncogene gene family. Early gene c-fos (IEGs) is the central nervous system (CNS) neuron activation marker of early indirect. Gene expression changes in nerve cell damage and death, have important significance in ischemic reperfusion. Calcium, calcium binding protein (Ca2+) is one of the important factors to maintain normal physiological brain cells, calcium binding protein by regulating Ca2+ dependent enzymes and numerous cellular functions involved in the protective effect of calcium binding protein. In nerve cells, calcium binding protein expression changes in brain tissue lesion and extent of reaction. Objective to study the model of temporal lobe epilepsy is recognized (lithium pilocarpine rat model, using SD (Sprague Daw) Ley) to construct the rat model, and the model of antiepileptic drug levetiracetam (LEV) in hippocampus tissue of rats after immediate early gene c-fos and calcium binding protein Calretinin expression analysis, to further clarify the pathogenesis and pathophysiology of temporal lobe epilepsy in order to change. The diagnosis of epilepsy and to guide clinical treatment. Methods SD rats with temporal lobe epilepsy (EP3d) in acute, chronic (EP3d) model, according to randomly divided into control group (Control group), model group (EP group) and treatment group (group LEV), findings on rat HE staining. Fluoro-Jade B staining to verify the successful model; on c-fos and Calretinin in the hippocampus in gene expression level (Real-time RCR) and protein level (Western blot test) and tissue level (immunohistochemistry and immunofluorescence test) test, and with SPSS 21 for single ANOVA analysis and mapping to identify c-fos and Calretinin in EP group and LEV group. The changes of the expression of the results of a total of 156 rats, 15 of them as Control group, the other using pilocarpine to construct epilepsy model, successfully constructed 122, modeling success rate of 86.5%.HE staining showed that hippocampal cell damage, Fluoro-Jade B EP staining showed that the group had a large number of Fluoro-Jade (+) B cell aggregation, and the damage degree and time is positively related to.LEV group HE staining, Fluoro-Jade B staining also showed hippocampus injury, but compared with the EP group, damage to a lesser extent in.C-fos gene, protein and tissue levels were detected and observed in control group the expression of c-fos the low EP group in acute period of EP (4h, 6h) expression increased,.LEV group returned to normal in the acute period of EP in chronic phase (4h, 6h) expression was increased, but the ratio in the EP group, LEV group the expression of c-fos is decreased, the difference was statistically significant (P0.05). For Compared with the high expression of Calretinin, EP in the chronic phase of epilepsy group (7d, 14d, 28d) expression in acute period of EP rapidly decreased, no significant decline. While the LEV group of Calretinin in chronic phase (7d, 14d, 28d) expression decreased than group EP expression was increased, and the comparison among groups of statistics significance (P0.05). Early gene c-fos and calcium binding protein Calretinin test between the two co localization by immunofluorescence double labeling experiments. Conclusion 1. construction in hippocampus of temporal lobe epilepsy rat model of temporal lobe epilepsy rat.2. immediate early gene c-fos in acute epilepsy (4h, 6h) high expression and the calcium binding protein Calretinin in chronic phase EP (14d, 28d) significantly decreased.3. expression of levetiracetam can be reduced to some extent of immediate early gene c-fos in acute epilepsy (4h, 6h) high expression, but compared with Control group, the expression of c-fos was increased. Lacita left B increased calcium combination Protein Calretinin expression in the chronic phase of epilepsy. But compared with group Control, the expression of Calretinin still decreased..4. levetiracetam (LEV) could reduce brain cell injury in rats..5., early gene c-fos and calcium binding protein Calretinin had no co localization in the brain of epileptic rats.

【學(xué)位授予單位】：河南大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R742.1

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本文編號：1416008